生藥的安全性評價

1、四 生藥的安全性評價四、一 生藥中內(nèi)源性有害物質的檢測四、一、一 生藥中主要的內(nèi)源性有害物質生藥內(nèi)源性有害物質主要為兩大類，即肝毒性成分和腎毒性成分。 1. 肝毒性成分 肝毒吡咯里西啶生物堿 (heptotoxic pyrro1izidine alkaloids ， HPAs) 是目前已知的最重要的植物性肝毒成分，其共同的結構特征是 1 ， 2 位具雙鍵的不飽和 necine 酯，如野百合堿 (monocrotaline) 和 千里光堿 (senecionine) 。 千里光堿 野百合堿 實際上，這類生物堿本身沒有毒性，毒性來自其在體內(nèi) ( 主要是肝臟 ) 的代謝產(chǎn)物 代謝吡咯 (metabo

2、1ic pyrro1es) ，后者具很強的親電性，能迅速地同有關的酶、蛋白、 DNA 及 RNA 結合，引起各種毒性反應。攝入 HPAs 引起的主要病變是肝靜脈阻塞性疾病 (HVOD) ，表現(xiàn)為急性肝炎、嚴重腹痛、嘔吐、腹瀉、腹水、肝腫大、黃疸、水腫。慢性 HVOD 可表現(xiàn)為輕度惡心、厭食、疲勞或肝腫大。如不治療，可發(fā)展為肝硬變和壞死。除了亞急性 HVOD 外，其余情況下總是表現(xiàn)為血清肝酶水平升高。流行病學調查顯示：在南非、阿富汗、伊朗、牙買加、印度及前蘇聯(lián)等國家，大量肝病的發(fā)生與食用含 HPAs 的谷物、飲用含 HPAs 的飲料 ( 牛奶、茶葉等 ) 及服用含 HPAs 的草藥有關。因服用含

3、 HPAs 的草藥而引起中毒死亡的現(xiàn)象時有報道，從而引起國際醫(yī)藥學界的關注。 世界上約有 3% 的有花植物，即 6000 余種植物含有 HPAs ，但主要分布于紫草科 ( 所有屬 ) ，菊科 ( 千里光族及澤蘭族 ) 及豆科的豬屎豆屬。初步統(tǒng)計顯示含 HPAs 的中草藥共 38 種，其中臨床常用或較常用的有 12 種如農(nóng)吉利 Crotalaria sessiliflora L. 、豬屎豆 C. mucronata Desv 、千里光 Senicio scandens Bunch. Ham 、款冬 Tussilago farfara L. 、佩蘭 Eupatorium fortunei Turc

4、z 等。此外，民間使用的一些山紫菀類藥材，如大黃橐吾 Ligularia duiformis (C Winkl ) Hand. Mazz. 寬舌橐吾 L. platyglossa (Franch.) Hand. Mazz. 、齒葉橐吾 L. entate (A. Gry) Hara 等，其根及根莖 HPAs 含量很高，毒性很大。 2. 腎毒性成分 含馬兜鈴酸（ aristolochic acid ， AA ）的中草藥可引起腎損害。 1993 年，比利時學者報道了一些長期服用含廣防己的減肥藥的年輕女性發(fā)生慢性腎衰竭，這種腎衰竭表現(xiàn)為腎臟進行性快速纖維化并伴有腎萎縮，國外稱為 “ 中草藥腎病 ”

5、（ Chinese herbs nephropathy ， CHN ）。檢測發(fā)現(xiàn)減肥藥中含有馬兜鈴酸，國內(nèi)學者建議將其稱為 “ 馬兜鈴酸腎病 ” （ aristolochic acid nephropathy ， ANN ）。人們對含有馬兜鈴酸中藥腎毒性廣泛關注，對其腎毒性的機制進行了大量的研究。 動物毒性試驗表明：大、小鼠接受高劑量 AA 后，常出現(xiàn)腎小管嚴重壞死、淋巴器官萎縮、前胃淺表性潰瘍、鱗狀上皮增生和過度角化等， 15 天內(nèi)死亡。 新西蘭家兔腹腔注射 AA （ 0.1 mg/kg ），每周 5 次，連續(xù) 1721 個月，所有動物均出現(xiàn)腎間質性纖維化，尿路上皮改變，生長受阻，血清肌酐、

6、尿糖、尿蛋白管型增多，貧血，表現(xiàn)為慢性腎衰竭。 關于馬兜鈴酸的毒性機制，存在多種假說，主要有細胞毒假說、腎缺血假說、免疫反應假說、 AA-DNA 加合物致病假說。這些假說中除細胞毒假說外，其他尚缺乏直接證據(jù)。 世界上大約有 200 多種馬兜鈴屬植物（ Aristolochia L. ），其中作為藥用的有 20 多種。我國應用較多的馬兜鈴屬藥材有馬兜鈴（北馬兜鈴的果實）、青木香（馬兜鈴的根部）、天仙藤（馬兜鈴的莖）、關木通（木通馬兜鈴）、尋骨風（綿毛馬兜鈴）、廣防己和朱砂蓮等。四、一、二 生藥中主要的內(nèi)源性有害物質的檢測方法舉例生藥中 吡咯里西啶生物堿和 馬兜鈴酸常用的檢測方法是高效液相色譜法、

