膽香鼻炎片藥材有效成分的提取工藝進(jìn)行改進(jìn)

1、1 前 言1.1 中藥提取技術(shù)1.1.1 概述 中藥有效成分的提取是中藥生產(chǎn)過程重要的單元操作，其工藝特點(diǎn)、工藝流程的選擇和設(shè)備配置都直接關(guān)系到被提取有效成分的數(shù)量和質(zhì)量，從而進(jìn)一步影響到產(chǎn)品的質(zhì)量、經(jīng)濟(jì)效益等。因此探明中藥提取的機(jī)理、優(yōu)化提取工藝參數(shù)等逐漸成為中藥生產(chǎn)和研究的重點(diǎn)內(nèi)容。廣義的中藥提取也稱為分離，是指從中藥材原料開始，經(jīng)過一道或多道操作工序，最終的到所需要的藥物或其半成品的全過程。按照分離手段的不同，溶質(zhì)分離方法重要包括機(jī)械方式和化工傳質(zhì)方式。機(jī)械方式即是榨取發(fā)法，通過機(jī)械方法使含液固體組織發(fā)生體積變化和破裂，進(jìn)而分離液體和固體?；髻|(zhì)方式是用液體溶媒從固體藥材中浸出有效成分

2、的操作過程，稱為浸提、浸出或浸取，它是現(xiàn)代中藥生產(chǎn)的重要提取方法。 由于中藥材的藥性、有效派成分的不同，所適用的浸取方式顯然不同，選擇合適的浸取方法與工藝對(duì)浸出生產(chǎn)是保持中藥有效成分的生物活性非常重要。目前浸取生產(chǎn)的傳統(tǒng)方法按固液接觸狀態(tài)可分為靜態(tài)方式和動(dòng)態(tài)方式，具體有煎煮法、浸漬法、滲漉法、回流法等1。1.1.2 煎煮法 煎煮法是以水為提取溶劑，將藥材加熱煮沸一定時(shí)間而獲得煮出液，并重復(fù)進(jìn)行若干次，以提取其有效成分的一種傳統(tǒng)方法，又稱煮提法或煎取法。 本質(zhì)上，水煎煮法是一種強(qiáng)化的浸漬提取方法，只是操作溫度較高，達(dá)到了溶媒沸點(diǎn)，是中藥最早、最常用的制劑方法之一。但水煎煮法的操作工藝基本上是依據(jù)

3、經(jīng)驗(yàn)指導(dǎo)，其工藝參數(shù)，如浸泡及煎煮時(shí)間、次數(shù)、煎出量等均無最佳操控標(biāo)準(zhǔn)，往往導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量或療效的顯著性差異；另外，水作為一種溶媒并不能完全提取所有有效成分；實(shí)際上現(xiàn)代中藥理論研究表明，許多中藥的生物活性對(duì)加熱都有不同程度的敏感，因此使煎煮法的應(yīng)用受到一定限制。1.1.3 浸漬法浸漬法屬于靜態(tài)提取方法，是在常溫或在加熱條件下浸泡藥材，使其所含的有效成分被浸出的方法。通過浸漬法所得到的浸出液在不低于浸漬溫度下能較好地保持其澄清度；操作簡(jiǎn)單易行，但所需時(shí)間較長(zhǎng)，溶劑用量大，出液系數(shù)高，有效成分浸出率低；另外，浸漬狀態(tài)下固液間通常呈靜止?fàn)顟B(tài)，溶劑的利用率低，有效成分浸出不完全。1.1.4 滲漉法將藥材

4、粉碎后裝入特制的滲漉筒或滲漉罐中，從滲漉罐上方連續(xù)通入溶媒，使其滲過罐內(nèi)藥材積層，發(fā)生固液傳質(zhì)作用，從而浸出有效成分，自罐體下部出口排出浸出液，這種方法叫滲漉法。由于浸出液濃度在滲漉過程中不斷提高而密度增大，逐漸向下移動(dòng)，由上層溶劑或更稀浸出液置換其位置，連續(xù)造成較大濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行。（1）.滲漉的特點(diǎn)：滲漉提取過程類似多次浸出過程，浸出液可以達(dá)到較高的濃度，其浸出效果好。不需要加熱，可常溫操作。溶劑用量少，過濾要求低，簡(jiǎn)化了渣液分離操作過程。操作技術(shù)要求高，否則影響提取效率。工藝操作周期較長(zhǎng)。（2）滲漉法工藝流程及工作目的 流程：藥材 粉碎 浸潤 裝筒，排空氣 浸漬 滲漉滲漉各操作

5、工序目的：滲漉提取前藥材需經(jīng)適當(dāng)粉碎才能裝筒。通常，滲漉提取的藥材顆粒多為中等粒度以上，不宜過細(xì)，負(fù)否則增加吸附性，溶劑將難以順利通過，不利于溶質(zhì)的浸出,生產(chǎn)中藥材切片厚度一般為0.5 mm。顆粒過粗則會(huì)減少接觸面積，降低浸出效率；浸潤的目的在于裝筒前就使藥材組織充分膨脹，避免裝罐后堆積過緊或膨脹不均，防止溶劑的流動(dòng)不暢或不均勻通過，影響提取效果，通常浸潤溶劑量為藥材量的0.71倍，充分均勻后放置時(shí)間為14 h；裝筒時(shí)要注意壓力要均勻，松緊合適。裝的過松，溶媒通過速度過快，造成短路，浸提效果不好，且占用容積大，溶媒耗用多。裝的過緊會(huì)使通道阻塞而使?jié)B漉無法進(jìn)行；擴(kuò)散的效果與時(shí)間密切相關(guān)，故滲漉前

