潔凈區(qū)環(huán)境測(cè)試操作規(guī)程

1、潔凈區(qū)環(huán)境測(cè)試操作規(guī)程頒發(fā)部門：質(zhì)量部分發(fā)部門：生產(chǎn)部、設(shè)備部、質(zhì)量部、采購(gòu)部、倉(cāng)儲(chǔ)部、財(cái)務(wù)部一、目的：建立一個(gè)空氣潔凈度監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)范空氣潔凈度監(jiān)測(cè)操作程序，保證細(xì)胞生產(chǎn)潔凈車間的空氣潔凈度符合GMP 要求。二、范圍：適用細(xì)胞生產(chǎn)潔凈車間的空氣潔凈度的監(jiān)控。三、職責(zé)/依據(jù)：質(zhì)量部負(fù)責(zé)該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制訂，并監(jiān)督制度的執(zhí)行；質(zhì)量保證部和質(zhì)量控制部門負(fù)責(zé)該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的實(shí)施；質(zhì)量保證部門對(duì)進(jìn)行監(jiān)督與檢查。四、程序/內(nèi)容：1 概述1.1潔凈廠房是指根據(jù)需要對(duì)空氣的塵粒（包括微生物）、風(fēng)速、溫濕度及壓力等進(jìn)行控制的密閉環(huán)境，其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的

2、功能，并以其空氣潔凈度等級(jí)符合藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的要求。1.2 潔凈廠房分為：D級(jí)、C級(jí)，B級(jí)、A級(jí)。本公司細(xì)胞生產(chǎn)潔凈區(qū)為D級(jí)、C級(jí)和局部A級(jí)。2 沉降菌測(cè)試2.1 方法概述本測(cè)試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)48 小時(shí)以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)，來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。2.2 所用設(shè)備及儀器高壓滅菌鍋：使用時(shí)嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用恒溫培養(yǎng)箱：定期對(duì)培養(yǎng)箱溫度進(jìn)行檢定2.3 培養(yǎng)皿：一般采用90mm×15mm玻璃培養(yǎng)皿。2.4 培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約4

3、5，在無(wú)菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿放入3035恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)皿應(yīng)在28的環(huán)境中存放。2.5 測(cè)試步驟1）采樣將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。 靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30分鐘以上；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為4小時(shí)，單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用多個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)并累積計(jì)數(shù)。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿蓋上蓋子，倒置放置。2）培養(yǎng)全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在 3035培

4、養(yǎng)，時(shí)間不少于72h。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3 只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。3）菌落計(jì)數(shù)用肉眼直接計(jì)數(shù)。若培養(yǎng)皿上有2 個(gè)或2 個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或2 個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。2.6 注意事項(xiàng)1）測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、準(zhǔn)確性。2）采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。3）對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。4）由于細(xì)菌種類繁多、差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。5）采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔

5、除。2.7 測(cè)試規(guī)則1）測(cè)試狀態(tài)沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告及記錄中注明測(cè)試狀態(tài)。2）測(cè)試人員測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2 個(gè)人。3）測(cè)試時(shí)間靜態(tài)測(cè)試時(shí)，潔凈廠房的空氣凈化調(diào)節(jié)系統(tǒng)的風(fēng)機(jī)啟動(dòng)30分鐘后開始測(cè)試。動(dòng)態(tài)測(cè)試，在生產(chǎn)人員處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行的測(cè)試。對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10 分鐘后開始。對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30 分鐘開始。4）

6、沉降菌計(jì)數(shù)采樣點(diǎn)數(shù)目及布置：采樣點(diǎn)布置參考圖1，工作區(qū)測(cè)試點(diǎn)位置離地0.81.5m 左右（略高于工作面）。最少采樣點(diǎn)數(shù)目，沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定?？稍陉P(guān)鍵設(shè)點(diǎn)或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過(guò)于集中，某局部區(qū)域過(guò)于稀疏。圖1 沉降菌采樣點(diǎn)數(shù)目及布置圖表1最低限度采樣點(diǎn)數(shù)面積(m2)潔凈級(jí)別A級(jí)B級(jí)C級(jí)D級(jí)<1023232210S20442220S40882240S100161642100S2004040103200S4008080206400S100016016040131000S200040040010032200080080020

7、063注:表中面積，對(duì)于單向流(層流)潔凈室,是指送風(fēng)面面積；對(duì)于亂流潔凈室，是指房間面積。2.8 記錄：測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試數(shù)據(jù)。2.9 結(jié)果計(jì)算1）用計(jì)數(shù)方法提出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。2）平均菌落數(shù)的計(jì)算見(jiàn)下式：平均菌落數(shù) m = 式中： m 為平均菌落數(shù)；m1 為1 號(hào)培養(yǎng)血菌落數(shù)；m2為2 號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n 為培養(yǎng)皿總數(shù)。 3）動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)，如果培養(yǎng)皿暴露時(shí)間小于4小時(shí)，最終的菌落計(jì)數(shù)（cfu4h）應(yīng)為： 最終菌落計(jì)數(shù)M=m/實(shí)際暴露時(shí)間×4式中： m 為平均菌落數(shù)；M為最終累計(jì)4小時(shí)菌落計(jì)數(shù)。2.10 結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中

