GB 202872006農(nóng)用微生物菌劑

1、農(nóng)用微生物菌劑（GB 20287-2006）前言 本標(biāo)準(zhǔn)的5.1、5.3和第8章條文為強(qiáng)制性條款，其余為推薦性條款。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄C和附錄D為規(guī)范性附錄，附錄B為資料性附錄。 農(nóng)用微生物菌劑 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了農(nóng)用微生物菌劑（即微生物接種劑）的術(shù)語(yǔ)和定義、產(chǎn)品分類、 要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸和貯存。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)用微生物菌劑類產(chǎn)品。 2 規(guī)范性引用文件（略） 3 術(shù)語(yǔ)和定義（略） 4 產(chǎn)品分類 產(chǎn)品按劑型可分為液體、粉劑、顆粒型；按內(nèi)含的微生物種類或功能特性可分為根瘤菌菌劑、固氮菌菌劑、解磷類微生物菌劑、硅酸鹽微生物菌劑、光合細(xì)菌菌劑、有機(jī)物料腐熟劑、促生菌劑、

2、菌根菌劑、生物修復(fù)菌劑等。 5 要求 5.1 菌種 生產(chǎn)用的微生物菌種應(yīng)安全、有效。生產(chǎn)者應(yīng)提供菌種的分類鑒定報(bào)告，包括屬及種的學(xué)名、形態(tài)、生理生化特性及鑒定依據(jù)等完整資料。生產(chǎn)者應(yīng)提供菌種安全性評(píng)價(jià)資料。采用生物工程菌，應(yīng)具有允許大面積釋放的生物安全性有關(guān)批文。 5.2 產(chǎn)品外觀（略） 5.3 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo) 5.3.1 農(nóng)用微生物菌劑產(chǎn)品的技術(shù)指標(biāo)見(jiàn)表1，其中有機(jī)物料腐熟劑產(chǎn)品的技術(shù) 指標(biāo)按表2執(zhí)行。 5.3.2 農(nóng)用微生物菌劑產(chǎn)品中無(wú)害化指標(biāo)見(jiàn)表3。 6 試驗(yàn)方法 6.1 儀器設(shè)備（略） 6.2 試劑（略） 6.3 產(chǎn)品參數(shù)的檢測(cè) 6.3.1 外觀(感官)的測(cè)定 取少量樣品放到白色搪瓷盤(

3、或白色塑料調(diào)色板)中，仔細(xì)觀察樣品的顏色、形狀、 質(zhì)地。 6.3.2 有效活菌數(shù)的測(cè)定 采用平板計(jì)數(shù)法，根據(jù)所測(cè)微生物的種類選用適宜的培養(yǎng)基。 若采用最大可能數(shù)（Most Probable Number，MPN）5管法，遵照附錄C的規(guī) 定。 6.3.2.1 系列稀釋 稱取樣品10 g（精確到0.01 g），加入帶玻璃珠的100 mL的無(wú)菌水中(液體菌劑取l0.0 mL加入90 mL的無(wú)菌水中)，靜置20 min，在旋轉(zhuǎn)式搖床上200 r/min 充分振蕩30 min，即成母液菌懸液（基礎(chǔ)液）。 用無(wú)菌移液管分別吸取5.0mL上述母液菌懸液加入45 mL無(wú)菌水中，按1:10 進(jìn)行系列稀釋，分別得

4、到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104稀 釋的菌懸液（每個(gè)稀釋度應(yīng)更換無(wú)菌移液管）。 6.3.2.2 加樣及培養(yǎng) 每個(gè)樣品取3個(gè)連續(xù)適宜的稀釋度，用無(wú)菌移液管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1 mL，加至預(yù)先制備好的固體培養(yǎng)基平板上，分別用無(wú)菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂于瓊脂表面。每一稀釋度重復(fù)3次，同時(shí)以無(wú)菌水作空白對(duì)照，于適宜的條件下培養(yǎng)。 6.3.2.3 菌落識(shí)別 根據(jù)所檢測(cè)菌種的技術(shù)資料，每個(gè)稀釋度取不同類型的代表菌落通過(guò)涂片、染色、 鏡檢等技術(shù)手段確認(rèn)有效菌。當(dāng)空白對(duì)照培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落數(shù)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效， 應(yīng)重做。