6、的浸漬是非常必要的。裝筒完畢后，自上部緩緩?fù)ㄈ肴苊?，則罐內(nèi)藥粉間的殘存空氣便可由罐底部打開的出口排出，至沒有氣泡為止關(guān)閉出口，繼續(xù)加溶媒至高出藥層幾厘米處，加蓋放置2428h。浸漬時(shí)要盡量排出空氣，并阻止空氣重新滲入。否則殘存氣泡將沖擠藥層，使藥粉層原有的松緊改變，產(chǎn)生空隙，溶媒由空隙流過。滲漉過程中，液面應(yīng)始終保持高于藥層，否則表層藥粉會(huì)產(chǎn)生干涸裂縫，溶媒將同樣由空隙流過而影響滲漉。1.1.5 回流法回流法是以乙醇等易揮發(fā)的有機(jī)溶劑不提取溶劑，對(duì)浸出液加熱蒸餾，其中揮發(fā)性溶劑餾出后又被冷凝，重新回到浸出器中繼續(xù)參與浸出過程，循環(huán)進(jìn)行，直到有效成分浸提完全。本質(zhì)上，回流是一種熱浸法。因?yàn)槿軇┑?/p>

7、循環(huán)使用，回流法較滲漉法的溶媒用量少，浸提較完全，但由于回流提取需要連續(xù)加熱，浸出液受熱時(shí)間較長(zhǎng)，故不適用于對(duì)熱敏感型有效成分的浸出。1.2 鼻炎知識(shí)介紹1.2.1 病理介紹鼻炎是一種常見多發(fā)性疾病。主要癥狀是鼻塞，并伴有嗅覺減退，頭痛，流濁涕等。急行鼻炎一般由感冒引起；慢性鼻炎多由急性鼻炎轉(zhuǎn)化而來。其主要分為慢性單純性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎、鼻竇炎、過敏性鼻炎和萎縮性鼻炎等幾個(gè)大類2。（1）慢性單純性鼻炎中醫(yī)稱為“鼻窒”，其鼻粘膜由于各種因素所致的可逆慢性鼻炎疾病，是一種常見多發(fā)病。其主要發(fā)病原因?yàn)榧毙员茄追磸?fù)發(fā)作或治療不徹底。另外，鼻中隔偏曲及鄰近病灶的影響，長(zhǎng)期吸入污染的空氣以致某些全身慢

8、性疾病，如貧血、糖尿病等均可導(dǎo)致慢性鼻炎的發(fā)生。主要診斷要點(diǎn)：鼻阻塞常為交替發(fā)生，鼻涕或多或少，或清或黃。重者鼻阻塞為持續(xù)性，且伴有頭昏、頭脹、咽喉不適。鼻甲肥大，滴收斂劑后可縮小。（2）慢性肥厚性鼻炎又名增生性鼻炎，是一中常見的鼻腔疾病。其發(fā)病原因與全身慢性疾病、維生素缺乏、鼻粘膜反復(fù)急性感染以及慢性化膿性鼻竇炎等因素有關(guān)。其特點(diǎn)為鼻腔持續(xù)性阻塞，鼻粘膜肥厚、增生。（3）鼻竇炎是鼻竇粘膜的非特異性炎癥，為一種鼻科常見多發(fā)病。所謂鼻竇是鼻腔周圍面顱骨的含氣空腔，左右共有4對(duì)：額竇、上合竇、篩竇和蝶竇。因其解剖特點(diǎn)，各竇可單獨(dú)發(fā)病，也可形成多鼻炎或全身鼻竇炎。本病一般分為急性和慢性兩類，其原因很

9、多，較復(fù)雜。急性鼻竇炎多由急性鼻炎導(dǎo)致；慢性鼻竇炎常因急性鼻竇炎未能徹底治愈或反復(fù)發(fā)作而形成。另外，游泳時(shí)污水進(jìn)入鼻竇，鄰近器官感染擴(kuò)散，鼻腔腫瘤妨礙鼻竇引流，以及外傷等均可引起鼻竇炎。診斷要點(diǎn)：急性期：鼻塞，流黃膿涕，眉額或眼眶下壓痛。鼻腔粘膜充血腫脹，中鼻道有積膿。常伴有形寒發(fā)熱，頭昏頭痛。慢性期：不同程度鼻塞，眉額脹痛不適，膿涕不斷，味臭，嗅覺減退，頭昏頭痛上中鼻道有膿性分泌物。中藥辛荑、黃芩、麥冬、牛蒡子、金銀花、魚腥草、薄荷在治療其急性期是有重要作用，而牛蒡子、薄荷、蒼耳子、藿香、菊花可用于其慢性期的治療。（4）過敏性鼻炎 中醫(yī)稱為鼻 其發(fā)病機(jī)理是由于肺虛衛(wèi)氣失固，抵御外邪能力減弱，