8、的微生物。1）潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表3。表3評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)潔凈級(jí)別A級(jí)B級(jí)C級(jí)D級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（平均）cfu/4小時(shí)< 15501002）若某潔凈室（區(qū)）較平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新測(cè)試兩次，測(cè)試結(jié)果必須符合要求。3. 塵埃粒子測(cè)試3.1 概述：潔凈區(qū)懸浮粒子監(jiān)測(cè)采用計(jì)數(shù)濃度法，即通過(guò)測(cè)定潔凈區(qū)環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來(lái)評(píng)定潔凈室（或潔凈區(qū)）的懸浮粒子潔凈度等級(jí)。3.2 儀器：Metone-3400型微塵粒子計(jì)數(shù)器。3.3 監(jiān)測(cè)原理：空氣中懸浮粒子在光的照射下產(chǎn)生光散射現(xiàn)象，散射光的強(qiáng)度與粒子的體積成正比。3.4 Met

9、one-3400型微塵粒子計(jì)數(shù)器使用要點(diǎn)。1）使用儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照Metone-3400型微塵粒子計(jì)數(shù)器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。2）儀器開機(jī)預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按說(shuō)明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行設(shè)置。3）采樣管口置采樣點(diǎn)采樣時(shí)，在確認(rèn)計(jì)數(shù)穩(wěn)定后方可開始連續(xù)讀數(shù)。4）采樣管必須干凈，嚴(yán)禁滲漏。5）采樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)儀器的允許長(zhǎng)度。除另有規(guī)定外，長(zhǎng)度不得大于1.5m。6）計(jì)數(shù)器采樣口和儀器工作位置應(yīng)處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測(cè)量誤差。7）必須按照儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。3.5 測(cè)試規(guī)則1）測(cè)試條件溫度和濕度：潔凈室（區(qū)）的溫度和相對(duì)溫度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（溫度控制在

10、1826，相對(duì)濕度控制在4565%之間為宜）。壓差：有潔凈級(jí)別要求的潔凈室（區(qū)）相對(duì)非潔凈室（區(qū)）的壓差應(yīng)大于10Pa，空氣潔凈度不同的潔凈室（區(qū)）之間的壓差應(yīng)大于10Pa，空氣潔凈度等級(jí)相同的區(qū)域，產(chǎn)塵量大的操作室應(yīng)保持相對(duì)負(fù)壓（-5Pa）。2）測(cè)試狀態(tài)靜態(tài)測(cè)試：潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運(yùn)行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒(méi)有生產(chǎn)人員的情況下進(jìn)行測(cè)試，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。動(dòng)態(tài)測(cè)試：潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)。3）測(cè)試時(shí)間對(duì)單向流測(cè)試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min 后開始。對(duì)非單向流測(cè)試應(yīng)在

11、凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min 后開始。4）懸浮粒子計(jì)數(shù)采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置A、最少采樣點(diǎn)數(shù)目：懸浮粒子潔凈度測(cè)試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目可以按照表1確定。B、采樣點(diǎn)的布置a、采樣點(diǎn)一般在離地面0.81.5m 高度的水平面上均勻布置。B、采樣點(diǎn)的布置還可根據(jù)需要在生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)的限定：對(duì)于任何潔凈室面積較小或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得少于2 個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于5 次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1 次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。一般情況下，測(cè)點(diǎn)的位置如下圖2所示：注： 為采樣點(diǎn)。采樣量：不同潔凈級(jí)別每點(diǎn)·最小的采樣量，見(jiàn)表5。表5不同潔凈

12、級(jí)別每點(diǎn)最小采樣量潔凈級(jí)別采樣量（L/次）A級(jí)1000B級(jí)1000C級(jí)100D級(jí)100采樣注意事項(xiàng)A、在確認(rèn)潔凈室（區(qū)）壓差達(dá)到要求后，方可進(jìn)行采樣。B、對(duì)于單向流，計(jì)數(shù)器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，對(duì)于非單向流，采樣管口垂直向上。C、當(dāng)采樣點(diǎn)與設(shè)備重疊時(shí)，可取消該采樣點(diǎn)（在保證最少采樣點(diǎn)數(shù)目的前提下），或?qū)⒉蓸狱c(diǎn)設(shè)在設(shè)備的上風(fēng)側(cè)。D、布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)避開回風(fēng)口。E、采樣時(shí)測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。3.6 結(jié)果計(jì)算：懸浮粒子濃度的采樣數(shù)據(jù)應(yīng)按下述步驟統(tǒng)計(jì)計(jì)算1）以測(cè)試打印的數(shù)據(jù)為依據(jù)進(jìn)行計(jì)算。2）打印數(shù)據(jù)上應(yīng)包括的內(nèi)容：采樣點(diǎn)（A）、采樣次數(shù)（L）、年月日、測(cè)試時(shí)間、測(cè)量周期（F）、粒徑（