7、高效毛細管電泳及其與質譜的聯(lián)用技術，如關木通中馬兜鈴酸 (aristolochic acid I ) 和馬兜鈴酸 (aristolochic acid) 的檢測。 關木通中馬兜鈴酸 和馬兜鈴酸 的高效液相色譜分析 對照品 馬兜鈴酸 (aristolochic acid I ) 和馬兜鈴酸 (aristolochic acid) 。 圖 4-1 關木通甲醇提取物的高效液相色譜圖 AA- : 馬兜鈴酸 I ； AA- II : 馬兜鈴酸 色譜柱： Symmetry C 18 (150 4.6 mm ， Waters) ；柱溫： 35C ；流動相： 1% 醋酸 - 甲醇 (1:1) ；流速： 1.0

8、ml/min ；檢測波長： 250nm 。 代表性色譜圖如圖 4-1 。四、一、三 生藥中主要的內(nèi)源性有害物質限量為了保征臨床用藥安全可靠， WHO 專門制訂了關于 HPAs 的健康及安全指南，一些西方發(fā)達國家衛(wèi)生部門也制定了嚴格的質量標準。如德國衛(wèi)生部規(guī)定，內(nèi)服含 HPAs 的植物藥制劑，每天攝取量不得超過 1 m g ，外用時，每天攝取量不得超過 100 m g 。 四、二 生藥中重金屬和有害元素的檢測生藥中一類重要的外源性有害物質就是重金屬 (heavy metals) 及有害元素 (hazardous elements) 。常見對人體有害的元素和重金屬元素主要有砷、汞、鉛、鎘、銅、鋁等

9、。其來源一方面與其生長的環(huán)境條件如土壤、大氣、水、化肥、農(nóng)藥的施用等有關，另一方面與植物本身的遺傳特性和對該類元素的富集能力等有關。 四、二、一 生藥中重金屬和有害元素的檢測方法重金屬總量常用硫代乙酰胺或硫化鈉顯色反應比色法測定。有害元素砷常用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸銀法測定。單個重金屬和有害元素測定方法有原子吸收光譜法和電感耦合等離子體質譜法。中國藥典（ 2005 年版）附錄對這些測定方法進行了規(guī)范化。另外文獻還有紫外分光光度法、熒光分光光度法和高效液相色譜法。 （一）原子吸收分光光度法 (atomic absorption spectrophotometry, AAS) 此法適用于測定

10、中藥中重金屬及有害元素鉛、鎘、砷、汞、銅。 原子吸收分光光度法的測量對象是呈原子狀態(tài)的金屬元素和部分非金屬元素，系由待測元素燈發(fā)出的特征譜線通過供試品經(jīng)原子化產(chǎn)生原子蒸氣時，被蒸氣中待測元素的基態(tài)原子所吸收，通過測定輻射光強度減弱的程度，求出供試品中待測元素的含量。原子吸收一般遵循分光光度法的吸收定律，通常通過比較標準品溶液和供試品溶液的吸光度，求得供試品中待測元素的含量。 1. 對儀器的一般要求 所用儀器為原子吸收分光光度計，它由光源、原子化器、單色器和檢測系統(tǒng)等組成，另有背景校正系統(tǒng)、自動進樣系統(tǒng)等。 （ 1 ）光源 常用待測元素作為陰極的空心陰極燈。 （ 2 ）原子化器 主要有四種類型：

11、火焰原子化器、石墨爐原子化器、氫化物發(fā)生原子化器及冷蒸氣發(fā)生原子化器。 火焰原子化器 由霧化器和燃燒燈頭等主要部件組成。其功能是將供試品溶液霧化成氣溶膠后，再與燃氣混合，進入燃燒燈頭產(chǎn)生的火焰中，以干燥、蒸發(fā)、離解供試品，使待測元素形成基態(tài)原子。燃燒火焰由不同種類的氣體混合物產(chǎn)生，常用乙炔 空氣火焰。改變?nèi)細夂椭細獾姆N類及比例可以控制火焰的溫度，以獲得較好的火焰穩(wěn)定性和測定靈敏度。 石墨爐原子化器 由電熱石墨爐和電源等部件組成。其功能是將供試品溶液干燥、灰化，再通過高溫原子化階段使待測元素形成基態(tài)原子。一般以石墨作為發(fā)熱體，爐中通入保護氣，以防氧化并能輸送供試品蒸氣。 氫化物發(fā)生原子化器 由