10、風(fēng)寒乘虛入侵所致。主要診斷要點(diǎn)為：多在吹風(fēng)受涼時(shí)突然發(fā)作，鼻癢，鼻塞，連續(xù)噴嚏，流清水樣鼻涕，鼻腔粘膜蒼白、水腫。生黃芪、防風(fēng)、白術(shù)、桂枝、蒼耳子、生姜、紅棗常被用此類鼻炎的治療當(dāng)中。（5）萎縮性鼻炎 中醫(yī)稱為鼻藁，俗稱“臭鼻子”。其是由于肺經(jīng)有火，日久肺燥陰傷，鼻失滋養(yǎng)所致。主要診斷要點(diǎn)為：鼻腔寬大，粘膜干燥萎縮，嗅覺減退。結(jié)有黃綠色膿痂，具有特殊嗅味，痂塊堵塞時(shí)感覺鼻塞。伴有頭昏，頭痛，鼻腔及咽喉常感干燥，在膿痂脫落時(shí)可引起輕度鼻出血。鼻炎是一種常見的多發(fā)性疾病，現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)已經(jīng)可以完全予以治愈，但如果粗心大意，不及時(shí)治療，其可以進(jìn)一步引起其他鼻科疾病，如鼻息肉、鼻出血等疾病。1.2.2

11、常用治療鼻炎的中藥鼻炎的是一種常見的多發(fā)性疾病，因此對(duì)其的治療研究從很早就有記載。而治療鼻炎的藥方也很多。如處方1：蒼耳子、辛荑、白芷、藿香、薄荷各10 g，薄荷、桔梗、菖蒲各5 g。其專用于慢性單純性鼻炎的治療。處方2：辛荑、黃芩、山梔、麥冬、牛蒡子各10 g， 金銀花、魚腥草各15 g，薄荷5 g，生石膏30 g。其專用于急性期鼻竇炎的治療。處方3：生黃芪15 g，防風(fēng)、白術(shù)、桂枝、白芍、蒼耳子各10 g，生姜2片，紅棗4個(gè)。其專用于過敏性鼻炎的治療。 在現(xiàn)代的藥藥生產(chǎn)條件下，又產(chǎn)生了許多治療各種類型鼻炎的中成藥。如補(bǔ)中益氣丸、玉屏風(fēng)口服液、鼻炎靈沖劑、千柏鼻炎片，藿膽丸等。1.3 膽香鼻

12、炎片資料1.3.1 膽香鼻炎片處方及制法以1000片制劑為標(biāo)準(zhǔn)豬膽汁膏15 g 廣霍香560 g 白芷560 g蒼耳子450 g 鵝不食草375 g 荊芥250 g 金銀花250 g 野菊花250 g 薄荷腦1.5 g 以上九味，除薄荷腦、豬膽汁膏外，取鵝不食草50 g粉碎成細(xì)粉，過篩，剩余鵝不食草與其余各藥照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下滲漉法（中國藥典2005年版一部附錄11），用65%乙醇為溶劑進(jìn)行滲漉，以每分鐘35 mL的速度緩緩滲漉，收集漉液13500 mL,回收乙醇，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.101.15(80 )的稠膏，與豬膽汁膏合并，干燥，加鵝不食草粉末及輔料適量，制成顆粒，干燥，將

13、薄荷腦研細(xì)，與上述顆粒混勻，壓制成1000片，即得。1.3.2 處方分析處方各味中藥材理化性質(zhì)及藥理作用：（1）豬膽汁膏含膽汁酸，豬去氧膽酸等多種成分。膽汁酸鹽是膽汁的主要成分，有解痙、鎮(zhèn)靜、利膽、止咳、消炎作用。膽汁酸為C17上的R為5個(gè)的側(cè)鏈，為24個(gè)碳原子構(gòu)成的類固醇；其側(cè)鏈末端為羧基，環(huán)上無雙鍵；環(huán)上的羥基都是-構(gòu)型（即在環(huán)平面的下面）。由于膽汁酸分子中既含有親水基團(tuán)（如羥基、羧基），又含有疏水基團(tuán)（如甲基），故溶于水和有機(jī)溶劑，且這兩種不同性質(zhì)的基團(tuán)在空間的排列上是分布在環(huán)戊烷多氫菲的兩側(cè)，這樣，使分子分為親水面和疏水面兩個(gè)側(cè)面，故為很強(qiáng)的乳化劑。對(duì)脂肪的消化、吸收起著重要的作用3。

