牛大力祛痰、鎮(zhèn)咳和平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、牛大力祛痰、鎮(zhèn)咳和平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究    【摘要】  目的觀察牛大力的祛痰、鎮(zhèn)咳及平喘作用。方法通過(guò)小鼠氣管酚紅法、家鴿纖毛運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、小鼠濃氨水引咳法、豚鼠枸櫞酸引咳法及豚鼠組胺-乙酰膽堿超聲霧化法觀察牛大力的祛痰鎮(zhèn)咳平喘作用。結(jié)果牛大力能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，促進(jìn)家鴿氣管內(nèi)墨汁運(yùn)動(dòng)，減少氨水引發(fā)小鼠和枸櫞酸引發(fā)豚鼠咳嗽反應(yīng)的次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，對(duì)抗組胺-乙酰膽堿引起的豚鼠支氣管哮喘(均P<0.05或P<0.01)。結(jié)論牛大力具有一定的祛痰、鎮(zhèn)咳及平喘作用。 【關(guān)鍵詞】  牛大力/藥理學(xué) 慢性支氣管炎/中藥療法

2、疾病模型 動(dòng)物 小鼠 豚鼠 家鴿牛大力(Radix Millettiae Speciosae，RMS)，為蝶形花科植物美麗崖豆藤M(fèi)illetia speciosa Champ的干燥根。功能補(bǔ)虛潤(rùn)肺、 強(qiáng)筋活絡(luò)，臨床證明對(duì)腰肌勞損、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核 、慢性支氣管炎等有一定療效1。本文通過(guò)觀察牛大力的祛痰、鎮(zhèn)咳及平喘等作用，為該藥臨床用藥提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)KM小鼠，體質(zhì)量1822g;SPF級(jí)豚鼠，體質(zhì)量250300g，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK粵20030001。1.2 受試藥物 牛大力水提物由廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥理教研室提供，濃

3、縮液濃度為1g/mL，使用時(shí)用蒸餾水稀釋成不同的濃度。1.3 藥品、試劑與儀器 美沙芬由廣州白云山光華制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：727008;氨茶堿由天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：784136;氨水由廣東光華化學(xué)廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20070806;酚紅由上海三愛(ài)思試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：0040309;枸櫞酸由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：00605032;醋酸由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：06040204;氫氧化鈉由天津市百世化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：006730;UNICO7200型光柵分光光度計(jì)由尤尼柯(上海)儀器有限公司提供;YLS6B智能熱板儀由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn);超聲霧

4、化器由江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)。1.4 牛大力對(duì)小鼠酚紅祛痰的影響2 取KM小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，即空白組，陽(yáng)性對(duì)照組，牛大力水提物高(20g·kg-1·d-1)、中(10g·kg-1·d-1)、低(5g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽(yáng)性對(duì)照組以沐舒坦30mg·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)5d。于末次給藥后30min，腹腔注射50g/L酚紅生理鹽水溶液0.5mL/只，30min后小鼠脫頸椎處死，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處一段氣管放入盛有2mL生理鹽水的試

5、管中，剪開浸泡10min后，加1mol/LNaOH溶液0.1mL，離心取上清液采用紫外分光光度計(jì)于波長(zhǎng)546nm處測(cè)定吸光度D值。1.5 牛大力對(duì)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)的影響3 取家鴿50只，隨機(jī)分為5組，分別為空白組，陽(yáng)性對(duì)照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽(yáng)性對(duì)照組以20mg·kg-1·d-1劑量的沐舒坦灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)3d。末次給藥后手持家鴿頸部拉直與水平面平行，拔除頸部毛，不麻醉，背位固定，沿頸中線切開，剝離氣