12、氫化物發(fā)生器和原子吸收池組成，可用于砷、硒、錫、銻等元素的測定。其功能是將待測元素在酸性介質中還原成低沸點、易受熱分解的氫化物，再由載氣導入由石英管、加熱器等組成的原子吸收池，在吸收池中氫化物被加熱分解，并形成基態(tài)原子。 冷蒸氣發(fā)生原子化器 由汞蒸氣發(fā)生器和原子吸收池組成，專門用于汞的測定。其功能是將供試品溶液中的汞離子還原成汞蒸氣，再由載氣導入石英原子吸收池，進行測定。 （ 3 ）單色器 其功能是從光源發(fā)射的電磁輻射中分離出所需要的電磁輻射，儀器光路應能保證有良好的光譜分辨率和在相當窄的光譜帶 (0.2nm) 下正常工作的能力，波長范圍一般為 190.0nm 900.0nm 。 （ 4 ）檢

13、測系統(tǒng) 由檢測器、信號處理器和指示記錄器組成，應具有較高的靈敏度和較好的穩(wěn)定性，并能及時跟蹤吸收信號的急速變化。 （ 5 ）背景校正系統(tǒng) 其作用是校正供試品原子化時蒸氣相對吸收測定的干擾，常用的背景校正系統(tǒng)有以下四種：連續(xù)光源 ( 在紫外區(qū)通常用氘燈 ) 、塞曼效應、自吸效應、非吸收線等。 在原子吸收分光光度分析中，必須注意背景以及其他原因引起的對測定的干擾。儀器某些工作條件 ( 如波長、狹縫、原子化條件等 ) 的變化可影響靈敏度、穩(wěn)定程度和干擾情況。在火焰法原子吸收測定中可采用選擇適宜的測定譜線和狹縫、改變火焰溫度、加入絡合劑或釋放劑、采用標準加入法等方法消除干擾；在石墨爐原子吸收測定中可采

14、用選擇適宜的背景校正系統(tǒng)、加入適宜的基體改進劑等方法消除干擾。 2. 測定法 （ 1 ）標準曲線法 在儀器推薦的濃度范圍內(nèi)，制備含待測元素的標準溶液至少 3 份，濃度依次遞增，并分別加入適當試劑。同時以相應試劑制備空白對照溶液。將儀器按規(guī)定啟動后，依次測定空白對照溶液和各濃度標準溶液的吸光度，記錄讀數(shù)，以每一濃度 3 次吸光度讀數(shù)的平均值為縱坐標，相應濃度為橫坐標，繪制標準曲線。再制備供試品溶液，使待測元素的估計濃度在標準曲線濃度范圍內(nèi)，測定吸光度，取 3 次讀數(shù)的平均值，從標準曲線上查得相應的濃度，計算元素的含量。 （ 2 ）標準加入法 取同體積的供試品溶液 4 份，分別置 4 個同體積的量

15、瓶中，除一號量瓶外，其他量瓶分別精密加入不同濃度的待測元素標準溶液，分別用去離子水稀釋至刻度，制成從零開始遞增的一系列溶液。按上述標準曲線法自 “ 將儀器按規(guī)定啟動后 ” 操作，測定吸光度，記錄讀數(shù)；將吸光度讀數(shù)與相應的待測元素加入量作圖，延長此直線至與含量軸的延長線相交，此交點與原點間的距離即相當于供試品溶液取用量中待測元素的含量 ( 如圖 4-1) 。再以此計算供試品中待測元素的含量。此法僅適用于標準曲線法中標準曲線呈線性并通過原點的情況。 圖 4-1 標準加入法 各重金屬元素及有害元素的具體測定方法簡介如下： （ 1 ）鉛的測定（石墨爐法） 測定參考條件：干燥溫度 100 120 ，持續(xù)

16、 20 秒；灰化溫度 400 750 ，持續(xù) 20 25 秒；原子化溫度 1700 2100 ，持續(xù) 4 5 秒。檢測波長為 283.3nm ，背景校正為氘燈或塞曼效應。 鉛標準儲備液的制備 精密量取鉛單元素標準溶液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 含鉛（ Pb ） 1 m g 的溶液，即得（ 0 5 貯存）。 標準曲線的制備 分別精密量取鉛標準儲備液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 分別含鉛 5ng 、 20ng 、 40ng 、 60ng 、 80 ng 的溶液。分別精密量取 1ml ，各加含 1% 磷酸二氫銨和 0.2% 硝酸鎂的溶液 1ml ，混勻，精密吸取 20 m l

