子宮平滑肌腫瘤的細(xì)胞凋亡及增殖活性研究

1、    子宮平滑肌腫瘤的細(xì)胞凋亡及增殖活性研究        一、材料和方法 1材料：主要取自本教研室19811998年診斷子宮平滑肌腫瘤的存檔蠟塊79份,按Bell等1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分型。其中子宮平滑肌肉瘤26例，子宮平滑肌瘤53例(奇異型8例、上皮樣型3例、核增生活躍型9例、富于細(xì)胞型19例、普通型14例)。2末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)細(xì)胞凋亡：采用德國(guó)寶靈曼公司凋亡檢測(cè)試劑盒。設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黃色。以目鏡測(cè)微網(wǎng)為面

2、積單位在400倍下(面積為0.015 mm2)計(jì)數(shù)網(wǎng)格中的陽(yáng)性細(xì)胞，每例計(jì)數(shù)10個(gè)網(wǎng)格，取其均值做為陽(yáng)性細(xì)胞密度。3DNA含量測(cè)定：石蠟切片行Feulgen染色，應(yīng)用Email-100真彩色像分析系統(tǒng)行DNA含量測(cè)定，并以正常子宮平滑肌細(xì)胞作為正常二倍體(2C)對(duì)照2，計(jì)算機(jī)自動(dòng)統(tǒng)計(jì)每例腫瘤的DNA指數(shù)(DI)，DNA倍體狀態(tài)(nC)，以DI代表腫瘤總體DNA含量。4. 增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）測(cè)定：采用LSAB免疫組織化學(xué)法標(biāo)記單抗PC10（DAKO公司產(chǎn)品）,陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黃色。計(jì)數(shù)方法與檢測(cè)細(xì)胞凋亡相同。5核分裂象計(jì)數(shù)：腫瘤核分裂活躍區(qū)，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野（×400）中的

3、核分裂象平均計(jì)數(shù)。6統(tǒng)計(jì)方法：采用q檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)及直線相關(guān)分析(均用統(tǒng)計(jì)SAS程序包)。二、結(jié)果1TUNEL檢測(cè)結(jié)果：子宮平滑肌肉瘤陽(yáng)性細(xì)胞呈單個(gè)或散在分布，極少數(shù)呈小片狀；平滑肌瘤呈小片狀或彌漫性分布(1，2)。統(tǒng)計(jì)顯示：子宮平滑肌肉瘤凋亡細(xì)胞密度明顯低于平滑肌瘤(P<0.01)及各型平滑肌瘤 (上皮樣型因例數(shù)太少，未統(tǒng)計(jì))，P<0.01，各型平滑肌瘤間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。2細(xì)胞核DNA含量檢測(cè)結(jié)果：子宮平滑肌瘤細(xì)胞：92.5% DNA倍體分布在2C左右，以2C細(xì)胞為主，未超過(guò)4C細(xì)胞；子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞：2C細(xì)胞僅占23.1%，以多倍體細(xì)胞為主。統(tǒng)計(jì)表明：子

4、宮平滑肌肉瘤DI、nC均大于平滑肌瘤及各型平滑肌瘤(上皮樣型未統(tǒng)計(jì))；而各型平滑肌瘤間差異未見(jiàn)顯著性意義(P>0.05)。3PCNA免疫組織化學(xué)染色：子宮平滑肌肉瘤均可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞成片或散在分布；子宮平滑肌瘤僅見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞散在分布(3，4)。統(tǒng)計(jì)顯示：子宮平滑肌肉瘤PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密度明顯高于平滑肌瘤(P<0.01)及各型平滑肌瘤(上皮1子宮平滑肌肉瘤，凋亡陽(yáng)性細(xì)胞散在分布TUNEL×4002奇異型平滑肌瘤，凋亡陽(yáng)性細(xì)胞小灶性分布TUNEL×4003子宮平滑肌肉瘤，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布LSAB法×4004子宮平滑肌瘤，PCNA陽(yáng)性細(xì)胞單個(gè)、散在分布