6、管，將周圍軟組織分離清楚，使氣管自甲狀軟骨至胸骨段充分暴露，并小心將氣管表面外膜剝離干凈，于末次給藥后0.5、1、2h以5號(hào)針頭從靠心臟端插入氣管，使針頭靠近氣管內(nèi)壁推入0.05mL中華墨汁，觀察1min內(nèi)墨汁沿氣管向前運(yùn)動(dòng)的距離。1.6 牛大力對(duì)小鼠氨水引咳的鎮(zhèn)咳作用4-5 分組和給藥方法同1.4項(xiàng)下。陽(yáng)性對(duì)照組按美沙芬10mg·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)5d。末次給藥1h后將小鼠放入玻璃鐘罩內(nèi)，用超聲霧化器將濃氨水均勻地噴入玻璃鐘罩內(nèi)，噴霧10s，立即取出小鼠，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和4min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。1.7 牛大力對(duì)豚鼠枸櫞酸引咳的鎮(zhèn)咳

7、作用6 采用豚鼠枸櫞酸引咳法(序貫法)，以175mg/L枸櫞酸在玻璃鐘罩內(nèi)連續(xù)噴霧90s，觀察5min內(nèi)咳嗽次數(shù)進(jìn)行篩選，咳嗽次數(shù)小于10次者棄除。將篩選合格的豚鼠分為5個(gè)組，分別為空白組，陽(yáng)性對(duì)照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽(yáng)性對(duì)照組以8mg·kg-1·d-1美沙芬灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)5d。于末次給藥后1h(美沙芬0.5h)，按預(yù)選方法，用枸櫞酸引咳，觀察豚鼠自噴霧開始至出現(xiàn)咳嗽的潛伏期及噴霧停止后5min內(nèi)的

8、咳嗽次數(shù)。1.8 牛大力對(duì)豚鼠的平喘作用7-8 取250300g豚鼠，按整體噴霧致喘法，用4g/L磷酸組胺與20g/L氯化乙酰膽堿以體積比1：2混合液超聲霧化器噴霧25s致喘，挑選潛伏期在150s內(nèi)出現(xiàn)哮喘的豚鼠為合格的敏感動(dòng)物。將合格豚鼠分為5個(gè)組，分別為空白組，陽(yáng)性對(duì)照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽(yáng)性對(duì)照組以氨茶堿1.2g·kg-1·d-1劑量灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續(xù)7d。于末次給藥后1h(氨茶堿0.5h)，按預(yù)

9、選方法記錄各組動(dòng)物出現(xiàn)哮喘的潛伏期。1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)分析。2 結(jié)果2.1 牛大力對(duì)小鼠酚紅祛痰的影響 表1結(jié)果表明，牛大力水提物能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)，隨著劑量的增加，祛痰作用增強(qiáng)，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。提示牛大力水提物具有較好的祛痰作用。2.2 牛大力對(duì)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)的影響 表2結(jié)果表明，牛大力水提物高劑量組藥后1h炭末推進(jìn)距離與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)，表明其對(duì)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)有明顯的影響。2.3 牛大力對(duì)小鼠氨水引咳的鎮(zhèn)咳作用 表3結(jié)果表明，牛大力水提物能顯著延長(zhǎng)咳

10、嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)。提示牛大力水提物對(duì)氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽有較好的鎮(zhèn)咳作用。2.4 牛大力對(duì)豚鼠枸櫞酸引咳的鎮(zhèn)咳作用 表4結(jié)果表明，不同劑量的牛大力水提物均能延長(zhǎng)枸櫞酸引咳豚鼠的咳嗽潛伏期，減少豚鼠5min內(nèi)的咳表1 各組對(duì)小鼠酚紅祛痰的影響表2 各組對(duì)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)的影響表3 各組對(duì)小鼠氨水引咳的鎮(zhèn)咳作用比較嗽次數(shù)，以高劑量組效果顯著，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。提示牛大力水提物對(duì)枸櫞酸引咳的豚鼠有一定的鎮(zhèn)咳作用。2.5 牛大力對(duì)豚鼠的平喘作用 表5結(jié)果表明，不同劑量的牛大力水提物對(duì)組胺-乙酰

