解脲支原體對七種抗菌藥物的敏感性測定及其與相關(guān)耐藥基因檢測的

1、解脲支原體對七種抗菌藥物的敏感性測定及其與相關(guān)耐藥基因檢測的比較    (六)統(tǒng)計學(xué)分析： 抗菌藥物的MIC分析采用百分位數(shù)法：MIC分布比較采用Ridit分析；四 環(huán) 素MIC中度敏感以上的Uu株對其它抗菌藥的敏感性分析，計算幾何均數(shù)G。 結(jié)果 (一)7種抗菌藥體外抗Uu標(biāo)準(zhǔn)株14型及分離株的敏感性測定：實驗表明三類抗菌藥物對Uu標(biāo)準(zhǔn)株14型具有良好抗菌作用，其中四環(huán)素類的MIC均為1μg/ml、喹諾酮類及大環(huán)內(nèi)酯類的MIC分別為2μg/ml及1μg/ml，復(fù)孔間差異小，結(jié)果穩(wěn)定，均勻一致。7種抗菌 藥體外抗U

2、u分離株作用的敏感性測定表明，測試藥物中以阿奇霉素對Uu作用最強(qiáng)，其次為紅 霉素；喹諾酮類中以環(huán)丙沙星效果較好，抑菌范圍為0.1254μg/ml；四環(huán)素、美滿霉 素、強(qiáng)力霉素對Uu的抗菌活性較差，其MIC90已分別達(dá)16μg/ml、4μg/ml及8μg/ml 。 (二)臨床Uu分離株中7種抗菌藥MIC的相關(guān)分析：表1顯示7種抗菌藥物對42株Uu分離株MIC的分布情況。從表1中看出四環(huán)素MIC達(dá)8μg/ml以上有12株，強(qiáng)力霉素MIC達(dá)4μg/ml以上有10株，美滿霉素MIC達(dá)4μg/ml以上有7株

3、；大環(huán)內(nèi)酯類的抑菌效果最佳，其中紅霉素作用中有1 5株、阿奇霉素作用中有12株的MIC僅為0.06μg/ml，經(jīng)多組Ridit分析表明，紅霉素、阿奇 霉素與四環(huán)素的R值比較差異有顯著性(P<0.05)，但與其它抗菌藥的R值 比較差異無顯著性(P0.05)。結(jié)果提示大環(huán)內(nèi)酯類對Uu的抑菌效果較好 ，四環(huán)素較差，余屬一般，其抑菌效力依次為美滿霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星及強(qiáng)力霉素。 (三)四環(huán)素中度敏感以上Uu株對其它抗菌藥的MIC分布：表2列舉出12株四環(huán)素MIC≥8μg/ml的Uu對其他6種藥物的MIC分布情況。可以看出四環(huán)素MIC 值較高者

4、，強(qiáng)力霉素及美滿霉素的MIC值均也較高，但大環(huán)內(nèi)酯及喹諾酮類的MIC值較低，說明這些Uu菌株對四環(huán)素類敏感性降低，而對后兩類仍較敏感。幾何均數(shù)表明此12例Uu分離株 對7種抗生素的敏感性依次為阿奇霉素、紅霉素、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、美滿霉素、強(qiáng)力霉素和四環(huán)素。但對紅霉素與阿奇霉素而言，個別菌株已達(dá)8μg/ml。 (四)42株Uu分離株tetM基因的擴(kuò)增：分離株DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增以后，在瓊脂糖凝膠電泳上于397b p 表17種抗菌藥物對42株解脲支原體MIC分布比較 藥物 MIC(μg/ml) 0.06 0.12 0.25 0.5 1 2 4 8 16 32 64 合

5、計 四 環(huán) 素 7 3 4 7 1 4 4 5 3 4 0 42(n1) 紅 霉 素 15 7 6 3 4 3 1 2 1 0 0 42(n2) 美滿霉素 11 4 4 5 5 6 7 0 0 0 0 42(n3) 強(qiáng)力霉素 9 2 7 5 3 6 5 5 0 0 0 42(n4) 阿奇霉素 12 5 7 8 6 0 2 2 0 0 0 42(n5) 環(huán)丙沙星 0 9 6 8 9 8 2 0 0 0 0 42(n6） 氧氟沙星 2 7 10 10 7 5 0 0 0 0 1 42(n7) 合計 56 37 44 46 35 32 21 14 4 4 1 294 表2四環(huán)素中度敏感以上Uu株的其