14、（2）廣藿香含有廣藿香醇、廣藿香酮、丁香烯、廣藿香烯、愈創(chuàng)木烯等多種藥用成分,在本藥品中主要作用成分為廣藿香醇，對(duì)常見致病性真菌和多種致病細(xì)菌有抑制作用，能消炎、解痙、防腐、芳香化濁。廣藿香來源于唇形科植物廣藿香Pogostemoncablin (Blanco) Benth1 的干燥地上部分。原產(chǎn)于菲律賓、馬來西亞、印度等國家,后傳入我國,主要以栽培為主。目前在廣東省的肇慶地區(qū)、湛江地區(qū)、廣州郊區(qū)、海南島均有栽培。揮發(fā)油為廣藿香的主要活性成分,關(guān)于其化學(xué)成分的報(bào)道很多,其廣藿香是臨床上常用的芳香化濕藥,其味辛,性微溫;歸脾、胃、肺經(jīng),具有芳香化濁,開胃止嘔,發(fā)表解暑的功能4。臨床上主要用于濕濁

15、中阻,脘痦嘔吐,暑濕倦怠,胸悶不舒,寒濕閉暑,腹痛腹瀉,鼻淵頭痛等癥的治療。此外,廣藿香所含揮發(fā)油還可以作為化妝品、定香劑和殺蟲劑等日常生活用品的生產(chǎn)配料,是重要的出口創(chuàng)匯的產(chǎn)品。（3）白芷含歐前胡素、白芷醚、呋喃香豆等成分。在本品中主要作用成分為歐前胡素，對(duì)多種致病菌有抑菌作用，還可以消炎、消腫、排膿、止痛。歐前胡素在中性和酸性條件下不溶于水，易溶于石油醚，乙醚等有機(jī)溶劑；呋喃香豆精多為無色結(jié)晶，味苦，具特異香氣，小分子的香豆精能升華，香豆精苷可溶于水、甲醇、乙醇與堿液，難溶于苯、乙醚等有機(jī)溶劑。甙元難溶于冷水，能溶于沸水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚及堿液。香豆素具有、一不飽和內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)，

16、在稀堿溶液中可漸漸水解開環(huán)生成順式鄰羥基桂皮酸的鹽，但它不穩(wěn)定，一經(jīng)酸化，又可復(fù)原。但時(shí)間較長(zhǎng)，或有氧化汞存在，則形成反式鄰羥基桂皮酸，不易再復(fù)原5。（4）蒼耳子含脂肪油以及蒼耳苷、蒼耳醇。對(duì)多種致病菌有抑制作用；通鼻竅、止痛、祛風(fēng)濕。蒼耳子脂肪油中的脂肪酸以油酸和亞油酸為主，其中亞油酸64.2%, 油酸26.8%,易溶于乙醚等有機(jī)溶劑，在高溫和長(zhǎng)時(shí)間放置后會(huì)影響脂肪油的穩(wěn)定性,可引起色澤加深,折光率、酸值增大、易氧化分解。（5）鵝不食草有效成分為其揮發(fā)油，有祛風(fēng)、散寒、勝濕、利九竅作用；治鼻淵、祛息肉6。（6）金銀花金銀花為常用中藥, 具有清熱解毒, 涼風(fēng)散熱的功效。文獻(xiàn)報(bào)道的主要有效成分有

17、如下幾類: 揮發(fā)油,具有抑菌抗病毒的作用; 木犀草素,具有抗菌、消炎、改善心血管功能及解痙, 祛痰,抗癌的作用;酚酸類物質(zhì),綠原酸、異綠原酸具有廣譜抗菌及抗氧化的作用。易溶于水、醇溶液和酮等試劑。 中藥中的廣譜抗菌藥、解毒、清熱；冶各種急性炎癥。主要作用成分為綠原酸，綠原酸是含有羧基和鄰二酚羥基的有機(jī)酸，易溶于水、醇溶液和酮等試劑。 中藥中的廣譜抗菌藥、解毒、清熱；冶各種急性炎癥7。（7）荊芥含檸檬烯、薄荷酮等，有祛風(fēng)、解表、止血、抗菌、抗過敏作用。主要用于過敏性鼻炎的治療藥物中。薄荷酮化學(xué)名為環(huán)戊酮，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑，由于C=O的作用微溶于水。檸檬烯又稱苧烯,學(xué)名為1-甲基-4-異丙基環(huán)

18、己烯,分子式C10H16,分子質(zhì)量136.23。檸檬烯是廣泛存在于天然植物中的單環(huán)單萜，它是除蒎烯外,最重要和分布最廣的萜烯。 檸檬烯是一種無色至淡黃色液體,具有令人愉快的檸檬樣香氣,不溶于水,溶于乙醇!丙酮等有機(jī)溶劑，檸檬烯有三種異構(gòu)體,即右旋檸檬烯、消旋檸檬烯和左旋檸檬烯。它們?cè)谕庥^上沒有什么區(qū)別,都是無色至淡黃色液體,都有新鮮檸檬樣香氣。九味中藥均能抗炎抑菌功能，又蒼耳、白芷、荊芥、薄荷能上升開竅，尤善通力鼻竅，以利助長(zhǎng)諸藥發(fā)揮消炎抑菌之作用直達(dá)鼻竅，故對(duì)慢性、單純性鼻炎、過敏性鼻炎，急慢性副鼻竇炎有極佳的療效。1.3.3 提取工藝簡(jiǎn)析 膽香鼻炎片處方包括的九味中藥，雖然每一味中藥中都能

