培養(yǎng)基(含測試試劑)質(zhì)量控制規(guī)程03-506D模板

1、文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程一、培養(yǎng)基制備要求培養(yǎng)基的一般性狀：液體培養(yǎng)基應(yīng)透明、清亮，顏色符合要求。固體培養(yǎng)基應(yīng)表面濕潤但無水汽、平整光滑，厚薄均勻，一般厚度在3mm（M-H 平板厚度不得 4mm）。斜面的長度不得超過試管長度的2/3) 。PH值應(yīng)在規(guī)定值 0.2 的范圍內(nèi)。培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長。因?yàn)楦鞣N微生物對其營養(yǎng)要求不完全相同，培養(yǎng)目的的不同，各種培養(yǎng)基制備要求如下：1. 根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取，然后溶于蒸餾水中，在使用前對應(yīng)用

2、的試劑藥品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。2. PH 測定及調(diào)節(jié)： PH 測定要在培養(yǎng)基冷至室溫時(shí)進(jìn)行，因在熱或冷的情況下，其 PH 有一定差異，當(dāng)測定好時(shí)，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測試一次。培養(yǎng)基 PH 值一定要準(zhǔn)確，否則會(huì)影響微生物的生長或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養(yǎng)基的PH 降低或升高，故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多，以免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H 后再加入。3. 培養(yǎng)基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長情況，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過濾， 以除去沉淀物， 必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈涼干后使用，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明

3、度。4. 盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。5. 培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到完全滅菌目的，又要注意不因加熱而降編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 1頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00低其營養(yǎng)價(jià)值，一般12115min 即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清、 明膠等，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至 50左右再加入。6. 每批培養(yǎng)基制備好后，應(yīng)做無菌生長試驗(yàn)及所檢菌株生長試驗(yàn)。如果是生化

4、培養(yǎng)基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培養(yǎng)，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng)，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過久，必要時(shí)可置 4冰箱存放。7. 目前各種干燥培養(yǎng)基較多， 每批需用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長試驗(yàn)或生化反應(yīng)觀察，各種培養(yǎng)基用相應(yīng)菌株生長試驗(yàn)良好后方可應(yīng)用， 新購進(jìn)的或存放過久的干燥培養(yǎng)基，在配制時(shí)也應(yīng)測 PH，使用時(shí)需根據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進(jìn)行。8. 每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑、 滅菌情況及菌株生長試驗(yàn)結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備查詢。二、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制主要包括三方面的內(nèi)容： pH 測試、無菌試驗(yàn)以及已知菌生長試驗(yàn)。如果使用商品化脫水培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照說明操作，一般不必再進(jìn)行 pH測試。如果使用基礎(chǔ)

5、物質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)基制備， 在培養(yǎng)基冷卻后須進(jìn)行 pH 測試。如果 pH測得值與預(yù)期值相差 0.2 單位，則需要酸堿調(diào)節(jié)；無菌試驗(yàn)一般為隨機(jī)抽樣 3-5 ，在 35條件下培養(yǎng) 48h。如果抽樣中每個(gè)培養(yǎng)基上出現(xiàn) 2 個(gè)以上菌落，證明本批培養(yǎng)基已被污染；已知菌生長試驗(yàn)的前提條件是實(shí)驗(yàn)室有足夠的已知菌儲(chǔ)備，其中包括標(biāo)準(zhǔn)菌株 ( 如 ATCC或 NCTC標(biāo)準(zhǔn)菌株 ) 及經(jīng)過準(zhǔn)確鑒定的臨床分離菌。如果條件允許，提倡使用標(biāo)準(zhǔn)菌株。有關(guān)常用培養(yǎng)基的已知菌生長試驗(yàn)見表1。編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 2頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程 文件編碼：WHHD

6、SPJT/QM03-506D-00表 1 常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗(yàn)培養(yǎng)基孵育條件已知菌株 (ATCC)預(yù)期結(jié)果血瓊脂需氧或化膿性鏈球菌 19615生長并產(chǎn)生 a- 溶血C0， 24h肺炎鏈球菌 6305生長并產(chǎn)生 - 溶血2大腸埃希菌 25922生長巧克力瓊脂CO 2，24-48h淋病奈瑟菌 43069生長流感嗜血桿菌 10211生長麥康凱瓊脂需氧， 24h大腸埃希菌 25922生長，粉紅色菌落( 不含結(jié)晶紫 )奇異變形桿菌 12453生長，無色菌落，遷徙現(xiàn)象受抑制鼠傷寒沙門菌 14028生長，無色菌落糞腸球菌 29212生長金黃色葡萄球菌 25923生長，粉紅色菌落大腸埃希菌 25922生長