6、他抗菌藥的MIC分布 編號 MIC(μg/ml) 四環(huán)素 強(qiáng)力霉素 美滿霉素 氧氟沙星 環(huán)丙沙星 紅霉素 阿奇霉素 2 32 8 4 4 1 4 0.5 5 8 4 4 1 0.5 1 0.5 6 32 8 4 2 2 2 0.5 7 16 8 4 2 2 2 1 9 16 8 4 2 2 1 0.5 15 8 2 2 1 4 0.12 0.12 17 32 4 1 2 2 1 1 21 32 4 4 0.5 0.5 0.5 0.12 23 16 8 4 0.25 0.5 0.06 0.06 25 8 4 2 0.5 4 0.06 0.06 26 8 4 2 0.25 0.5 0

7、.06 0.06 36 8 2 2 0.25 0.25 8 8 G 15.10 4.76 2.83 0.89 1.12 0.59 0.33 處可見一明顯的條帶(圖1)，與PCR DNA標(biāo)記所示分子量相似的陽性 帶有30例，陽性檢測率為71.4%。 (五)tetM PCR產(chǎn)物的酶切反應(yīng)：42個Uu分離株中30株經(jīng)PCR擴(kuò)增出現(xiàn)單條397特異性擴(kuò)增帶，將擴(kuò)增產(chǎn)物用Taq-1限制性內(nèi)切酶保溫過夜酶解后，在2%瓊脂糖凝膠電泳上出現(xiàn)預(yù)期三條清晰酶切片段，1株未出現(xiàn)預(yù)期三條酶解帶(圖2)。 圖1Uu分離株tetM基因的PCR產(chǎn)物 Lane 1PCR marker，Lane 2Lane 16酶切產(chǎn)物 圖 2

8、tetM PCR產(chǎn)物的酶解結(jié)果 (六)tetM基因檢測與MIC的關(guān)系：表3示tetM檢測結(jié)果與四環(huán)素族MIC濃 度的分布，四環(huán)素MIC為0.06μg/ml的也被檢出tetM基因，如第19、30、38株等 ，第5株MIC=8μg/ml的模板DNA并未擴(kuò)增出 表3tetM基因檢測 與四環(huán)素族MIC濃度的關(guān)系 編號 tetM MIC(μg/ml) 四環(huán)素 美滿霉素 強(qiáng)力霉素 1 + 0.5 0.12 0.25 2 + 32 4 8 3 - 0.5 0.12 0.12 4 - 0.25 0.25 0.25 5 - 8 4 4 6 + 32 4 8 7 + 16

9、 4 8 8 - 0.12 0.06 0.06 9 + 16 4 8 10 + 2 1 1 11 - 0.25 0.12 0.12 12 + 0.12 0.06 0.06 13 + 0.5 0.5 0.25 14 + 4 1 2 15 + 8 2 2 16 + 0.5 0.5 0.5 17 + 32 1 4 18 - 0.5 0.25 0.06 19 + 0.06 0.06 0.06 20 + 2 2 2 21 + 32 4 4 22 + 2 0.5 1 23 + 16 4 8 24 - 0.06 0.06 0.06 25 + 8 2 4 26 + 8 2 4 27 + 1 0.25 0.25

10、 28 + 4 0.5 0.5 29 + 4 1 2 30 + 0.06 0.06 0.25 31 + 0.06 0.06 0.06 32 - 0.25 0.25 0.5 33 - 0.25 0.06 0.06 34 - 0.06 0.06 0.06 35 - 0.06 0.06 0.06 36 + 8 2 2 37 - 0.12 0.06 0.06 38 + 0.06 0.06 0.25 39 + 0.5 0.5 0.5 40 + 0.5 0.12 0.25 41 + 4 2 2 42 + 2 1 1 tetM基因片段。 討論 目前，持續(xù)性復(fù)發(fā)性非淋菌性尿道炎已成為日益常見和棘手的問題。雖然尚不清楚在急性NGU治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)性持續(xù)性NGU的病例有多少，但大多數(shù)是在四環(huán)素類藥物治療癥狀減輕或漸消失后重新出現(xiàn)明顯輕于急性期的有關(guān)癥狀。四環(huán)素類藥為微生物蛋白合成抑制劑，測定Uu標(biāo)準(zhǔn)株對四環(huán)素類、喹諾酮類及大環(huán)內(nèi)酯類亦均有較好而穩(wěn)定的抑菌效果，而42個臨床株對7種抗菌素的MIC分布差異較大。 從表1可看出，紅霉素及阿奇霉素的MIC僅在0.06μg/ml就可分別抑制15株及12株的Uu分離 株生長，提示抑菌效率高。在四環(huán)素族中，四環(huán)素效果較差，只7株MIC=0.06&a