從貫葉連翹中提取金絲桃素的工藝探討

1、西北植物學(xué)報(bào)2001,21(6):12091213文章編號:1000240252(2001)0621209205():,結(jié)果表明,金絲桃素提取:2h后,加入0.5%NaOH,用75%甲醇在0.05Mpa下78提取5,每次1.5h,溶媒量為5倍,濃縮溫度與干燥溫度為78。關(guān)鍵詞:貫葉連翹;金絲桃素;提取工藝中圖分類號:Q946.83文獻(xiàn)標(biāo)識碼:AStudiesonthechoiceofconditionsfortheextractionofhypericinfromHypericumperforatumLICui2qin,WANGZhe2zhi(InstituteofLifeScience,Sh

2、aanxiNormalUniversity,Xian710062,China)Abstract:ConditionsfortheextractionofhypericinfromHypericumperforatumL.wereoptimized.Resultsoftheoptimizationshowedthatafterimmersedinwater(45)fortwohours,addingwith0.5%NaOH,5timesextractionwith75%methanolat78un2der0.05Mpa,1.5heverytime,thetemperatureforconcent

3、rationandspray2driednot.above78Keywords:HypericumperforatumL.;hypericin;extraction金絲桃素(Hypericin)是貫葉連翹(HypericumperforatumL.)中最具生物活性的物36質(zhì),具有抗抑郁1,2、抗菌消炎2、抗HI等重要功效。它的開發(fā)應(yīng)用在國際V和抗腫瘤上已引起廣泛的關(guān)注。為了制定科學(xué)合理的提取工藝,保證有效成分的提取效率,本研究以金絲桃素含量和干品得率為指標(biāo),采用正交試驗(yàn)法研究了從貫葉連翹中提取金絲桃素收稿日期:2001206228;修改稿收到日期:2001208212基金項(xiàng)目:教育部重點(diǎn)科研項(xiàng)

4、目資助。作者簡介:李翠芹(1970-),女(漢族),在讀碩士研究生,講師。21的較佳工藝。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料貫葉連翹采自秦嶺北坡,于6月份開花季節(jié)采地上部分頂端30cm。1.2試劑金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma公司,甲醇、乙醇1.3儀器測定用BeckmanHPLC(高效液相色譜儀)。.2金絲桃素含量測定UV測定法:以金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品溶解于無水甲醇中測定OD590nm繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程。樣品測定:取提取物70mg左右,加入20mL無水甲醇,超聲溶解15min,添加無水甲醇至25mL,離心,取上清液5mL,添加無水甲醇至25mL,充分混勻后,在590nm處測定OD值,根據(jù)

5、回歸方程計(jì)算金絲桃素含量。HPLC測定法:以金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品作外標(biāo)法測定,色譜柱:SpherisorbC18;固定相:5uC18;流動相甲醇水=7525;流速:1.0mL min;檢測器:UV254nm;樣品溶劑:無水甲醇;樣品制備方法同UV法。1.4.3提取效率以所得最終干物質(zhì)的重量與原植物重量之比及提取物中金絲桃素的百分含量來計(jì)算。2結(jié)果與分析2.1金絲桃素提取條件的確立影響金絲桃素提取效率的因素很多,如溶劑類型、濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)、溫度等?，F(xiàn)針對這些因素采用7因素2水平正交法確立金絲桃素的提取條件。因素水平見表1,結(jié)果見表2,方差分析見表3、表4。貫葉連翹提取物HPLC檢測圖譜見圖1

6、,UV檢測圖譜見圖2。表1因素水平Table1Factorlevels因素Factors12B溶媒濃度(%)Contentofmenstruum7590A濃縮和干燥溫度()Temperatureofconcentrationand()9078提取溫度()Temperatureextraction()C次數(shù)Times35DTime(h)11.5時(shí)間(h)E溶媒MenstruumF溶媒量Quantityofmenstruum5倍7倍G常壓780.05MPa78乙醇甲醇6:表2試驗(yàn)方案與結(jié)果Table2Schemeandresultsofexperiment因素Factors試驗(yàn)號Experimen