5、 6.3.2.4 菌落計(jì)數(shù) 以出現(xiàn)20300個(gè)菌落數(shù)的稀釋度的平板為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)（絲狀真菌為10150個(gè)菌落數(shù)），分別統(tǒng)計(jì)有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù) 在20300個(gè)之間時(shí)，則以該平均菌落數(shù)計(jì)算。若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù) 均在20300個(gè)之間時(shí)，應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比值決定。若其比值小于等于2應(yīng)計(jì)算兩者的平均數(shù)；若大于2則以稀釋度小的菌落平均數(shù)計(jì)算。有效活菌數(shù)按式 （1）或式（2）計(jì)算： 式中： nm 質(zhì)量有效活菌數(shù)， 億/g nv 體積有效活菌數(shù)， 億/mL x 菌落平均數(shù)， 個(gè) k 稀釋倍數(shù) v1 基礎(chǔ)液體積， mL v2 菌懸液加入量， mL v0 樣品量， mL

6、 m0 樣品量， g 6.3.3 霉菌雜菌數(shù)的測(cè)定 采用馬丁培養(yǎng)基，測(cè)定方法同6.3.2。 6.3.4 雜菌率的測(cè)定 除樣品有效菌外其它的菌均為雜菌。樣品中雜菌率按式（3）計(jì)算： 式中： m 樣品雜菌率， % n1 雜菌數(shù)， 億/g(mL) n 有效活菌數(shù)， 億/g(mL) 6.3.5 水分的測(cè)定 將空鋁盒置于干燥箱中105 ±2 烘干 0.5 h，冷卻后稱量記錄空鋁盒的質(zhì)量。然后稱取2份平行樣品（顆粒型樣品，應(yīng)先粉碎過(guò)1.0 mm試驗(yàn)篩），每份 20g（精確到0.01 g），分別加入鋁盒中并記錄質(zhì)量。將裝好樣品的鋁盒置于干燥箱中105 ±2 下烘干4 h6 h。取出置于干

7、燥器中冷卻20 min后進(jìn)行稱量。水分含量按式（4）計(jì)算（結(jié)果為兩次測(cè)定的平均值）： w = (m1- m2)/( m1- m0) ×100 （4） 式中： w 樣品水分含量， % m0 空鋁盒的質(zhì)量， g m1 樣品和鋁盒的質(zhì)量， g m2 烘干后樣品和鋁盒的質(zhì)量， g 6.3.6 細(xì)度的測(cè)定 6.3.6.1 粉劑樣品 稱取樣品50 g（精確到0.1 g），放入300 mL燒杯中，加200 mL水浸泡10 min30min后倒入孔徑0.18 mm的試驗(yàn)篩中，然后用水沖洗，并用刷子輕輕地刷篩面上的樣品，直至篩下流出清水為止。將試驗(yàn)篩連同篩上樣品放入干燥箱中，在105 ±2

8、烘干4 h 6 h。冷卻后稱量篩上樣品質(zhì)量。樣品細(xì)度按式（5）計(jì)算： s=1- m1/ m0（1-w） ×100 （5） 式中： s 篩下樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)， % m0 樣品質(zhì)量， g w 樣品含水量， % m1 篩上干樣品質(zhì)量， g 6.3.6.2 顆粒樣品 稱取樣品50 g（精確到0.1 g），將兩個(gè)不同孔徑的試驗(yàn)篩（1.0 mm和4.75 mm） 摞在一起放在底盤上(大孔徑試驗(yàn)篩放在上面)。樣品倒入大孔徑試驗(yàn)篩內(nèi)篩樣品， 然后稱小孔徑試驗(yàn)篩上的樣品質(zhì)量。顆粒細(xì)度按式（6）計(jì)算： g = m1 /m0 ×100 （6） 式中： g 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)， % m1 小孔徑試驗(yàn)篩上樣品