19、提取出許多藥用成分，而且對(duì)身體的某些病理起到主治或輔助治療的作用，但是只針對(duì)鼻炎而言，每味中藥中僅有一種有效成分。例如，豬膽汁膏的豬去氧膽酸；廣藿香中廣藿香醇；白芷中的歐前胡素；蒼耳子中的蒼耳子醇；荊芥中的薄荷酮，檸檬烯；金銀花、野菊花中的綠原酸等。這些有效成分中，有些能溶解于水中，而有些卻不能，這就決定了膽香鼻炎片的有效成分的提取不能使用水煎煮法提??；浸出法雖然能夠用于本品有效成分的提取，但因其工藝缺點(diǎn)不能很好的達(dá)到提取有效成分和節(jié)約成本的目的，因此也不適用于本品的提取過程。或許是考慮到了膽香鼻炎片中有些成分對(duì)熱的敏感性，如綠原酸，當(dāng)溫度超過80攝氏度時(shí)，其有可能被破壞；再如鵝不食草中的揮發(fā)

20、油等。所以藥典上膽香鼻炎片有效成分的提取工藝采用滲漉法。 目前膽香鼻炎片的生產(chǎn)廠家為吉林涌源藥業(yè)股份有限公司，藥品批準(zhǔn)文號(hào)為：國藥準(zhǔn)字Z22025160。1.3.4 實(shí)驗(yàn)?zāi)康木湍懴惚茄灼?，滲漉法能在不破壞其對(duì)熱敏感物質(zhì)的前提下，最大限度的提取各味中藥的有效成分，但滲漉提取法的操作技術(shù)要求高，且滲漉周期長(zhǎng)，用于工業(yè)大生產(chǎn)的困難度大。陜西康惠制藥有限公司從其企業(yè)以追求利潤的角度出發(fā)，提出將膽香鼻炎片藥材有效成分的提取工藝進(jìn)行改進(jìn)的課題，將原來的滲漉提取改進(jìn)為回流提取，并要求將將兩種提取方法的提取成分進(jìn)行質(zhì)量和含量的對(duì)比，比較其有效成分含量是否變化、提取物中提取成分有無增減、提取的成分是否因工藝

21、的改變而改變、以及有效成分是否因回流受熱而遭到破壞。以兩者之間的對(duì)比結(jié)果為依據(jù)，探討回流提取的工業(yè)可行性，指導(dǎo)工業(yè)生產(chǎn)。2 實(shí)驗(yàn)2.1 滲漉法提取工藝研究2.1.1 相關(guān)儀器設(shè)備及試劑：（1）儀器SGF-130高速粉碎機(jī) 上海天和制藥機(jī)械廠 HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司101A-2型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱上海亞明熱處理設(shè)備司滲漉筒自制火牌B型玻璃儀器氣流烘干器鄭州市上街區(qū)儀器廠（2）材料及試劑廣藿香 112 g 白芷 112 g 蒼耳子 90 g 鵝不食草 75 g 荊芥 50 g 金銀花 50 g 野菊花 50 g 上述藥材共529 g來自省藥材公司酒精（寶雞酒精廠）2.1.2 實(shí)驗(yàn)方

22、法（1）滲漉工藝流程圖以上七味中藥 前處理 鵝不食草10g 其余藥材 粉碎（最粗粉） 滲漉 粉碎（過100目篩） 滲漉液 濾液濃縮 混合 稠膏 真空減壓干燥 膏粉圖2-1 滲漉提取工藝步驟圖（2）實(shí)驗(yàn)操作步驟制作好滲漉裝置后，先在滲漉筒的底部塞一小團(tuán)棉花，然后再鋪上紗布。按照處方量的1/5分別稱取藥材，共529 g。將適量藥材粉末裝入滲漉筒中，壓實(shí)，再繼續(xù)裝入藥材粉末同法處理，裝完藥材后將藥材表面壓緊，蓋上紗布，將滲漉筒固定。用玻璃棒引流向滲漉筒中緩緩加入1450 mL，65%的乙醇，封好筒口，浸泡一天。向滲漉筒中緩緩加入300 mL，65%的乙醇，保持液面高度為3cm左右，打開滲漉閥，開始滲

23、漉，滲漉速度3-5 mL/s,收集滲漉液。及時(shí)補(bǔ)充提取溶劑保持液面的一定高度，共加入提取溶劑4000 mL,收集滲漉液總共為2850 mL。將所收集的滲漉液置蒸發(fā)皿中于水浴鍋上蒸發(fā)至稠膏狀。2.2 回流法提取工藝研究2.2.1 相關(guān)儀器設(shè)備及試劑（1）儀器SGF-130高速粉碎機(jī)上海天和制藥機(jī)械廠HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司MH2000電子調(diào)溫電熱套黃驊市渤海電子設(shè)備廠101A-2型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱上海亞明熱處理設(shè)備公司星火牌B型玻璃儀器氣流烘干器鄭州市上街區(qū)儀器廠三口圓底燒瓶（2）材料及試劑廣藿香 33.6 g 白芷 33.6 g 蒼耳子 27 g鵝不食草 22.5 g 荊芥 1

