口腔粘膜下纖維性變患者角朊細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平變化

1、口腔粘膜下纖維性變患者角朊細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平變化摘要：目的:探討口腔粘膜上皮角朊細(xì)胞(KC)和細(xì)胞因子在口腔粘膜下纖維性變(OSF)發(fā)生中的作用。方法:分別從正常及OSF組織培養(yǎng)出KC(NM-KC和OSF-KC),用放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法測定培養(yǎng)細(xì)胞上清液中內(nèi)皮素(ET)和1轉(zhuǎn)化生長因子(TGF1)的水平。結(jié)果:OSF-KC分泌ET和TGF1水平均高于NM-KC(P0.05),且兩者呈正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:外源性刺激導(dǎo)致的KC活化及其分泌的ET和TGF1的改變可能在OSF發(fā)生中起重要作用。關(guān)鍵詞：口腔粘膜下纖維性變 角朊細(xì)胞 內(nèi)皮素 1轉(zhuǎn)化生長因子Changes of Cytokines S

2、ecreted by Human Oral Mucosa Keratinocytes from Oral Submucous Fibrosis in vitroAbstract：Objective：To assess the significance of oral mucosa keratinocytes (KCs) and cytokines in the development of oral submucous fibrosis (OSF). Methods: KCs were obtained and cultured from the buccal mucosa of health

3、y subjects who did not chew areca nut and patients with OSF who chewed areca nut. Then radioimmunoassay and enzyme-linked immunosorbent assays were employed, and endothelin (ET) and transforming growth factor 1(TGF1) were quantified in culture supernatants. Results: The mean levels of ET and TGF1 se

4、creted by OSF-KC were 96.98317.802 pg/ml and 4661.641783.893 pg/ml respectively, which were higher than these secreted by NM-KC (P0.05); There was a positive correlation between the levels of ET and TGF1 secreted by OSF-KC. Conclusion: External stimuli such as areca nut components may induce the dev

5、elopment of OSF by activating and stimulating the keratinocytes to secret a series of cytokines, including ET and TGF1. It is speculated that ET and TGF1 may be the contributing factors in the pathological features noted in OSF.Key words：oral submucous fibrosis keratinocytes endothelin transforming

6、growth factor 1口腔粘膜下纖維性變(oral submucous fibrosis,OSF)是一種慢性、隱匿性、具有癌變可能的炎性疾病。盡管研究表明OSF的發(fā)生與咀嚼檳榔習(xí)慣密切相關(guān)1,但其發(fā)病機理仍不明確,多數(shù)學(xué)者在研究OSF的發(fā)病機理時把成纖維細(xì)胞(fibroblast,FB)作為主要研究對象。FB位于粘膜下組織中,是合成膠原的主要細(xì)胞,無疑在OSF發(fā)生中具有重要作用2，3。但在咀嚼檳榔過程中,與咀嚼物首先接觸的是口腔粘膜上皮,而不是粘膜下組織;而且臨床上發(fā)現(xiàn)除與咀嚼物密切接觸易受摩擦等機械損傷的部位,如頰、舌、牙齦等外,與咀嚼物不密切接觸,理化刺激難以直接到達(dá)粘膜下組織的部

7、位,如軟腭、口底等也可出現(xiàn)纖維病變4。近年的研究表明皮膚和粘膜角朊細(xì)胞(keratinocyte,KC)能分泌包括內(nèi)皮素(endothelin,ET)、1轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor 1,TGF1)在內(nèi)的多種細(xì)胞因子5，6,它們與纖維性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。筆者推測:OSF發(fā)生中,外源性刺激物除可直接通過被破壞的上皮屏障作用于粘膜下組織外,還可能通過刺激上皮細(xì)胞,產(chǎn)生如細(xì)胞因子等的間接作用使FB增殖,從而導(dǎo)致膠原堆積。1材料和方法1.1主要試劑及儀器DMEM培養(yǎng)基、小牛血清(杭州四季青生物制品廠)、分散酶Dispase 、胰蛋白酶、兔抗人細(xì)胞角蛋白抗體(Zy

