黃酮提取工藝總結(jié)

1、黃酮提取工藝粉碎、烘干 浸提、微波處理蒸發(fā)濃縮干燥、溶解定容金銀花粉末濾液濃縮液總黃酮粗品含量計(jì)算0.10.090.07 2-1 微波輔助提取金銀花總黃酮工藝流程圖3. 實(shí)驗(yàn)方法3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  3.1.1最大吸收波長的選擇方法 以亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉為顯色劑，分別作各樣品提取液以及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸收曲線，在510nm處均有1個(gè)強(qiáng)吸收峰，因此選擇510nm為測定波長。3.1.2對照品溶液的制備方法   精密稱取蘆丁對照品10.2mg置50mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻備用。3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  精密量取對照品溶液0，1，2，3

2、，4，5mL，分別置10mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min；再加入10%硝酸鋁0.3mL，振蕩搖勻，放置6min；最后加入4%氫氧化鈉試液4mL，加甲醇定容至刻度，搖勻，放置15min。采用分光光度法，在510nm處測定吸光度，以對照品量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.2 微波提取單因素實(shí)驗(yàn)方法分別考察不同的微波輻射功率,輻射時(shí)間,乙醇濃度,固液比對提取效果的影響3.3 提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法 系統(tǒng)考察微波提取法的工藝參數(shù)，根據(jù)已有的資料及實(shí)際情況，選用微波輻射功率（A），輻射時(shí)間（B），乙醇濃度（C），固液比（D）作為考察因素，以

3、測得的浸提取樣品中總黃酮含量為考察指標(biāo)，選用L9（34）正交表設(shè)計(jì)，得到供試液。3.4微波輔助提取法與乙醇回流法比較比較兩種提取方法的處理時(shí)間和液固比對總黃酮提取量的影響。傳統(tǒng)乙醇回流法提取總黃酮的所需時(shí)間比微波輔助提取法提取長得多，且金銀花總黃酮提取量比較低;而微波輔助提取的總黃酮較乙醇回流法高。比較此兩種方法在最佳條件下的總黃酮含量。3.5總黃酮含量測定方法 取0.5mL液，加入5%亞硝酸溶液0.3mL蕩搖勻，放置6min加入10%硝酸鋁0.3mL蕩搖勻，放置6min入4%氫氧化鈉試液4mL，30%（V/V）乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

4、算得總黃酮含量。4. 結(jié)果4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制表4-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線表編號012345蘆丁濃度（mg/mL）00.020.030.050.070.09吸光度（OD）00.2060.3810.5480.7380.911圖4-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖以蘆丁濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得到回歸方程為：Y=10.328x+0.0147，R2=0.9900，表明在一定范圍內(nèi)線形關(guān)系良好。4.2 微波提取金銀花總黃酮單因素實(shí)驗(yàn)方法4.2.1 微波功率對金銀花總黃酮提取的影響準(zhǔn)確稱取5g金銀花粉末，加入70%的乙醇溶液，設(shè)定微波功率為126W-700W，微波輔助提取全程時(shí)間為10min，將提取液離心，取上

5、清液，將過濾渣乙醇回流2h后合并提取液，檢測總黃酮含量， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4-2和表4-2。表4-2 微波功率對金銀花總黃酮提取的影響微波功率（W）126252406567700總黃酮得率（%）1.341.862.052.432.10圖4-2 微波功率對金銀花總黃酮提取的影響由圖4-2可知，微波功率設(shè)在300W800W之間，隨著微波功率的增大，微波對細(xì)胞壁的破碎作用增強(qiáng)，胞內(nèi)總黃酮溶出速率增大，得率逐漸增高。 微波處理時(shí)間對金銀花總黃酮提取的影響準(zhǔn)確稱取5g金銀花粉末，加入適量70%的乙醇溶液，設(shè)定微波功率為406W，微波輔助提取時(shí)間分別設(shè)定為4min，6min，8min，10min，12min，

6、14min將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流2h后合并提取液，檢測總黃酮含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4-2和表4-2。表4-3 微波處理時(shí)間對金銀花總黃酮提取的影響微波時(shí)間（min）4681012總黃酮得率（%）1.261.541.762.482.36 圖4-3 微波處理時(shí)間對金銀花總黃酮提取的影響由圖4-3可見，微波時(shí)間在10min內(nèi)，黃酮含量隨著超聲時(shí)間的延長而增加，10min時(shí)達(dá)到最大值。 固液比對金銀花總黃酮提取的影響準(zhǔn)確稱取5g金銀花粉末，液固比分別設(shè)定為20，30，40，50，60將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流2h后合并提取液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4-4表4-4。表4-4 固液比對金