9、質(zhì)量， g m0 樣 品 質(zhì) 量， g 6.3.7 pH值的測(cè)定 打開(kāi)酸度計(jì)電源預(yù)熱30 min，用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)。 pH值的測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)三次，計(jì)算三次的平均值。 6.3.7.1 液體樣品 用量筒取40mL樣品放入50 mL的燒杯中，直接用酸度計(jì)測(cè)定，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。 6.3.7.2 粉劑樣品 稱取樣品15 g，放入50 mL的燒杯中，按1:2(樣品:無(wú)離子水)的比例將無(wú)離子水加到燒杯中(如果樣品含水量低，可根據(jù)基質(zhì)類型按1:31:5的比例加無(wú)離子水)，攪拌均勻。然后靜置30 min，測(cè)樣品懸液的pH值，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。 6.3.7.3 顆粒樣品 樣品先研碎過(guò)1.0 mm試驗(yàn)篩，按

10、照6.3.7.2的方法測(cè)定。 6.3.8 糞大腸菌群數(shù)的測(cè)定 應(yīng)符合GB/T 19524.1肥料中糞大腸菌群的測(cè)定的規(guī)定。 6.3.9 蛔蟲(chóng)卵死亡率的測(cè)定 應(yīng)符合GB/T 19524.2肥料中蛔蟲(chóng)卵死亡率的測(cè)定的規(guī)定。 6.3.10 纖維素酶活、蛋白酶活的測(cè)定 應(yīng)符合附錄D的規(guī)定。 6.3.11 砷、鎘、鉛、鉻、汞的測(cè)定 應(yīng)符合GB 188772002中的5.125.17的規(guī)定。 6.3.12 保質(zhì)期的檢驗(yàn) 在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的保質(zhì)期前，按6.3.16.3.11方法測(cè)定產(chǎn)品相應(yīng)指標(biāo)。 7 檢驗(yàn)規(guī)則 本標(biāo)準(zhǔn)中產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)的數(shù)字修約應(yīng)符合GB 8170的規(guī)定；產(chǎn)品質(zhì)量合格判定應(yīng) 符合GB 1250中

11、修約值比較法的規(guī)定。 7.1 抽樣 按每一發(fā)酵罐菌液（或每批固體發(fā)酵）加工成的產(chǎn)品為一批，進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，抽 樣過(guò)程嚴(yán)格避免雜菌污染。 7.1.1 抽樣工具 無(wú)菌塑料袋(瓶)，金屬勺、抽樣器、量筒、牛皮紙袋、膠水、抽樣封條及抽樣單等。 7.1.2 抽樣方法和數(shù)量 一般在成品庫(kù)中抽樣，采用隨機(jī)法抽取。抽樣以件為單位，小包裝以每一包裝箱為一件。隨機(jī)抽取35件，每件中隨機(jī)抽取一袋(瓶)；若每袋(瓶)包裝小于500 g（mL）的產(chǎn)品，應(yīng)多抽幾件。大包裝產(chǎn)品以一袋(桶)為一件，隨機(jī)抽取510件，在無(wú)菌條件下，每件取樣500 g(mL)，然后將抽取樣品混勻，按四分法分裝3袋(瓶)，每袋（瓶）不少于500 g(mL)。 7.2 檢驗(yàn)分類（略） 7.3 判定規(guī)則 7.3.1 具下列任何一條款者，均為合格產(chǎn)品 a. 檢驗(yàn)結(jié)果各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求的產(chǎn)品； b. 在產(chǎn)品的外觀、水分、細(xì)度、pH值等檢測(cè)項(xiàng)目中，有1項(xiàng)不符合要求，而其 它各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)符合要求的產(chǎn)品。 7.3.2 具下列任何一條款者，均為不合格產(chǎn)品 a. 有效活菌數(shù)不符合技術(shù)指標(biāo)； b. 霉菌雜菌數(shù)不符合技