13、含0.5µm和5µm）及測(cè)試數(shù)據(jù)、每M3空氣中的粒子數(shù)、UCL 值、級(jí)別。B1+B2+BNN3）每點(diǎn)測(cè)試三次，將三次的測(cè)試數(shù)據(jù)（0.5µm、5µm）平均，即為采樣點(diǎn)的平均粒子濃度。A=式中：A：某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（粒m3）N：某一采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)Bi：某一采樣點(diǎn)的粒子濃度（i=1，2，3N）粒m3A1+A2+ALL4）平均值的均值M=式中：M：平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒m3。 Ai：某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（i=1，2，3L），粒m3。 L：某一潔凈室（區(qū)）的總采樣點(diǎn)數(shù)，個(gè)。 5）標(biāo)準(zhǔn)誤差 式中：SE：平均值均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差，粒m

14、3。6）置信上限UCL=M+t×SE式中：UCL：平均值均值的95%置信上限，粒m3； t： 95%置信上限的t 分布系數(shù)，見(jiàn)表6。表 6 t 分布系數(shù)表采樣點(diǎn)數(shù)L234567899t6.312.922.352.132.021.941.901.86-備注：在采樣點(diǎn)只有1個(gè)，或多于9個(gè)時(shí)，不用計(jì)算95%置信上限。7）打印取值范圍A級(jí)潔凈度打印取值范圍：采樣量1000升，采樣時(shí)間10 分鐘，取三次打印值按以上公式進(jìn)行計(jì)算。C級(jí)潔凈度打印取值范圍：粒子的采樣量100 升，采樣時(shí)間1 分鐘，取三次打印值按以上公式進(jìn)行計(jì)算。D級(jí)潔凈度打印取值范圍：粒子的采樣量100 升，采樣時(shí)間1 分鐘，取三

15、次打印值按 以上公式進(jìn)行計(jì)算。3.7 結(jié)果評(píng)定：判斷懸浮粒子潔凈度級(jí)別應(yīng)依據(jù)下述兩個(gè)條件：1）每個(gè)采樣點(diǎn)的平均粒子濃度必須低于或等于潔凈級(jí)別規(guī)定的級(jí)別界限，即A級(jí)別界限。2）全部采樣點(diǎn)的粒子濃度平均值均值的95%置信度必須低于或等于規(guī)定的級(jí)別界限，即UCL級(jí)別界限。3.8 懸浮粒子級(jí)別界限(見(jiàn)表7)：表7懸浮粒子級(jí)別界限潔凈級(jí)別懸浮粒子最大允許數(shù)（粒/ M3）靜態(tài)動(dòng)態(tài)0.5µm5µm0.5µm5µmA級(jí)352020352020B級(jí)3520293520002900C級(jí)3520002900352000029000D級(jí)352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定3

16、.9報(bào)告：根據(jù)檢測(cè)的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算后，填寫“懸浮粒子檢測(cè)記錄”和“懸浮粒子檢測(cè)報(bào)告書”。4 浮游菌測(cè)試4.1方法概述本方法采用計(jì)數(shù)濃度法，即通過(guò)收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)48小時(shí)后，在適宜的生長(zhǎng)條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。4.2 所用的儀器和設(shè)備1）高壓消毒鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。2）恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。3）浮游菌采樣器：MAS 100 NT 空氣浮游菌采樣器。4.3空氣采樣量：根據(jù)需要選定，已知采樣器的流量（L/min），設(shè)定采樣時(shí)間（min），兩者相乘

17、即采樣量（L）。4.4 注意事項(xiàng)1）采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。4.5 測(cè)試步驟1）測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。2）采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。3）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。4）每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。4.6測(cè)試規(guī)則1）測(cè)試狀態(tài)浮游菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（或潔凈區(qū)）溫、濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。浮游菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（或潔凈區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。測(cè)試狀態(tài)

18、有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。2）測(cè)試人員測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。3）測(cè)試時(shí)間 對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。 對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。4）浮游菌濃度計(jì)算采樣點(diǎn)數(shù)量及其布置A、最少采樣點(diǎn)數(shù)目：懸浮粒子潔凈度測(cè)試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目可以按照表1確定。B、采樣點(diǎn)的位置：采樣點(diǎn)位置可以同懸浮粒子測(cè)試點(diǎn)。a、工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）。b、可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。最小采樣量：采樣量根據(jù)日常檢測(cè)及環(huán)境證實(shí)，每次最小采樣量見(jiàn)表9。表9浮游菌測(cè)試最少采樣量潔凈級(jí)別采樣量L/次A級(jí)1000LB級(jí)1000LC級(jí)500LD級(jí)100L采樣次數(shù)：每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。采樣注意事項(xiàng)A、對(duì)于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流，采樣管口向上。B、布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。C、采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在