24、5 g 金銀花 15 g 野菊花 15 g 上述藥材來自省藥材公司酒精（寶雞酒精廠）2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法（1）實(shí)驗(yàn)方案由于要求在不同的實(shí)驗(yàn)條件下用回流提取工藝進(jìn)行九組實(shí)驗(yàn)，再分別以其提取物膏粉作為質(zhì)量檢查和含量測(cè)定的樣品，由其測(cè)定結(jié)果得出最佳的回流工藝條件。由于實(shí)驗(yàn)時(shí)需要將影響回流的各種主要因素考察在內(nèi)，因此實(shí)驗(yàn)安排用正交設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)條件安排如下8：A：提取時(shí)間 B：溶劑用量 C：溶劑濃度 D： 提取溫度表2-3 三因素水平表 水 平 因子 1 2 3 A2h4h 6h B6倍 8倍 10倍 C65% 70% 75% D 80 80 80 表2-4 L9（34）正交安排實(shí)驗(yàn)號(hào) 1 2 3 41

25、A1 B1 C1 D12 A1 B2 C2 D23 A 1 B3 C3 D34 A2 B1 C2 D35A2 B2 C3 D16 A2 B3 C1 D27 A3 B1 C3 D28 A3 B3 C2 D1 （2）制劑工藝流程圖：以上七味中藥 前處理 鵝不食草3g 其余藥材 粉碎（最粗粉） 回流 粉碎（過100目篩） 回流液 濾液濃縮 混合 稠膏 真空減壓干燥圖2-2回流提取工藝步驟圖 膏粉（3）實(shí)驗(yàn)操作步驟藥材的粉碎：除豬膽汁膏、薄荷腦外，其他藥材均應(yīng)進(jìn)行粉碎。取適量鵝不食草進(jìn)行細(xì)粉，過80目篩，稱取45 g于取樣袋中備用，剩余的鵝不食草與其他藥材分別進(jìn)行粗粉（兩遍）?；亓鞣ㄖ苽淞鹘啵?安裝

26、回流裝置。分別稱取一定量的（其中第一組回流樣稱取264.5 g，第2-9組稱取161.5 g）藥材。將稱量好的藥材混合均勻，裝入2000 mL的三角燒瓶中，按實(shí)驗(yàn)方案的條件向燒瓶中加入乙醇溶液，將燒瓶放在電熱套中，加上冷凝裝置，塞好瓶口。打開冷凝水，開啟電熱套開關(guān)，調(diào)節(jié)溫度開始回流。至燒瓶中第5滴液體滴下開始計(jì)時(shí)，瓶?jī)?nèi)溫度為80 ?；亓鲿r(shí)間、回流次數(shù)由實(shí)驗(yàn)安排決定，收集回流液，將所收集的濾液置蒸發(fā)皿中于水浴鍋上（溫度不高于80 ）蒸發(fā)至稠膏狀。2.3質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查2.3.1儀器與試劑（1）儀器HPD-25真空抽慮機(jī) 上海精密科學(xué)儀器有限公司電子稱Spidei60 上海精密科學(xué)儀器有限公司SB32

27、00超聲波清洗儀 國華電器有限公司ZF-2型三用紫外分析儀 上?？岛坦怆妰x器有限公司HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司PBQ-型薄層自動(dòng)鋪板器 重慶南岸新力實(shí)驗(yàn)電器廠島津LC-10AD型高效液相色譜儀、SPD10AVP型紫外檢測(cè)器、LC10Atvp型泵、C18(250×4.6)色譜柱。（2）材料及試劑質(zhì)量鑒別所需的藥物均來自上述實(shí)驗(yàn)提取的膏粉無水乙醇（分析純） 西安三浦精細(xì)化工廠石油醚（分析純） 天津富宇精細(xì)化工有限公司甲酸（分析純） 天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心乙酸乙酯（分析純） 天津市津北精細(xì)化工有限公司二氯甲烷（分析純） 天津市化學(xué)試劑六廠苯（分析純） 天津市化學(xué)試劑三廠

28、甲醇（分析純） 天津市百世化工有限公司冰醋酸（分析純） 天津市巴斯夫化工有限公司三乙胺（分析純） 西安化學(xué)試劑廠糠醛（分析純） 天津市博迪化工有限公司香草醛（分析純） 西安中信精細(xì)化工有限責(zé)任公司三氯化鋁 西安化學(xué)試劑廠濃硫酸（分析純） 洛陽市化學(xué)試劑廠硅膠G （化學(xué)純） 青島海浪硅膠干燥劑廠2.3.2薄層鑒別（1）鵝不食草的顯微鑒別：莖表皮非腺毛細(xì)長(zhǎng)而扭曲，直徑320 m，為單細(xì)胞，壁薄。葉表面非腺毛少見，由46個(gè)細(xì)胞組成，基部細(xì)胞直徑4060 m，頂端細(xì)胞窄細(xì)，扭曲成鞭狀，花冠非腺毛平直或微彎，長(zhǎng)120180 m，直徑48 m，由12個(gè)細(xì)胞組成，壁稍厚。花粉粒類圓形或卵圓形，直徑1820

