實訓(xùn)三細(xì)菌的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)特性觀察實訓(xùn)指導(dǎo)

1、實訓(xùn)三 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)性狀觀察實訓(xùn)指導(dǎo) 實訓(xùn)目標(biāo) 能對不同的被檢材料進行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，觀察細(xì)菌的培養(yǎng)特性，并會進一步移植培養(yǎng)。 儀器及材料 溫箱、病料、實驗用菌種、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、肉渣湯(皰肉)培養(yǎng)基、接種環(huán)、酒精燈、烙刀、鑷子、剪子等。 方法與步驟 一、細(xì)菌的分離培養(yǎng) 1平板劃線分離法 平板劃線是通過將被檢材料連續(xù)劃線而獲得獨立的單個菌落，因而劃線愈長，獲得單個菌落機會也愈多。具體操作步驟如下： (1)右手持接種環(huán)于酒精燈上燒灼滅菌，待冷。(2)無菌操作取病料 若為液體病料，可直接用滅菌的接種環(huán)取病料一環(huán)；若為固體病料，首先將烙刀在酒精燈上滅菌，并立即用其將病料表面燒烙滅菌，然后用滅

2、菌接種環(huán)從燒烙部位插入組織中緩緩轉(zhuǎn)動接種環(huán)，取少量組織或液體。 (3)左手持平皿，用拇指、食指及中指將皿蓋打開一側(cè)(角度大小以能順利劃線為宜，但以角度小為佳，以免空氣中細(xì)菌污染培養(yǎng)基)。(4)將已取被檢材料的接種環(huán)伸入平皿，并涂于培養(yǎng)基一側(cè)，然后自涂抹處成3040°角，以腕力在平板表面輕輕地分區(qū)劃線。在細(xì)菌病診斷或藥敏試驗時，為了提高效率，?？蓪⒚笊w放于酒精燈附近，左手持培養(yǎng)基，使劃線的平面與臺面垂直且在酒精燈附近，右手持接種環(huán)取病料連續(xù)劃線。 (5)劃線完畢，燒灼接種環(huán)，將培養(yǎng)皿蓋好，用記號筆在培養(yǎng)皿底部注明被檢材料及日期，倒置37溫箱中，培養(yǎng)1824h觀察結(jié)果。凡是分離菌應(yīng)在劃線

3、上生長，否則為污染菌。 2傾注分離法 取3支融化后冷至50左右的瓊脂管，用滅菌的接種環(huán)取一環(huán)培養(yǎng)物(或被檢材料)移至第一管中，隨即用掌心搓轉(zhuǎn)均勻，再由第一管取一環(huán)至第二管，搓轉(zhuǎn)均勻后，再由第二管取一環(huán)至第三管經(jīng)同樣處理后，分別倒入三個滅菌培養(yǎng)皿中，待凝固后，倒置于37溫箱中培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。(實圖6) 二、厭氧菌的分離培養(yǎng) 厭氧菌的分離培養(yǎng)常用肉渣湯(皰肉培養(yǎng)基)培養(yǎng)法。先將試管傾斜，使培養(yǎng)基表面露出一點，然后接種被檢材料或菌種，接種后將試管直立，即封閉液面。最后置37溫箱中培養(yǎng)2448h。 三、細(xì)菌移植 1斜面移植 (1)左手持菌種管及瓊脂斜面管，一般菌種管放在外側(cè)，斜面管放在內(nèi)側(cè)，兩管口

4、并齊，管身略傾斜，斜面向上，管口靠近火焰。(2)右手拇指、食指及中指持接種環(huán)在酒精上燒灼滅菌。 (3)將斜面管的棉塞夾在右手掌心與小指之間，菌種管棉塞夾在小指與無名指之間，將二棉塞一起拔出。 (4)把滅菌接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，挑取少量菌苔將其立即伸入斜面培養(yǎng)基底部，由下而上在斜面上彎曲劃線，然后管口和棉塞通過火焰后塞好，接種環(huán)燒灼滅菌。 (5)在斜面管口，寫明菌種名，日期，置37溫箱內(nèi)，培養(yǎng)1824h，觀察生長情況。 2肉湯移植 方法同上，取少許菌落，迅速伸入肉湯管內(nèi)，在接近液面的管壁輕輕研磨，并蘸取少許肉湯調(diào)和，使菌混和于肉湯中。 3從平板移植到斜面 無菌操作打開平皿蓋，挑取少許菌落移于斜面管

5、，方法同上。 4半固體培養(yǎng)基穿刺接種法 方法基本同斜面移植，但用接種針挑取菌落，由培養(yǎng)基表面中心垂直刺入管底，然后由原線退出接種針。 四、細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長特性的觀察 1瓊脂平板培養(yǎng)基 主要觀察細(xì)菌在培養(yǎng)基上形成的菌落的特征。 (1)大小 以直徑(mm)表示，小菌落如針尖大，大菌落為56mm，甚至更大。 (2)形狀 有圓形、不整形、針尖狀、露滴狀、同心圓形、根足形等。(3)邊緣 有整齊、波浪狀、鋸齒狀、卷發(fā)狀等。 (4)表面形狀 光滑、粗糙、同心圓狀、放射狀、皺狀、顆粒狀等。 (5)濕潤度 濕潤、干燥。 (6)隆起度 表面隆起、輕度隆起、中央隆起、臍狀、扣狀、扁平狀。 (7)色澤和透明度 色澤有無色、白、黃、橙、紅等；透明度有透明、半透明、不透明等。 (8)質(zhì)地 分堅硬、柔軟或黏稠。 (9)溶血性 菌落周圍有無溶血環(huán)。有透明的溶血環(huán)稱型溶血；呈很小的半透明綠色的溶血環(huán)稱型溶血；不溶血的為型溶血。 2肉湯培養(yǎng)基： (1)渾濁度 有高度渾濁、輕微渾濁或仍保持透明者。 (2)沉淀 管底有無沉淀，沉淀物是顆粒狀或棉絮狀等。