從環(huán)境中分離酵母菌-實驗設(shè)計案

1、實驗設(shè)計方案從環(huán)境中分離酵母菌班級： 10 級生科（ 2）班組員:劉楠楠: 201008010222潘婷 :201008010225李煒昊： 201008010221馬森 :201008010224實驗：從環(huán)境中分離由醉母菌實驗設(shè)計方案一、采樣采樣的理由：1、 酵母菌與人類的關(guān)系密切酵母菌是一類單細胞真菌的俗稱，分類學(xué)上分屬于子囊菌綱半知菌類特征：1 .個體一般以單細胞狀態(tài)存在；2 .多數(shù)營出芽生殖，有的裂殖；3 .能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；4 .細胞壁常含有甘露聚糖；5 .喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。酵母菌分布：主要生長在偏酸的含糖環(huán)境中，在水果、蜜餞的表 面和果園土壤中最為常見。種類：

2、據(jù)1982年的資料，已知的酵母有56屬，500多種。酵 母 菌與人類的關(guān)系極其密切。千百年來.人類幾乎天天離不開酵母菌， 例如酒類的生產(chǎn)，面包的制作，乙醇和甘油發(fā)酵，石油及油品的脫蠟， 飼用、藥用等的生產(chǎn)。酵母菌細胞的形態(tài)和構(gòu)造細危壁電子顯微鏡下的釀酒酵母細胞結(jié)構(gòu)示意圖液泡液泡粒般藏粒細胞直徑比細菌粗10倍左右，如 Saccharomycescerevisiae細胞 的寬度為2.510區(qū)m,長度為4.521pm。因此在光學(xué)顯微鏡下可以 模糊地看到它們細胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細胞的形態(tài)通常有球 狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。細胞壁：酵母細胞壁呈三明治”結(jié)構(gòu)/卜層：甘露聚糖（約占30

3、%,以e糖昔鍵聯(lián)結(jié)（并非所有酵母菌都 有）內(nèi)層：葡聚糖（約占30-40%,由D-葡萄糖以（3-糖昔鍵聯(lián)結(jié)）中間層：蛋白質(zhì)（含6-8%,多為酶類）蛋白質(zhì)磷酸化甘露聚德甘露聚糧棉聚糖質(zhì)膜二細胞膜： 酵母菌的細胞膜與原核生物的基本相同。 但有的酵母菌如釀酒酵母中含有固醇類（苗醇）、VitD的前體-麥角固醇，這在原核 生物是罕見的。細胞核：核膜：核孔4070nm ,透性比任何生物膜都大。?染色體：由DNA和組蛋白牢固結(jié)合而成，呈線狀，數(shù)目因種而 異。?核仁：核內(nèi)有一或幾個區(qū)域rRNA含量很高，這一區(qū)域為核仁， 是合成核糖體的場所。?中心體：在核膜外，由蛋白質(zhì)亞基組成的細絲 狀結(jié)構(gòu)，在細胞繁殖分裂中起作

4、用細胞核的功能：攜帶遺傳信息，控制細胞的增殖和代謝3 、 酵母菌的繁殖方式4 .酵母菌的菌落大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調(diào)。常見白色、土黃色、紅 色。采樣的方法：原理：大多數(shù)酵母菌為腐生，其生活最適 pH為4.5 6,常見 于含糖分較高的環(huán)境中、例如果園十、菜地十及果皮等植物表面。故 可以從甘蔗、成熟葡萄或蘋果等果皮上取樣。利用酵母菌喜歡酸性環(huán) 境的特點，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液 （這樣做的好處 是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細菌的生長）實驗材料和用具1、蘋果果皮、0.1%美藍染液、1ml的無菌吸管、無菌培養(yǎng)皿等。2、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基原料：黃豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、蒸

5、儲水（1000ml）,自然PH配制方法： 陳新鮮豆芽100克，放入燒杯中，加水 1000ml, 煮沸約30min,用紗布過濾，用水補足原量，再加入葡萄糖 50克， 煮沸融化，121c滅菌20min.實驗步驟1、接種：取一小塊果皮，不需沖洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培 養(yǎng)液試管中，置28 30 C ,培養(yǎng)24小時,可見培養(yǎng)液變混濁。2、培養(yǎng)，用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液 0.1ml,注入另一管乳 酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中，置28 30 C再培養(yǎng)24小時或稍長（過長 貝U霉菌長出）。3、觀察：用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的 0.1%美藍 染色液中，混勻后加蓋玻片制成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡

6、觀察 酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況。4、活酪母菌可使美藍還原、從而使菌體不著色、用此方法可判斷 酵母菌的死活。芽殖過程：?母細胞形成小突起（AD）?核裂（E-G）?原生質(zhì)分配（H-I）?新膜形成（J-K）?形成新細胞壁（L）二、分離原理：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板。用劃線法分離酵母菌培養(yǎng)液，從而得到單個菌落。挑取單個菌落反復(fù)再次劃線分離純 化，最終可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)基的設(shè)計： 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸儲水（1000ml）,自然PH配制方法：將馬鈴薯去皮后、切片、加水煮爛（煮沸 2030分鐘、能被 玻璃棒戳破即可），用4

7、層紗布過濾，再加入糖和瓊脂，加熱融化后 再補足水分至1000ml，并在121攝氏度條件下高壓滅菌20分種。方法:平板劃線法8圖1l-n刷線分離圖三、鑒定原理：大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細菌相似，但比細菌菌落大而厚, 菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊 緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別 為黑色。啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落。方法:制玻片并在顯微鏡下觀察其形態(tài)四、實驗的過程記錄及其結(jié)果、結(jié)果分析期2012/5/272012/5/282012/5/302012/5/312012/6/1記錄配制豆芽 汁葡萄糖 培養(yǎng)液， 并接種， 用的材

8、料 是成熟的 蘋果皮。在28 C的環(huán)境卜培養(yǎng)了 24小 時，觀察現(xiàn) 象，培養(yǎng)液 變渾濁。配制豆芽 汁培養(yǎng)基， 進一步進 行培養(yǎng)。1 .取菌液制 片并滴加少 許的美藍染 液，用顯微鏡 觀察，醉母菌 大部分為活 的，且處于母 細胞形成小 突起階段。2 .配制馬鈴 署葡萄糖瓊 脂培養(yǎng)基，用 劃線法分離 醉母菌1 .觀察培養(yǎng)基上 的菌落，菌落表 面光滑、濕潤， 容易挑起，苗落 的質(zhì)地很均勻， 為乳白色。初步 斷定分離純化由 來的是醉母菌。2 .鏡檢，在顯微 鏡卜觀察大部分 醉母菌處于核裂 階段，少數(shù)處于 新膜形成階段?？蓴喽樽砟妇濉⒔Y(jié)果及結(jié)果分析：在本實驗中，我們的最根本目的是從環(huán) 境中分離由醉母菌，依據(jù)醉母菌的特性，我們選擇從成熟的2.蘋果皮中提取,依據(jù)醉母菌的形態(tài)、菌落特征我們進行了鑒 定，最終在經(jīng)過六天的實驗后從環(huán)境中提取由了解母菌，但 在實驗的過程中所提取由來的醉母菌的量不多，分析原因大 概有如下兩點：1.蘋果皮在接種前洗過，把一些菌洗掉了。 接種時，接種的量不足，導(dǎo)致后續(xù)的培養(yǎng)由來的量也不足。 六、實驗感想：此次實驗是由四人的一個小組合作