29、m，外壁具短小刺，有3個(gè)萌發(fā)孔。（2）取本品0.7 g，除去糖衣，研細(xì)，加乙醇15 mL,溫浸15 min，濾過，取濾液3 mL置水浴上蒸干，殘?jiān)?0%醋酸1 mL使溶解，加新制的1%糠醛硫酸溶液1 mL，于70水浴中加熱10 min，溶液逐漸顯紫黑色。（3）取鑒別（2）項(xiàng)下的濾液，點(diǎn)于濾紙上，干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視，呈紫藍(lán)色熒光，再噴灑1%三氯化鋁乙醇溶液，呈黃色熒光。（4）取本品3.5 g片，除去糖衣，研細(xì)，加入石油醚（30 60 ）20 mL，置于35水中超聲處理30 min，濾過，濾液低溫蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴? mL溶解，作為供試品溶液。另取廣藿香對(duì)照藥材1 g,同法

30、制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液1020 L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（3060）醋酸乙酯甲酸（85:15:2）為展開劑，展開，取出，涼干，噴以5%香草醛硫酸溶液，100加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。薄層圖譜見結(jié)果與討論。（5）取本品1.75 g，除去糖衣，研細(xì)，加入二氯甲烷10 mL,冷卻過夜，過濾，濾液作為供試品溶液。另取白芷對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液10 L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯（10:1）為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈（365 n

31、m）下檢視。薄層圖譜見結(jié)果與討論。（6）取本品1.75 g，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇20 mL,置水浴上加熱，充分振搖，放置10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄B）試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1 L，供試品溶液2 L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。此標(biāo)準(zhǔn)為原標(biāo)準(zhǔn)中綠原酸的薄層鑒別，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。2.3.3含量測(cè)定 照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附

32、錄D）9測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(20:85:1:0.3)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324 nm；柱溫為室溫；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于200010。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含0.05 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液（10 以下保存）。供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱重，研細(xì)，取約2.0 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%的甲醇適量，超聲處理30 min使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 l，注入液

33、相色譜儀，測(cè)定，即得。其測(cè)定結(jié)果見第三章。 3 結(jié)果與討論3.1提取物的干燥結(jié)果將滲漉和回流提取所得的稠膏分別置于蒸發(fā)皿中，標(biāo)上編號(hào)，放在托盤中，進(jìn)行真空減壓干燥。所得膏粉重量及收膏率如下：表3-1 收膏率考察結(jié)果 實(shí)驗(yàn)序號(hào) 取樣量(g) 收膏量(g) 收膏率（%）滲漉樣 529.0 83.50 15.78回流樣1 264.5 37.80 14.29回流樣2 161.7 14.95 9.25回流樣3 161.7 20.56 12.71回流樣4 161.7 21.88 13.53回流樣5 161.7 20.74 12.83回流樣6 161.7 22.00 13.61回流樣7 161.7 24.2

34、0 14.97回流樣8 161.7 26.80 16.57回流樣9 161.7 24.67 15.26由上表可知滲漉樣的收膏率要普遍高于回流樣的收膏率。3.2質(zhì)量檢查結(jié)果3.2.1薄層鑒別結(jié)果（1）廣藿香有效成分薄層圖譜 對(duì)照樣 滲漉樣 回流樣1樣2 驗(yàn)證樣 365 nm紫外光下檢視 噴5%香草醛硫酸溶液圖3-1廣藿香有效成分薄層鑒別圖 圖3-2廣藿香薄層顯色圖結(jié)果顯示供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點(diǎn)。其它回流樣在365 nm紫外光下的檢視結(jié)果、噴灑5%香草醛硫酸溶液后觀察結(jié)果與上圖相似。此標(biāo)準(zhǔn)為原標(biāo)準(zhǔn)中廣藿香醇的薄層鑒別，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。（2）白芷有效成分

35、薄層圖譜 對(duì)照樣 滲漉樣 回流樣1樣2 樣3 樣4 驗(yàn)證樣圖3-3白芷有效成分薄層鑒別圖結(jié)果顯示供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點(diǎn)。其它回流樣在365 nm紫外光下的檢視結(jié)果、噴灑5%香草醛硫酸溶液后觀察結(jié)果與上圖相似。此標(biāo)準(zhǔn)為原標(biāo)準(zhǔn)中歐前胡素的薄層鑒別，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。（3）其它藥材有效成分薄層鑒別結(jié)果實(shí)驗(yàn)表明：實(shí)驗(yàn)樣品能在硅膠板上有與標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜行為。3.2.2綠原酸含量測(cè)定（1）高效液湘圖譜及峰面積圖3-4對(duì)照品 (0.0355 mg/mL,20 L,2775086)圖譜圖3-5供試品滲漉樣(1.0004 g/50mL,5 L,9224182vs)圖

36、譜圖3-6供試品回流樣8(2.0003g/100mL,5 L,9374940vs) 圖譜由以上圖譜分析可知供試品與對(duì)照品的出峰時(shí)間相當(dāng),均在十一分鐘左右,峰面積相差不大,分離度均大于1.5,脫尾現(xiàn)象不明顯.其它回流樣也有著相同的液湘圖，并將其附在附錄中。（2）綠原酸含量計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組高效液湘測(cè)定綠原酸峰面積結(jié)果如下:表3-2 各樣品峰面積表 內(nèi)容品名取樣量(g)供試品峰面積(Vs)平均峰面積(Vs)滲漉樣1.000413509097922418211366640回流樣12.0005951434672431458378745.5回流樣22.0004751040868706167190284.5回流