17、，注入石墨爐原子化器，測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 供試品溶液的制備A 法 取供試品粗粉 0.5g ，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸 3 5ml ，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)進行消解（按儀器規(guī)定的消解程序操作）。放冷，消解液轉入錐形瓶中，置電熱板上緩緩漸熱至二氧化氮蒸氣揮盡，并緩緩濃縮至 2 3ml ，放冷，加水稀釋至 25ml ，搖勻，即得。同法同時制備試劑空白溶液。 B 法 取供試品粗粉 1g ，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸 - 高氯酸（ 4 ： 1 ）的混合溶液 5 10ml ，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜，置電熱板

18、上加熱消解，保持微沸，若變棕黑色，再加硝酸 - 高氯酸（ 4 ： 1 ）的混合溶液適量，持續(xù)加熱至溶液澄明后升高溫度，繼續(xù)加熱至冒濃煙，直至白煙散盡、消解液呈無色透明或略帶黃色的溶狀物，放冷，轉入 50ml 量瓶中，用 2% 硝酸溶液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時制備試劑空白溶液。 C 法 取供試品粗粉 0.5g ，精密稱定，置瓷坩堝中，于電熱板上先低溫炭化至無煙，移入高溫爐中，于 500 灰化 5 6 小時（若個別灰化不完全，加硝酸適量，于電熱板上低溫加熱，反復多次直至灰化完全），取出冷卻，加 10% 硝酸溶液 5ml 使溶解，轉入 25ml 量瓶中，用水洗

19、滌容器，洗液并入同一量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時制備試劑空白溶液。 測定法 精密量取空白溶液與供試品溶液各 1ml ，加含 1% 磷酸二氫銨和 0.2% 硝酸鎂的溶液 1ml ，搖勻，精密吸取 10 20 m l ，照標準曲線制備項下方法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中鉛（ Pb ）的含量，計算，即得。 （ 2 ）鎘的測定（石墨爐法） 測定條件 參考條件：干燥溫度 100 120 ，持續(xù) 20 秒；灰化溫度 300 500, 持續(xù) 20 25 秒；原子化溫度 1 500 1 900 ，持續(xù) 4 5 秒。檢測波長為 228.8nm ，背景校正為氘燈或塞曼效應。 鎘標準儲備液

20、的制備 精密量取鎘單元素標準溶液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 含鎘（ Cd ） 0.4 m g 的溶液，即得（ 0 5 貯存）。 標準曲線的制備 分別精密量取鎘標準儲備液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 分別含鎘 1.6ng 、 3.2ng 、 4.8ng 、 6.4ng 、 8.0ng 的溶液。分別精密吸取 10 m l ，注入石墨爐原子化器，測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 供試品溶液的制備 同鉛測定項下供試品溶液的制備。 測定法 精密吸取空白溶液與供試品溶液各 10 m l 20 m l ，照標準曲線制備項下方法測定吸收度（若供試品有干擾，可分別

21、精密量取標準溶液、空白溶液和供試品溶液各 1ml ，加含 1% 磷酸二氫銨和 0.2% 硝酸鎂的溶液 1ml ，搖勻，依法測定），從標準曲線上讀出供試品溶液中鎘（ Cd ）的含量，計算，即得。 （ 3 ）砷的測定（氫化物法） 測定條件 采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含 1% 硼氫化鈉和 0.3% 氫氧化鈉的溶液為還原劑， 1% 鹽酸為載液，氮氣為載氣，檢測波長為 193.7nm ，背景校正為氘燈或塞曼效應。 砷標準儲備液的制備精密量取砷單元素標準溶液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 分別含砷（ As ） 1g 的溶液，即得（ 0 5 貯存）。 標準曲線的制備分別精密量取砷標準儲備液適量，用

22、 2% 硝酸溶液制成每 1ml 分別含砷 2ng 、 4ng 、 8ng 、 12ng 、 16ng 的溶液。分別精密量取 10ml ，置 25ml 量瓶中，各加 25% 碘化鉀溶液（臨用前配制） 1ml ，搖勻，加 10% 抗壞血酸溶液（臨用前配制） 1ml ，搖勻，用鹽酸溶液（ 20100 ）稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測定吸收值，以峰面積（或吸收度）為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 供試品溶液的制備 同鉛測定項下 “ 供試品溶液的制備 ” 中的 A 法或 B 法。 測定法 精密吸取空白溶液與供試品溶液各 10ml ，照標準曲線制備項下的方法，自 “ 加 25% 碘

23、化鉀溶液（臨用前配制） 1ml” 起，依法測定。從標準曲線上讀出供試品溶液中砷（ As ）的含量，計算，即得。 （ 4 ）汞的測定（冷吸收法） 測定條件 采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含 0.5% 硼氫化鈉和 0.1% 氫氧化鈉的溶液為還原劑， 1% 鹽酸溶液為載液，氮氣為載氣，檢測波長為 253.6nm ，背景校正為氘燈或塞曼效應。 汞標準儲備液的制備 精密量取汞單元素標準溶液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 含汞（ Hg ） 1 m g 的溶液，即得（ 0 5 貯存）。 標準曲線的制備 分別精密量取汞標準儲備液 0ml 、 0.1ml 、 0.3ml 、 0.5ml 、 0.7ml 、