7、銀花總黃酮提取的影響固液比（mL/g）2030405060總黃酮得率（%）1.582.162.201.981.76圖4-4 固液比對金銀花總黃酮提取的影響由圖4-4可知，在液固比為1:30的時(shí)候有一個(gè)峰值，液固比在20到30時(shí)候隨液固比的升高，含量增加，1:40到1:60的時(shí)候，隨液固比的增加，含量減少。液固比在1:30的時(shí)候總黃酮含量最高，達(dá)到2.20%。4.2.4 乙醇濃度對金銀花總黃酮提取的影響準(zhǔn)確稱取5g金銀花粉末，加入適量70%的，設(shè)定微波功率為406W，微波輔助提取液固比設(shè)定為30,分別設(shè)定乙醇溶液溶度為50%，60%，70%，80%，90%將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流

8、2小時(shí)后合并提取液，檢測總黃酮含量, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4.2.4表4.2.4.表4-5 乙醇濃度對金銀花總黃酮提取的影響乙醇濃度（%）5060708090總黃酮得率（%）0.911.542.382.101.86圖4-5 乙醇濃度對金銀花總黃酮提取的影響從上圖可見，金銀花總黃酮最佳提取乙醇濃度為70%，而在乙醇濃度過高或過低時(shí)得率較小?？赡艿脑蚴牵阂掖紳舛冗^低，提取液中雜質(zhì)含量較多，可能是蛋白質(zhì)、過濾、濃縮、和分離均較困難;而隨著乙醇濃度的提高，脂溶性的物質(zhì)溶出增多，給提純帶來較大的麻煩。所以，選擇70%乙醇作為微波輔助提取溶劑。4.3 微波輔助提取金銀花總黃酮正交實(shí)驗(yàn)方法 為系統(tǒng)考察微波提取法的

9、工藝參數(shù)，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，分別選擇乙醇濃度%（A）、固液比（B）、微波功率W（C）和微波時(shí)間min（D）作為考察因素，以測得的浸提取樣品中總黃酮含量為考察指標(biāo)，選用擇 L9（34）正交表設(shè)計(jì)得到供試液正交設(shè)計(jì)表見4-6，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4-7。 表4-6 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表實(shí)驗(yàn)號乙醇濃度%（A）固液比（B）微波功率W（C）微波時(shí)間min（D）1501:2525282701:30406103901:3570012表4-7 微波輔助提取金銀花總黃酮的L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果表因素乙醇濃度（%）固液比（g/mL）微波功率（w）微波時(shí)間（min） 黃酮得率（%）試驗(yàn)號123456789M1M2M3m1m2

10、m3RA5050507070709090908.607.865.392.872.621.801.07B1:251:301:351:251:301:351:251:301:356.876.556.432.292.182.140.15C252406700406700252700 252406 6.027.076.762.012.362.250.25D8101212810101286.576.656.622.192.2172.2070.0272.072.342.192.862.632.371.941.581.87為進(jìn)一步確定各因素對金銀花總黃酮得率的影響程度，對表4-7中的各因素進(jìn)行方差分析和顯著性

11、檢查，見表4-8。表4-8 方差分析表方差來源離差平方和自由度均方F值顯著性ABCD1.7140.1383.9445.88422220.2940.0690.8571.97228.524.2536.5640.21 * * *由上表可知：微波時(shí)間min（D）對提取率的影響很小，作為誤差項(xiàng)。顯著性檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)因素：固液比（B）、乙醇濃度%（A）和微波功率W（C）對指標(biāo)影響顯著。根據(jù)以上分析，可定出影響指標(biāo)的因素顯著性主次順序?yàn)椋篈CBD?？傸S酮的優(yōu)選浸提條件（各因子優(yōu)水平組合）為最佳提取功率為406W，最佳提取時(shí)間為12min，最佳固液比1:25，最佳乙醇濃度為70%。該工藝條件下金銀花總黃酮粗品得率可以達(dá)到2.86%。書是我們時(shí)代的生命別林斯基書籍是巨大的力量列寧書是人類進(jìn)步的階梯高爾基書籍是人類知識的總統(tǒng)莎士比亞書籍是人類思想的寶庫烏申斯基書籍舉世之寶梭羅好的書籍是最貴重的珍寶別林斯基書是唯一不死的東西丘特書籍使