37、樣32.0002803298773687937700890回流樣41.9988761051979812667795892.5回流樣52.0015805959385737028316647.5回流樣62.0004958352092640659423792.5回流樣72.0003915513792749409265038.5回流樣81.0005874618284618198604000.5回流樣90.5000775980286389678199384.5對(duì)照品濃度 對(duì)照品峰面積 平均峰面積 (Vs) (Vs)27750860.0355mg/mL 2771857.52768629計(jì)算公式 （3-1）

38、 由上述公式計(jì)算得供試品含量表3-3 十種樣品綠原酸含量測(cè)定結(jié)果 內(nèi)容品名取樣量(g)平均峰面積(Vs)稀釋倍數(shù)(mL)供試品中綠原酸含量(%)滲漉樣1.000411366640502.91回流樣12.00058378745.51002.14回流樣22.00047190284.51001.84回流樣32.000277008901002.01回流樣41.99887795892.51002.00回流樣52.00158316647.51002.13回流樣62.00049423792.51002.42回流樣72.00039265038.51002.37回流樣81.00058604000.5502.20

39、回流樣90.50008199384.5252.10由綠原酸含量測(cè)定的結(jié)果，得出以下結(jié)論：滲漉提取物中綠原酸的含量高于回流提取的含量 ，但兩種聽取方法都能使綠原酸含量不低于1.2%，符合標(biāo)準(zhǔn)。3.3正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果直觀分析表3-4 L9（34）正交表及考察指標(biāo)結(jié)果L9(34)正交表 因素 試驗(yàn)號(hào)ABC指標(biāo)得分溶劑量時(shí)間溶劑濃度出膏率（%）綠原酸含量（%）11 1 1 14.29 2.148221 2 2 9.25 1.8461.931 3 3 12.71 2.0172.542 1 2 13.53 2.0073.452 2 3 12.83 2.1377.862 3 1 13.61

40、 2.4281.773 1 3 14.97 2.3788.483 2 1 16.57 2.2084.493 3 2 15.26 2.1079.7k172.133 81.267 82.700 79.833k277.63374.70071.667 77.733 k384.167 77.96779.567 76.767 R12.0346.567 11.0333.066 因素主次A>C>B>D最佳組合 A3B1C3 3.3.2正交實(shí)驗(yàn)的曲線效應(yīng)圖圖3-7正交實(shí)驗(yàn)曲線效應(yīng)圖從正交設(shè)計(jì)輸出的曲線效應(yīng)圖上，我們可以得出下列結(jié)論：a、隨這提取溶劑用量的增大，對(duì)綜合指標(biāo)的影響也隨之增大。當(dāng)溶劑

41、用量大于8倍量時(shí)，對(duì)綜合指標(biāo)的影響的增大的速度明顯加快，這一效果明顯的表現(xiàn)在溶劑量對(duì)綜合指標(biāo)的影響的曲線斜率上。b、綜合指標(biāo)與提取時(shí)間的關(guān)系是，在24h區(qū)間內(nèi)，其隨提取時(shí)間減少；在46h區(qū)間內(nèi)，隨時(shí)間增大。但仍然以2h對(duì)綜合指標(biāo)的影響最大。見提取時(shí)間對(duì)綜合指標(biāo)影響圖。c、綜合指標(biāo)與提取溶劑濃度的關(guān)系曲線和綠原酸與提取時(shí)間的關(guān)系曲線的變化相似，在65%70%酒精濃度區(qū)間內(nèi)，影響隨濃度減小，在70%75%酒精濃度區(qū)間內(nèi)，影響程度隨濃度增大而增大，但增大曲線的斜率要小于減小曲線的斜率。所以仍然以65%酒精濃度的影響程度最大。d、從曲線效應(yīng)圖可以看出，溶劑濃度、提取時(shí)間這兩因素效應(yīng)曲線沒有出現(xiàn)曲線拐點(diǎn)

42、，所以此兩因素的最佳提取條件不在本次實(shí)驗(yàn)考查的范圍內(nèi)。e、通過對(duì)正交設(shè)計(jì)曲線效應(yīng)圖的分析，在本組實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，我們得出正交設(shè)計(jì)最佳操作工藝條件為：10倍劑量，65%濃度的酒精，提取2h，既A3B1C1。這一結(jié)果與正交設(shè)計(jì)的直觀分析不一致，這說明用回流法提取的最佳工藝操作條件在設(shè)計(jì)之外，因此需要再進(jìn)行一組實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。3.4兩種提取方式的對(duì)比分析通過長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，本小組得出了對(duì)滲漉提取和回流提取這兩種不同提取方式的對(duì)比結(jié)果：a、從廣藿香和白芷有效成分的薄層鑒別上可以得出，兩種提取方式都能將藥物的有效成分提取出來。在廣藿香薄層上Rf=0.4的位置有各樣品有效成分的斑點(diǎn)，在白芷薄層上Rf=0.3,0.5,