24、 0.9ml 置 50ml 量瓶中，加 4% 硫酸溶液 40ml 、 5% 高錳酸鉀溶液 0.5ml ，搖勻，滴加 5% 鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用 4% 硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測定吸收值，以峰面積（或吸收度）為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 供試品溶液的制備 A 法 取供試品粗粉 0.5g ，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸 3ml 5ml ，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)進行消解（按儀器規(guī)定的消解程序操作）。放冷，消解液轉入錐形瓶中，置電熱板上，于 100 120 緩緩加熱至二氧化氮蒸氣揮盡，并持續(xù)緩緩濃縮至 2ml

25、 3ml ，放冷，加 4% 硫酸溶液 5ml 6ml 、 5% 高錳酸鉀溶液 0.5ml ，搖勻，滴加 5% 鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用 4% 硫酸溶液稀釋至 10ml ，搖勻，必要時離心，取上清液，即得。同法同時制備試劑空白溶液。 B 法 取供試品粗粉 1g ，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸 - 高氯酸（ 4 ： 1 ）的混合溶液 5ml 10ml ，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜，置電熱板上，于 120 140 加熱消解 4 8 小時，至消解完全，放冷，加適量 4% 硫酸溶液、 5% 高錳酸鉀溶液 0.5ml ，搖勻，滴加 5% 鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用 4% 硫酸溶液稀釋至 2

26、5ml ，搖勻，必要時離心，取上清液，即得。同法同時制備試劑空白溶液。 測定法 精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標準曲線制備項下的方法測定。從標準曲線上讀出供試品溶液中汞（ Hg ）的含量，計算，即得。 （ 5 ）銅的測定（火焰法） 測定條件 檢測波長為 324.7nm ，用空氣 - 乙炔火焰，背景校正為氘燈或塞曼效應。 銅標準儲備液的制備 精密量取銅單元素標準溶液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 含銅（ Cu ） 10 m g 的溶液，即得（ 0 5 貯存）。 標準曲線的制備 分別精密量取銅標準儲備液適量，用 2% 硝酸溶液制成每 1ml 分別含銅 0.05 m g 、 0.2 m

27、 g 、 0.4 m g 、 0.6 m g 、 0.8 m g 的溶液。一次噴入火焰，測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 供試品溶液的制備 同鉛測定項下供試品溶液的制備。 測定法 精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標準曲線制備項下的方法測定。從標準曲線上讀出供試品溶液中銅（ Cu ）的含量，計算，即得。 （二）電感耦合 等離子體質譜法 ( inductively coupled plasma-mass spectrometry , ICP-MS ) 電感耦合等離子體質譜法是將被測物質用電感耦合等離子體離子化后，按離子的質荷比分離，測量各種離子譜峰的強度的一種分析方法

28、。等離子體是由自由電子、離子和中性原子或分子組成，總體上成電中性的氣體，其內(nèi)部溫度高達幾千度至一萬度。樣品由霧化器霧化后由載氣攜帶從等離子體焰炬中央穿過，迅速被蒸發(fā)電離并通過離子引出接口或采樣錐導入到質量分析器，樣品在極高溫度下完全蒸發(fā)和解離，電離的百分比高，因此幾乎對所有元素均有較高的檢測靈敏度，由于該條件下化合物分子結構已經(jīng)被破壞，所以僅適用于元素分析。 1. 對儀器的一般要求 電感耦合等離子體質譜儀一般由進樣系統(tǒng)、電感耦合等離子體（ ICP ）離子源、質量分析器和檢測器組成，并實現(xiàn) ICP 和質譜的聯(lián)用，主要用于元素分析和元素價態(tài)分析。 載氣 儀器一般所用的載氣為氬氣，氣體的純度應大于

29、99.99% ，可由高壓鋼瓶和液態(tài)氣體儲罐提供，經(jīng)過適當?shù)臏p壓裝置，以一定的流速進入離子炬管。 進樣系統(tǒng) 進樣方式為溶液直接進樣，用蠕動泵經(jīng)進樣管將溶液注入儀器內(nèi)，進樣管一般可分為樣品管和內(nèi)標管。實驗過程中霧化室溫度應相對穩(wěn)定（根據(jù)儀器的要求），霧化室使用后應清洗，不可用手直接接觸噴霧口。 離子源和采樣錐 炬管和采樣錐使用一段時間后需要清洗，實驗中應保持氣體管路密閉不漏氣，并監(jiān)控儀器的反射功率。等離子體火焰燃燒時由于溫度較高，應使用循環(huán)水系統(tǒng)進行冷卻，并使用適當功率的抽風系統(tǒng)排出儀器內(nèi)部的熱量。循環(huán)水和排風口的溫度應控制在儀器要求的范圍內(nèi)。 質量分析器的檢測器 質量分析器一般為四極桿分析器，可