11、膽堿誘發(fā)的哮喘有明顯的保護(hù)作用，能使引喘潛伏期顯著延長(zhǎng)，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.01)。提示牛大力水提物有較好的平喘作用。表4 各組對(duì)豚鼠枸櫞酸引咳的鎮(zhèn)咳作用表5 各組對(duì)豚鼠的平喘作用比較3 討論到目前為止，有關(guān)牛大力對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的藥理研究尚未見(jiàn)報(bào)道，臨床證明其對(duì)慢性支氣管炎有一定療效，本實(shí)驗(yàn)從鎮(zhèn)咳、袪痰和平喘三個(gè)方面對(duì)其進(jìn)行了初步研究，目的為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供可靠的藥理學(xué)依據(jù)。慢性支氣管炎是由于感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的一種慢性非特異性炎癥，臨床主要表現(xiàn)為咳、喘、痰癥狀，因而鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘在慢性支氣管炎的癥狀控制中起重要的作用。文獻(xiàn)報(bào)道9化

12、學(xué)物質(zhì)氨水、枸櫞酸可通過(guò)刺激呼吸道感受器，引起支氣管平滑肌收縮，興奮引發(fā)神經(jīng)沖動(dòng)，激活腦內(nèi)咳嗽中樞從而引起咳嗽反射。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牛大力水提取物能顯著抑制氨水引發(fā)小鼠咳嗽反應(yīng)次數(shù)及枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，說(shuō)明該藥可作用于有關(guān)的化學(xué)感受器，保護(hù)支氣管黏膜免受刺激，達(dá)到鎮(zhèn)咳效果。痰是由氣管、支氣管的腺體和杯狀細(xì)胞所分泌，它的存在是引起咳嗽以致喘息的重要原因。痰液的清除有賴于黏液膠的物理特性和黏液、氣道及纖毛之間的相互作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牛大力水提取物能增加小鼠氣管酚紅排出量，加速家鴿氣管黏膜的黏液纖毛運(yùn)動(dòng)，表明其可促進(jìn)腺體分泌，使分泌量增加，稀釋痰液從而達(dá)到化痰祛痰作用。中醫(yī)認(rèn)

13、為哮喘是宿痰內(nèi)伏于肺，遇誘因而引發(fā)，使痰阻氣道，肺失肅降，氣道攣急。文獻(xiàn)報(bào)道10組胺可通過(guò)興奮體內(nèi)H1和H2組胺受體產(chǎn)生廣泛而復(fù)雜的生理和病理作用。本實(shí)驗(yàn)采用磷酸組胺和氯化乙酰膽堿混合液復(fù)制豚鼠哮喘模型，主要是由于在哮喘急性發(fā)作時(shí)，這兩種物質(zhì)是導(dǎo)致氣管痙攣收縮的主要介質(zhì)，結(jié)果表明，牛大力水提取物對(duì)組胺-乙酰膽堿誘發(fā)的哮喘有保護(hù)作用，能對(duì)抗組胺、乙酰膽堿等過(guò)敏介質(zhì)引起的氣管、支氣管收縮，明顯延長(zhǎng)哮喘潛伏期。綜上所述，牛大力水提取物具有止咳、祛痰及平喘作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1全國(guó)中草藥匯編編寫組.全國(guó)中草藥匯編(上冊(cè))M.第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：200.2唐汝愚.桔梗遠(yuǎn)志

14、半夏的祛痰作用研究J.中華醫(yī)學(xué)雜志，1952，38：4.3劉威.臭冷杉精油的鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用J.中草藥，1990，21(6)：28.4溫文川，馮泳虹，譚毓治.泰鎮(zhèn)咳浸膏的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎和平喘作用J.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，16(2)：114.5王國(guó)杰，李群，肖洪斌，等.射干麻黃沖劑鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的實(shí)驗(yàn)報(bào)告J.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1990，3：1990.6黃慶彰.中藥的鎮(zhèn)咳作用:半夏與貝母J.中華醫(yī)學(xué)雜志，1954，40(5)：325.7方泰惠，許崽琴，金勝娥，等.麝香定喘膏平喘作用實(shí)驗(yàn)研究J.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，11(2)：2.8許惠琴，方泰惠，張培祥，等.寒喘平、熱喘平口服液平喘作用研究J.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，15(5)：297.9Ricciardolo F L，Rado V，F(xiàn)abbri L M，et a1.Bronchoconstr