7、tNo.12345678K1K2A111122221.69.B11221122.1.48C11222211.1.D121212121.361E12122211.47F1211.441.39G1222121.401.43試驗(yàn)指標(biāo)Experimentindication金絲桃素含量(%)得率(%)()0.350.400.0.500.310.0.260.28()700.0630.06813171211129.6(%)圖1樣品HPLC圖H.金絲桃素;P.偽金絲桃素Fig.1HPLCfigureofsampleH.Hypericin;P.Pseudohypericin圖2樣品UV圖波長(n

8、m)Wave2length(nm)Fig.2UVfigureofsample表3方差分析(含量)Table3Analysisofvariance(content)21方差來源ABCDEFG平方和0.2412.11310-37.81310-31.5110-31.5110-33.12510-41.12510-4-405(自由度1111111均方0.2412.1130-37.81310-31.5110-31.10-33.125.4F值P11349.9436.7..01050505F0.01(1,2)=98.50,F0.251。方差分析(得率)Table4Analysis

9、ofvariance(yield)ABCDEFG平方和48.020.84519.6830.84511.0451.4450.0451.73505(1,自由度11111113均方48.020.84519.6830.84511.0451.4450.0450.578F值P83.081.46234.051.467.1050505050505F0.01(1,3)=34.11,F0.3)=10.13。方差分析表明,溶媒濃度對金絲桃素的提取效率影響極顯著,提取溫度次之,提取次數(shù)對得率的影響較顯著。其他因素對結(jié)果的影響不顯著。影響因素按其程度從大到小依次為B

10、D、EFG(含量),B、DFG(得率)。表2結(jié)果表明,4號提取條件最好,即A1B2C2D2E2F1G1,金絲桃素含量為0.50%,得率為18%。計(jì)算選優(yōu)為A1B2C2D2E2F1G2(含量)與A1B2C2D2E2F2G2(得率)。但從方差分析看,溶媒、溶媒量對結(jié)果幾乎無影響,可任取其一水平,從節(jié)約成本考慮,選擇較佳提取工藝為A1B2C2D2E2F2G1,即75%甲醇,0.05MPa78提取5次,每次1.5h,溶媒量5倍,濃縮和干燥溫度78。2.2水處理對提取效率的影響提取前不用水浸泡或者用不同溫度的水浸泡粉碎后的貫葉連翹2h,提取后測定金絲桃素含量和得率,結(jié)果見表5。表5水處理對金絲桃素提取率

11、的影響Table5Effectofwateronextractionradioofhypericin水溫()Temperatureofwater金絲桃素含量(%)Contentofhypericin(%)0.260.310.430.59得率(%)Yield(%)8.99.712.313.2不浸泡浸泡153045從表5結(jié)果可看出,水的前處理有利于去除水溶性雜質(zhì),隨著水溫的升高,金絲桃素6:含量上升,但超過一定溫度后,得率下降。綜合考慮得率和含量,提取前用45的水浸泡2h為較佳處理?xiàng)l件。2.3堿處理對提取效率的影響浸泡好的料中加入含干料重量0%、0.5%、1.0%、2.0%的NaOH,測定金絲桃素

12、含量和得率,結(jié)果見表6。表6NaOHTable6EffectofNaOHcontentonofNaOH(%).1.2.0)0.0.450.350.28(%)(%)9.6從表6結(jié)果可看出,在原藥材中加入NaOH,有利于金絲桃素的溶出,即有利于提取物得率與含量的升高;當(dāng)NaOH添加至一定比例(此處為0.5%)時(shí),隨著NaOH量的升高,提取物得率上升,但含量在下降;綜合考慮得率與含量,0.5%(即NaOH與藥材的重量比)為最佳比例。參考文獻(xiàn):1CAMI LLACRACCHIOLORN.1997,http: camilla STJOHNS.FAQ.2江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典(上)M.上海:上海人民出版社,1977:1489.3中國藥科大學(xué).中藥詞海(第二卷)M.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1996,1176.4VLIETINCKAJ,BRUYNEDE,APERSS.Plant2derivedleadingcompoundsforchemotherapyofhumanim2.,1998,64(2):97.munodeficiencyvirus(HIV)infe