30、以實現(xiàn)質譜掃描功能。檢測器通常為光電倍增器或電子倍增器。質量分析器應保持真空，真空度應達到儀器使用要求。儀器可置于維持真空的待機狀態(tài)，但切斷電源前，應按要求將真空度恢復到常壓。斷電后，用氬氣充入真空系統(tǒng)。當供試品中待測元素的濃度較高時，應予稀釋，以延長檢測器的使用壽命。樣品測定前應進行靈敏度調諧，達到要求后，方可測試樣品。 2. 測定法 在儀器推薦的濃度范圍內(nèi)，制備含待測元素的標準溶液至少 3 份，濃度依次遞增，并分別加入配制供試品溶液的相應試劑，除另有規(guī)定外，一般用純化水（電阻率應大于 18M ）制成水溶液。將儀器按規(guī)定啟動后，按濃度梯度依次進樣，讀數(shù)。取每一濃度至少 3 次讀數(shù)的平均值與相

31、應濃度作標準曲線。 按各品種項下的規(guī)定制備供試品溶液，使待測元素的估計濃度在標準曲線濃度范圍內(nèi)，測定供試品溶液，從標準曲線上查得相應的濃度，計算元素的含量。 定量分析測定過程中，進樣時樣品管應插入樣品溶液中，而內(nèi)標管在分析過程中始終置于相應的內(nèi)標元素溶液中。內(nèi)標元素一般應選擇與被測元素的質量數(shù)接近的天然稀有元素。四、二、二 生藥中常見重金屬和有害元素的限量我國規(guī)定了貯糧中重金屬和有害元素的限量標準，東南亞國家規(guī)定了進口中藥材及中成藥中重金屬和有害元素的限量（見表 4-1 ）。 表 4-1 國家貯糧和東南亞國家規(guī)定進口中藥材及中成藥中重金屬和有害元素限量（ 百萬分之一） 重金屬和有害元素 國家貯

32、糧 東南亞國家進口中藥材及中成藥 砷 0.7 5.0 5.0 鉛 20 20.00 銅 150 150 汞 0.02 0.50 0.50 中國藥典（ 2005 年版）共對 17 種生藥或提取物提出重金屬或有害物質的限量要求，見表 4-2 。 表 4-2 中國藥典（ 2005 年版）生藥或提取物重金屬或有害元素的限量（ 百萬分之一） 鉛 鎘 砷 汞 銅 重金屬總量 甘草 5 0.3 2 0.2 20 白芍 5 0.3 2 0.2 20 白礬 20 玄明粉 20 20 地龍 30 西瓜霜 10 10 冰片 2 5 龜甲膠 30 阿膠 3 30 金銀花 5 0.3 2 0.2 20 黃芪 5 0.3

33、 2 0.2 20 鹿角膠 2 30 連翹提取物 2 20 松節(jié)油 10 桉油 10 黃芩提取物 20 銀杏葉提取物 20 四、三 生藥中農(nóng)藥殘留的檢測生藥中另一類重要的外源性有害物質就是農(nóng)藥殘留 (pesticide residues) 。 生藥中常見的農(nóng)藥殘留有有機氯化合物 (chlorinated hydrocarbons and related pesticides) 、有機磷化合物 (organophosphorus pesticides ) 和擬除蟲菊酯類等。生藥的種植、采收、包裝運輸、貯藏等各個環(huán)節(jié)都有可能和農(nóng)藥接觸，被其污染。四、三、一 生藥中農(nóng)藥殘留的檢測方法農(nóng)藥殘留的檢測方

34、法主要是氣相色譜法。 中國藥典（ 2005 年版） 規(guī)范了農(nóng)藥殘留量的氣相色譜測定法，包括有機氯類農(nóng)藥殘留量測定、有機磷農(nóng)藥殘留量測定和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定。 1. 有機氯類農(nóng)藥殘留量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 彈性石英毛細管柱（ 30m0.32mm ， 0.25 m m ） SE-54( 或 DB-1701) ， 53 Ni-ECD 電子捕獲檢測器。進樣口溫度 230 ，檢測器溫度 300 ，不分流進樣。程序升溫：初始 100 ，每分鐘 10 升至 220 ，每分鐘 8 升至 250 ，保持 10 分鐘，理論板數(shù)按 -BHC 峰計算應不低于 110 6 ，兩個相鄰色譜峰的分離度應大