8、med公司)、鼠抗人波形蛋白單克隆抗體(Zymed公司)、內(nèi)皮素放射免疫檢測試劑盒(購自北京東亞免疫技術(shù)研究所)TGF1 ELISA試劑盒(購自深圳晶美生物工程有限公司,為美國Genzyme公司產(chǎn)品)、24孔培養(yǎng)板(Nunclon公司)、計數(shù)器(中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)開發(fā)研究院)。1.2方法2結(jié) 果KC分泌的ET及TGF1水平：由表1可見,口腔粘膜KC能分泌一定基礎(chǔ)水平的ET和TGF1,而且OSF-KC分泌的ET及TGF1水平均高于NM-KC的分泌量(P0.05),經(jīng)直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)OSF-KC分泌的ET和TGF1之間呈正相關(guān)(r=0.968,P0.05)。表1口腔粘膜KC分泌的ET和TGF1水平(

9、s)組別 ET(pg/ml) TGF1(pg/ml) NM-KC 14.64115.796 2505.0251486.676 OSF-KC 96.98317.802* 4661.642783.893* OSF-KC與NM-KC比較P0.053討 論口腔粘膜上皮細(xì)胞多為KC,近年的研究表明KC不但能產(chǎn)生許多大分子量分子(如細(xì)胞角蛋白及粘多糖)保持口腔粘膜生化及物理的完整性;而且可分泌一系列具有免疫、炎性、增殖性特點的細(xì)胞因子5，6。KC可作為“信號傳感器”,外源性刺激可使之產(chǎn)生細(xì)胞因子、粘附分子及趨化因子等,進(jìn)而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。但是KC及其分泌的細(xì)胞因子是否參與了OSF的發(fā)病過程,目前國內(nèi)外報道較

10、少,本研究結(jié)果顯示OSF-KC分泌的ET和TGF1水平明顯高于NM-KC,且兩者呈正相關(guān),說明KC及其分泌的ET和TGF1可能在OSF發(fā)生中起重要作用。ET是一類由21個氨基酸組成的血管活性肽,有3種異構(gòu)體。ET被認(rèn)為是一種內(nèi)源性損傷因子8,它不僅具有血管收縮功能,而且具有絲裂原作用。ET可以通過刺激FB增殖,促進(jìn)其膠原合成、抑制膠原降解以及使FB向肌纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)換等作用而引起組織纖維化9,與動脈粥樣硬化、肺纖維化、肝纖維化、腎小球硬化、硬皮病等纖維性疾病的發(fā)生密切相關(guān)8。TGF1是一類具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,與一些纖維性疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。高義軍等6研究發(fā)現(xiàn)OSF組織KC內(nèi)TGF

11、1 mRNA呈陽性表達(dá),結(jié)合本研究結(jié)果可以推斷TGF1確實與OSF的發(fā)生密切相關(guān)。ET與TGF1是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和細(xì)胞外基質(zhì)代謝的兩種重要介質(zhì),最近的研究發(fā)現(xiàn)ET和TGF1可相互調(diào)節(jié)其產(chǎn)生和活性。結(jié)合以往的資料和本研究結(jié)果,作者認(rèn)為ET和TGF1是復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的兩個重要成員,OSF-KC分泌的ET和TGF1水平均顯著高于正常,兩者呈正相關(guān),證明兩者間存在著相互影響,相互協(xié)調(diào),最終導(dǎo)致FB增殖,細(xì)胞外基質(zhì)堆積。盡管目前還未徹底了解到ET和TGF1是如何由KC分泌及它們在OSF發(fā)生中的確切作用,但是可以推測外源性刺激物如檳榔及其有效成份可使KC微環(huán)境改變,導(dǎo)致其分泌一系列細(xì)胞因子,從而參與誘

12、發(fā)OSF。因此作者認(rèn)為可以采用ET和TGF1受體拮抗劑和相應(yīng)的抗體等來拮抗和阻斷ET及TGF1的致病作用。參考文獻(xiàn)：2Ma RH, Tsai CC, Shieh TY. Increased lysyl oxidase activity in fibroblasts cultured from oral submucous fibrosis associated with betel nut chewing in Taiwan. J Oral Pathol Med, 1995,24(9):4074123Van Wyk CW, Oliver A, De Miranda, et al. Observation on the effect of areca nut extracts on oral fibroblast proliferation. J Oral Pathol Med, 1994, 23(4):1451485Yohn JJ, Morelli JG, Walchak SJ, et al. Cultured human keratinocytes synthesize and secrete endothelin-1. J Invest Dermatol, 1993,100(1):23268Levin ER. End