5、LSAB法×400樣型未統(tǒng)計(jì))，P<0.01，各型平滑肌瘤間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。4子宮平滑肌腫瘤凋亡細(xì)胞密度與PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密度、DNA含量關(guān)系： 直線相關(guān)分析顯示：子宮平滑肌腫瘤總凋亡細(xì)胞密度與PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密度、細(xì)胞核DNA含量均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.490.46，P<0.001)，后兩者呈正相關(guān)(r=0.43,P<0.001)。5隨訪資料：26例子宮平滑肌肉瘤隨訪時(shí)間17 d16年，核分裂象數(shù)10/10HPF伴瘤細(xì)胞中重度異型性的11例患者中，除3例失訪，1例存活，1例因其他疾病死亡外，5例皆在17 d2年內(nèi)死亡，1例術(shù)后5年死于肺、腦轉(zhuǎn)

6、移,其中9例有凝固性壞死或邊界浸潤(rùn)；核分裂象數(shù)10/10HPF伴輕度異型性的8例患者均有凝固性壞死或邊界浸潤(rùn)，2例失訪，3例存活5年以上，2例術(shù)后2年內(nèi)死亡，1例術(shù)后半年盆腔復(fù)發(fā)，再次手術(shù)放療后已存活22個(gè)月；核分裂象59/10HPF的7例患者，均有凝固性壞死或(和)邊界浸潤(rùn)，5例伴中重度異型性，結(jié)果1例術(shù)后4年內(nèi)死亡，1例存活10年以上，余5例失訪。53例子宮平滑肌瘤，隨訪26 d10年，獲訪32例，核分裂象數(shù)5/10HPF者共9例（其中1例高達(dá)20/10HPF，但無(wú)細(xì)胞異型、壞死及浸潤(rùn)），結(jié)果2例失訪(包括核分裂相高達(dá)20/10HPF者)，其余均存活5年以上。 三、討論Staunton和G

7、affney3對(duì)102例惡性腫瘤(58種類型)的凋亡細(xì)胞和凋亡小體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：凋亡的程度與腫瘤類型密切相關(guān)，作者認(rèn)為快速生長(zhǎng)的腫瘤有高的凋亡指數(shù)，而生長(zhǎng)慢的腫瘤則相反。這可能由于腫瘤生長(zhǎng)到一定程度，腫瘤細(xì)胞增殖和死亡維持相對(duì)平衡，增殖快、惡性度高的腫瘤細(xì)胞，凋亡勢(shì)必會(huì)增加。不同器官的腫瘤、其血管生成情況、生理或化學(xué)刺激以及細(xì)胞粘附程度不同也影響凋亡指數(shù)差異4。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：子宮平滑肌肉瘤中，腫瘤細(xì)胞可能逃逸凋亡而無(wú)限增殖，導(dǎo)致凋亡與增殖的失衡。腫瘤細(xì)胞增殖活性的增強(qiáng)與凋亡數(shù)量的下降，使子宮平滑肌肉瘤迅速生長(zhǎng)，反映了腫瘤的惡性程度。而子宮平滑肌瘤中，增殖活性的降低與凋亡數(shù)量的增加，阻止了腫瘤的生

8、長(zhǎng)及惡性轉(zhuǎn)化；細(xì)胞凋亡與增殖失衡在子宮平滑肌腫瘤發(fā)生中可能共同發(fā)揮著重要作用。核分裂象數(shù)為診斷子宮平滑肌肉瘤的重要標(biāo)準(zhǔn)，我們認(rèn)為，核分裂象數(shù)是診斷子宮平滑肌肉瘤的一項(xiàng)重要指標(biāo)，但還應(yīng)結(jié)合細(xì)胞異型性、邊界浸潤(rùn)及凝固性壞死等綜合因素才能對(duì)子宮平滑肌肉瘤作出正確診斷。作者單位：寧燕（重慶醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室 400016）米粲（重慶醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室 400016）李圓圓（重慶醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室 400016）參考文獻(xiàn)1，Bell SW, Kempson RL, Hendrickson MR. Problematic uterine smooth muscle neoplasms:a clinical pathologic study of 213 cases. Am J Surg Pathol, 1994,18:535-558.2，王栩, 劉樹(shù)卿, 劉娜新, 等. DNA計(jì)量分析、正常二倍體參照細(xì)胞及校正因子. 中華病理學(xué)雜志， 1995, 24:390-391.3，Staunton MJ, Gaffney EF. Tumor type is a determinant of susceptibility to apoptosis. Am J Clin Pathol，1995,103:300- 307.4，Shinohara T, Ohsh