35、于 1.5 。 對照品儲備液的制備 精密稱取六六六（ BHC ）（ -BHC ， -BHC ， -BHC ， -BHC ）、滴滴涕（ DDT ）（ PP-DDE ， PP-DDD,OP-DDT ， PP-DDT ）及五氯硝基苯（ PCNB ）農(nóng)藥對照品適量，用石油醚（ 60 90 ）分別制成每 1ml 約含 4 m g 5 m g 的溶液，即得。 混合對照品儲備液的制備 精密量取上述各對照品儲備液 0.5ml ，置 10ml 量瓶中，用石油醚（ 60 90 ）稀釋至刻度，搖勻，即得。 混合對照品溶液的制備 精密量取上述混合對照品儲備液，用石油醚（ 60 90 ）制成每 1L 分別含 0 m g

36、 、 1 m g 、 5 m g 、 10 m g 、 50 m g 、 100 m g 、 250 m g 的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取供試品于 60 干燥 4 h ，粉碎成細粉，取約 2g ，精密稱定，置 100ml 具塞錐形瓶中，加水 20ml 浸泡過夜，精密加丙酮 40ml ，稱定重量，超聲處理 30 min ，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約 6g ，精密加二氯甲烷 30ml ，稱定重量，超聲處理 15 分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置（使分層），將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的 100ml 具塞錐形瓶中，放置 4 h 。精密量取 35

37、 ml ，于 40 水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（ 60 90 ）如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（ 60 90 ）溶解并轉移至 10ml 具塞刻度離心管中，加石油醚（ 60 90 ）精密稀釋至 5ml ，小心加入硫酸 1ml ，振搖 1 min 離心（ 3 000 轉 / 分） 10 min ，精密量取上清液 2ml ，置具刻度的濃縮瓶（見圖 4-2 ）中，連接旋轉蒸發(fā)器， 40 下（或用氮氣）將溶液濃縮至適量，精密稀釋至 1ml ，即得。 測定法 分別精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各 1 m l ，分別連續(xù)進樣 3 次，取 3 次平均值，按外標法計算供試

38、品中 9 種有機氯農(nóng)藥殘留量。 2. 有機磷類農(nóng)藥殘留量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 彈性石英毛細管柱（ 30m0.25mm, 0.25 m m ） DB-17MS( 或 HP-5) ，氮磷檢測器（ NPD ）。進樣口溫度 220 ，檢測器溫度 300 ，不分流進樣。程序升溫：初始 120 ，每分鐘 10 升至 200 ，每分鐘 5 升至 240 ，保持 2 分鐘，每分鐘 20 升至 270 ，保持 0.5 分鐘。理論板數(shù)按敵敵畏峰計算應不低于 6000 ，兩個相鄰色譜峰的分離度應大于 1.5 。 對照品儲備液的制備 精密稱取對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷

39、、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對照品適量，用乙酸乙酯分別制成每 1ml 約含 100 m g 的溶液，即得。 混合對照品儲備液的制備 精密量取上述各種對照品儲備液 1ml ，置 20ml 棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。 混合對照品溶液的制備 精密量取上述混合對照品儲備液，用乙酸乙酯制成每 1ml 分別含 0.1 m g 、 0.5 m g 、 1 m g 、 2 m g 、 5 m g 的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取供試品粉末（過二號篩）約 5g ，精密稱定，加無水硫酸鈉 5g ，加入乙酸乙酯 50 100ml ，冰浴超聲處理 3 分鐘，放置，取上層液濾過，藥

40、渣加乙酸乙酯 30 50ml ，冰浴超聲處理 2 分鐘，放置，濾過，合并兩次濾液，用少量乙酸乙酯洗滌濾紙及殘渣，與上述濾液合并。取濾液于 40 以下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉移至 5ml 量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取 1ml ，置活性炭小柱 120 400 目， 0.25g ，內(nèi)徑 0.9cm( 如 Supelclean ENVI-Carb SPE Tubes, 3ml 活性炭小柱 ) ，用乙酸乙酯 5ml 預洗 上 ，置多功能真空樣品處理器上，用正已烷 - 乙酸乙酯（ 11 ）混合溶液 5ml 洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，精密加入乙酸乙酯 1ml 使溶解，即得。 測定法 分別

41、精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各 1 m l ，分別連續(xù)進樣 3 次，取 3 次平均值，按外標法計算供試品中 12 種有機磷農(nóng)藥殘留量。 3. 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 彈性石英毛細管柱（ 30m0.32mm ， 0.25 m m ） SE-54( 或 DB-5) ， 63 Ni-ECD 電子捕獲檢測器。進樣口溫度 270 ，檢測器溫度 330 。分流比 20 1 ； 5 1 （或根據(jù)儀器設置選擇最佳的分流比）。程序升溫：初始 160 ，保持 1 分鐘，每分鐘 10 升至 278 ，保持 0.5 分鐘，每分鐘 1 升至 290 ，保持 5 分鐘。