7、，粉紅色菌落麥康凱瓊脂需氧，24h奇異變形桿菌 12453生長，無色菌落，遷徙現(xiàn)象受抑制( 含結(jié)晶紫 )鼠傷寒沙門菌 14028生長，無色菌落糞腸球菌 29212抑制 ( 部分或完全 )編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第3 頁共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00金黃色葡萄球菌 25923抑制 ( 部分或完全 )鼠傷寒沙門菌 14028生長福氏志賀菌 12022生長SS瓊脂需氧， 24h糞腸球菌 29212抑制 ( 部分或完全 )大腸埃希菌 25922抑制 ( 部分或完全 )大腸埃希菌 25922生

8、長營養(yǎng)肉湯需氧， 24-48h金黃色葡萄球菌25923生長( 無添加物 )1、無菌試驗(yàn) 新制備的培養(yǎng)基要按批號隨機(jī)抽取一定數(shù)量的標(biāo)本作無菌試驗(yàn)。無細(xì)菌生長結(jié)果合格，有細(xì)菌生長，說明培養(yǎng)基已受雜菌污染，除了尋找原因外，應(yīng)不再使用。對于分裝后進(jìn)行滅菌的培養(yǎng)基， 一般隨機(jī)抽取 5%10%，置 35卵育24h。對無菌手續(xù)分裝的培養(yǎng)基，則應(yīng)對全部培養(yǎng)基 35卵育 24h。對選擇性培養(yǎng)基，應(yīng)取部分培養(yǎng)基加入 1020 倍無抑制性肉湯培養(yǎng)基如 TSB，稀釋抑制物質(zhì)，置 35卵育 24h。2、細(xì)菌生長試驗(yàn)要用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株按照NCCLS推薦的方法測定培養(yǎng)基性能是否符合要求。保存避光 。避熱。存放陰涼處，其保存期

9、限與所用儲(chǔ)存的容器類型有關(guān)。常用的保存期為：編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 4頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00用脫脂棉堵塞的試管，1 周；用軟木塞堵的試管， 2 周；有旋蓋的容器， 3 周；平皿培養(yǎng)基（放在密封的塑料袋中） ，41 周；平皿培養(yǎng)基，當(dāng)天。表2 5種常用培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定培養(yǎng)基名稱質(zhì)控菌株ATCC鑒定標(biāo)準(zhǔn)血平板金黃色葡萄球菌25923中度到大量生長化膿性鏈球菌19615生長，溶血肺炎鏈球菌6305生長，溶血大腸埃希菌25922生長巧克力平板流感嗜血標(biāo)菌10211生長腦膜炎奈

10、瑟菌13090生長淋病奈瑟菌43096生長SS平板鼠傷寒沙門菌14028生長，無色菌落，有或無黑心福氏志賀菌12022生長，無色菌落糞腸球菌25912全部抑制大腸埃希菌25922部分或全部抑制TCBS平板霍亂弧菌9459生長，黃色菌落副溶血弧菌17802生長，藍(lán)色菌落大腸埃希菌25922部分或全部抑制營養(yǎng)瓊脂平板 福氏志賀菌12022中度到大量生長培養(yǎng)基空氣卵育時(shí)間質(zhì)控菌株（ ATCC 號）預(yù)期結(jié)果24h鼠傷寒沙菌（ 14028）傳代生長肉湯需氧宋內(nèi)氏志賀菌（9290）傳代生長大腸埃希氏菌（25922）傳代受抑制鼠傷寒沙菌（ 14028）生長，無色到琥珀色菌落EMB需氧24h糞腸球菌（ 929

11、0）（部分）大腸埃希氏菌（25922）生長，藍(lán)黑色菌落編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 5頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00鼠傷寒沙菌（ 14028）生長，藍(lán)至藍(lán)綠色菌落，有黑心HE需氧24h福氏志賀氏菌（12022）生長，綠至藍(lán)綠色菌落大腸埃希氏菌（25922）抑制（部分至完全，黃色菌落）用凍存的質(zhì)控菌種最多向下傳三代， 就應(yīng)更換質(zhì)控菌種。 過多的傳代會(huì)增加表型改變的機(jī)會(huì)。制備工作質(zhì)控菌種，用凍存的質(zhì)控菌種接種一個(gè)瓊脂斜面或平板，卵育過夜或得到足夠的量為止。 這些工作瓊脂斜面或平板上的培

12、養(yǎng)物應(yīng)貯存于 28，或者室溫，可放 4 個(gè)星期。菌種再傳代后應(yīng)檢查純度和典型的菌落形態(tài)。厭氧菌的工作質(zhì)控菌株應(yīng)在庖肉培養(yǎng)基或其它適宜的厭氧肉湯培養(yǎng)基中保存，或冷凍保存菌種，不應(yīng)使用瓊脂斜面或平板。三、細(xì)菌染色的質(zhì)量控制染色是細(xì)菌學(xué)檢查最常使用的方法，根據(jù)染色部位及染色目的不同可分為革蘭染色、抗酸染色、鞭毛染色、異染顆粒染色和莢膜染色等。其中革蘭染色和抗酸染色使用頻率最高。 現(xiàn)對這兩種染色方法加以說明。1革蘭染色1) 嚴(yán)格按照標(biāo)本收集程序取樣并涂片2) 對涂片進(jìn)行嚴(yán)格編號或標(biāo)識3) 在固定涂片時(shí)，避免玻片加熱過度4) 染液放置處避免高溫、干燥及灰塵5) 利用過濾的方法去除結(jié)晶紫的固體結(jié)晶6) 如