42、理論板數(shù)按溴氰菊酯峰計算應不低于 110 5 , 兩個相鄰色譜峰的分離度應大于 1.5 。 對照品儲備液的制備 精密稱取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯農(nóng)藥對照品適量，用石油醚（ 60 90 ）分別制成每 1ml 約含 20 25 m g 的溶液，即得。 混合對照品儲備液的制備 精密量取上述各對照品儲備液 1ml ，置 10ml 量瓶中，用石油醚（ 60 90 ）稀釋至刻度，搖勻，即得。 混合對照品溶液的制備 精密量取上述混合對照品儲備液，用石油醚（ 60 90 ）稀釋制成每 1L 分別含 0 m g 、 4 m g 、 8 m g 、 40 m g 、 200 m g 的溶液，即得。 供試品溶液

43、的制備 取供試品于 60 干燥 4 小時，粉碎成細粉（過五號篩），取約 1 2g ，精密稱定，置 100ml 具塞錐形瓶中，加石油醚（ 60 90 ） - 丙酮（ 4 1 ）混合溶液 30ml ，超聲處理 15 分鐘，濾過，藥渣再重復上述操作 2 次后，合并濾液。濾液加入適量無水硫酸鈉脫水后，于 40 45 減壓濃縮至近干，用少量石油醚（ 60 90 ）反復操作至丙酮除凈，殘渣加適量石油醚（ 60 90 ）溶解，置混合小柱 從下至上依次為無水硫酸鈉 2g 、弗羅里硅土 4g 、微晶纖維素 1g 、氧化鋁 1g 、無水硫酸鈉 2g ，用石油醚（ 60 90 ） - 乙醚（ 4 1 ）混合溶液 2

44、0ml 預洗 上，用石油醚（ 60 90 ） - 乙醚（ 4 1 ）混合溶液 90ml 洗脫，收集洗脫液，于 40 45 減壓濃縮至近干，再用石油醚（ 60 90 ） 3 4ml 重復操作至乙醚除凈，用石油醚（ 60 90 ）溶解轉移至 5ml 量瓶中，并稀釋至刻度，即得。 測定法 分別精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各 1 m l ，分別連續(xù)進樣 3 次，取 3 次平均值，按外標法計算供試品中 3 種擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量。 此外文獻資料還有高效液相色譜法、薄層色譜法、免疫吸附法、活體生物測定法等方法。四、三、二 生藥中農(nóng)藥殘留的限量1. 國內(nèi)生藥中農(nóng)藥殘留的限量標準 中國藥

45、典（ 2005 年版）中對甘草和黃芪提出了農(nóng)藥殘留限量的要求 ( 見表 4-3) 。 表 4-3 中國藥典（ 2005 年版）對藥材中有機氯農(nóng)藥殘留的限量（ 千萬分之一） 藥材 六六六（總 BHC ） 滴滴涕 ( 總 DDT) 五氯硝基苯（ PCNB ） 甘草 2 2 1 黃芪 2 2 1 外經(jīng)貿(mào)部提出了適用于藥用植物原料及制劑的進出口品質檢驗的藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準，規(guī)定藥用植物及制劑的綠色品質標準，包括藥用植物原料、飲片、提取物及其制劑等的農(nóng)藥殘留量為六六六 (BHC) 0.1 mg/kg ，滴滴涕（ DDT ） 0.1 mg/kg ，五氯硝基苯 (PCNB) 0.1 mg/kg

46、 ，艾氏劑 (aldrin) 0.02 mg/kg 。 2. 國外生藥中殘留農(nóng)藥的限量標準 許多國家的藥典中都有對生藥農(nóng)藥殘留限度的規(guī)定，如英國藥典（ 2002 年版）對植物藥農(nóng)藥殘留的規(guī)定（表 4-4 ）。 表 4-4 英國藥典（ 2002 年版）規(guī)定的植物藥農(nóng)藥殘留限量（ mg/kg ） 農(nóng)藥種類 限量 農(nóng)藥種類 限量 甲草胺 (alachlor) 0.02 殺螟松 (fenitrothion) 0.5 艾氏劑 (aldrin) 和狄氏劑 (dieldrin) 總量 0.05 氰戊菊酸 (fenvalerate) 1.5 甲基谷硫磷 (azinphos-methyl) 1.0 地蟲磷 (fonofos) 0.05 溴螨酯 (bromopropylate) 3.0 七氯 (heptachlor)( 七氯和環(huán)氧七氯的總量 ) 0.05 氯丹 (chlordane) （順式和反式異構體及氧氯丹的總量） 0.05 六氯苯 (hexachlorobenzene) 0.1 毒蟲畏 (chlorfenvinphos) 0.5 六六六 (hexachlorocyclohexane)( 異構體 ( 除 體之外 ) 0.3 毒死蜱 (chlorpyrifos) 0.2 林丹 (linda