13、果盧戈氏碘染液褪色，應(yīng)立即更新7) 利用標(biāo)準(zhǔn)菌株 ( 金黃色葡萄球菌 ATCC25923及大腸埃希菌 ATCC25922)或其他已知的革蘭陽性菌及革蘭陰性菌至少每周進(jìn)行一次質(zhì)量驗(yàn)證編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 6頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-002妻一尼染色1) 嚴(yán)格按照標(biāo)本收集程序取樣并涂片2) 對涂片進(jìn)行嚴(yán)格編號或標(biāo)識3) 每次使用新玻片，不可重復(fù)使用4) 在固定涂片時(shí)，避免玻片加熱過度5) 利用過濾的方法去除石炭酸復(fù)紅染液中的沉淀6) 利用已知的抗酸桿菌 (AFB)陽性涂片每周或

14、在更新炭酸復(fù)紅染液時(shí)至少進(jìn)行一次質(zhì)量驗(yàn)證7) 陽性涂片應(yīng)置于專門器具專門地點(diǎn)保存以備復(fù)驗(yàn)8) 陰性涂片至少保存兩周以備復(fù)驗(yàn)四、細(xì)菌鑒定或鑒別常用試驗(yàn)的質(zhì)量控制細(xì)菌鑒定或鑒別主要依據(jù)細(xì)菌的形念特點(diǎn)、染色特點(diǎn)、培養(yǎng)特征、生化反應(yīng)及血清學(xué)特征等。細(xì)菌這些生物表型特征或按固定組合的方式被用于細(xì)菌鑒定， 或以靈活組合的方式用于細(xì)菌鑒定、鑒別及補(bǔ)充試驗(yàn)。無論怎樣，這些生物表型檢測的準(zhǔn)確與否直接影響細(xì)菌鑒定的準(zhǔn)確性。下面將列舉一些常用且較為關(guān)鍵的試驗(yàn)，并對其質(zhì)量控制方法加以說明，見表 2。表 2常用細(xì)菌鑒定或鑒別試驗(yàn)的質(zhì)量控制試驗(yàn)名稱質(zhì)控周期陽性質(zhì)控陰性質(zhì)控質(zhì)控菌結(jié)果質(zhì)控菌結(jié)果觸酶試驗(yàn)每次使用時(shí)金黃色葡萄球

15、菌有氣泡產(chǎn)生化膿性鏈球菌無變化編制人：王飛批準(zhǔn)人：戴春陽第 7頁 共9頁文件類型：操作指導(dǎo)書第01版第 0次修改文件名稱：培養(yǎng)基（含測試試劑）質(zhì)量控制規(guī)程文件編碼：WHHDSPJT/QM03-506D-00凝固酶試驗(yàn)每次使用時(shí)金黃色葡萄球菌與人、兔或豬血表皮葡萄球菌無凝固現(xiàn)象漿產(chǎn)生凝固現(xiàn)象氧化酶試驗(yàn)每次使用時(shí)銅綠假單胞菌根據(jù)方法學(xué)不同可大腸埃希菌無顏色改變產(chǎn)生粉紅色或紫色奧普托欣敏感性試驗(yàn)每周肺炎鏈球菌紙片周圍出現(xiàn)抑菌圈化膿性鏈球菌紙片周圍細(xì)菌均一生長桿菌肽敏感性試驗(yàn)每周化膿性鏈球菌紙片周圍出現(xiàn)抑菌圈無乳鏈球菌紙片周圍細(xì)菌均一生長CAMP試驗(yàn)與被測試菌株同無乳鏈球菌質(zhì)控菌生長條帶在靠化膿性鏈球菌無溶血程度加重區(qū)出現(xiàn)步進(jìn)行金黃色葡萄球菌區(qū)內(nèi)出現(xiàn)溶血加強(qiáng)膽汁溶菌試驗(yàn)每批號 ( 在允許的儲(chǔ)存肺炎鏈球菌菌落溶解緩癥鏈球菌無菌落溶解現(xiàn)象條件和使用期限內(nèi) )膽汁七葉苷試驗(yàn)每批號 ( 在允許的儲(chǔ)糞腸球菌使瓊脂斜面變黑牛鏈球菌瓊脂斜面無黑色出現(xiàn)存條件和使用期限內(nèi) )馬尿酸鹽試驗(yàn)每批號 ( 在允許的儲(chǔ)無乳鏈球菌出現(xiàn)深紫色糞腸球菌無顏色改