天然藥物化學(xué)實驗

1、目 錄中文摘要 2英文摘要 2文獻(xiàn)綜述 2 材料方法 3結(jié) 果 4討 論 6結(jié) 論 6參考文獻(xiàn) 6摘要目的：從槐花米中提取并精制蘆丁，用特征反應(yīng)及紫外鑒定； 方法：堿提取-酸沉淀法提取蘆丁，鹽酸-鎂粉反應(yīng)、枸櫞酸反應(yīng)、Molish 反應(yīng)及紫外進(jìn)行鑒定；結(jié)果：成功從槐花米中提取出 1.3243g 蘆丁粗品，精制后得0.6908g蘆丁精品。結(jié)論：堿提取-酸沉淀法能從槐花米中提取一定量蘆丁。AbstractObjective: To extract rutin from Pagodatree Flower and refined it. Identify it with characteristic

2、 responses and UV identification;Methods: Use alkaline extraction - acid precipitation to extract rutin, and hydrochloric acid - Mg reaction, ZrOCl2/citrate reaction, Molish reaction and UV are used to identiy it;Results: The extracted rutin crude from Pagodatree Flower is 1.3243g, refined rutin is

3、0.6908g.Conclusion: The alkaline extraction - acid precipitation did extract some rutin from Pagodatree Flower.文獻(xiàn)綜述槐花米是豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾及花。蘆丁(Rutin)，又稱蕓香甙(Rutioside)，是由槲皮素C。位上的羥基和蕓香糖結(jié)合而形成的雙糖甙，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為5，7，3 ，4 ，一四羥基，3一蕓香糖黃酮，對心血管系統(tǒng)的疾病有很好的預(yù)防和治療作用1。產(chǎn)品為黃綠色或淡黃色針狀晶體，常含有3個結(jié)晶水，置空氣中顏色變深，熔點為188190

4、C，225分解，旋光度為+1 382。(23 cC醇中)；在冷水中溶解度為11 000，沸水中為1200，冷醇中為1650，熱醇中為160；可溶于吡啶及堿性溶液中，幾乎不溶于苯、醚、氯仿及石油醚。蘆丁是中藥槐花米中止血的有效成分，有維生素P樣的作用，能調(diào)節(jié)毛細(xì)血管的滲透性，保持和恢復(fù)血管的正常彈性，臨床上主要用于治療高血壓及毛細(xì)血管出血。由于蘆丁的藥用價值，所以開發(fā)利用的較早2。提取蘆丁后，取蘆丁及其標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液進(jìn)行TLC鑒別3；取蘆丁的甲醇液用診斷試劑NaOMe，A1C13/HC1，NaOAc/H3BO3，在200500 nm波段內(nèi)進(jìn)行掃描，進(jìn)行UV光譜鑒別。研究發(fā)現(xiàn)堿提pH 10、酸沉

5、pH 2時，粗品得率為207，純品得率為142 ；而堿提DH 9、酸沉pH 3時，粗品得率為202，純品得率為181 ，表明酸堿濃度適宜，則可提高蘆丁產(chǎn)率；而堿提pH值偏高，酸沉pH值偏低，雖然可以提高粗提率，但雜質(zhì)含量較高，同時發(fā)現(xiàn)這一條件較前者能加快反應(yīng)速度。因此從反應(yīng)速度與純品得率兩方面考慮，槐花米中蘆丁的提取可選用堿提pH 9、酸沉pH 2的酸堿度4。材料方法材料:實驗所用的材料：槐花米（黑龍江千行健中藥飲片有限公司）、氧化鈣（天津市博迪化工有限公司）、濃鹽酸 （分析純 北京化工廠）、濃硫酸（分析純）、75%乙醇（分析純）、 氨水（分析純）、鎂粉、2%ZrOCl2/甲醇溶液、2%枸櫞酸

6、/甲醇溶液、10%-萘酚/乙醇溶液、1%硫酸、95%乙醇、75%乙醇、2%AlCl3(以上試劑均由實驗室提供)儀器:LBW600萬用爐（天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司）、SHB循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、UV-2550紫外可見分光光度儀（日本島津公司）；布氏漏斗、研缽、紅外燈、聚酰胺薄層板、燒杯、pH試紙、量筒、天平。方法：1.蘆丁的提取蘆丁石灰乳（大約1.5g左右）調(diào)至PH至8-9，加熱煮沸，保持30分鐘（注意維持PH8-9）趁熱過濾殘渣濾液在60-70下用濃HCL調(diào)PH至4-5充分靜置，沉淀完全，抽濾（抽濾瓶獻(xiàn)浴熱）濾液沉淀（粗制蘆?。┲亟Y(jié)晶將沉淀懸浮于蒸餾水中，加熱煮沸

7、15分鐘后趁熱過濾殘渣濾液充分靜置，過濾60-70低溫干燥。蘆丁（精制品）稱取槐花米20g，置于干燥的研缽中用缽棒擠壓成粗粉備用，去1.5g石灰粉，置于干凈的小研缽中，加入10ml水后研成乳液備用。講粉碎的槐花米置于500ml燒杯中，加水300ml，在攪拌下加入上述制備的石灰乳，調(diào)節(jié)ph至9，加熱至微沸，維持ph30分鐘，趁熱抽濾，棄去不溶物，充分靜置，過濾，收集蘆丁結(jié)晶，紅外燈干燥，得精品蘆丁。2.蘆丁的鑒定2.1蘆丁的特征鑒定取蘆丁3-4mg,加乙醇5-6ml溶解，分成3份分做下述試驗：（1）取上述溶液1-2ml,加2滴濃鹽酸，在酌加少許鎂粉，注意觀察顏色變化情況。（2）取上述溶液1-2m

8、l，然后滴加2%的甲醇溶液，注意觀察顏色變化情況，在繼續(xù)向試管中加入2滴檸檬酸的甲醇溶液，并詳細(xì)記錄顏色變化情況。（3）取上述溶液1-2ml，然后再加等體積的10%-萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁滴加濃硫酸，注意觀察兩液界面產(chǎn)生的顏色變化。2.2蘆丁的紫外鑒定取蘆丁溶于色譜純甲醇中，加入規(guī)定的試劑，測定其UV光譜。3.蘆丁的水解及糖和苷元的鑒定 （1）水解方法：精密稱取蘆丁1g，加1%硫酸100ml，加熱40分鐘，放冷靜置，過濾。所得沉淀用少于水洗除酸，干燥稱重，然后用乙醇（95%約10ml）進(jìn)行重結(jié)晶，即得苷元。（2）糖的鑒別：取上述水解母液10ml，用Ba(OH)2至中性，過濾生成硫酸鋇沉淀，

9、濾液用熱水浴濃縮至1ml備用。取1張圓形濾紙，用正丁醇-乙酸-水（4:1:5）做展開劑，將樣品、葡萄糖、鼠李糖分別點樣兩次，進(jìn)行展開。（3）蘆丁及其苷元的聚酰胺色譜 去聚酰胺薄層板，分別點上蘆丁及其苷元樣品，用75%乙醇溶液進(jìn)行點開，待展開一定距離后取出吹干，分別在日光，紫外燈下觀察斑點顏色與熒光。在用氨蒸汽和三氯化鋁進(jìn)行顯色，觀察斑點顏色和熒光變化。實驗結(jié)果提取制得蘆丁粗品1.3243g，精制后得0.6908g蘆丁精品。0.4左右精制蘆丁水解后得苷元0.1427g。蘆丁的鑒別：1.鹽酸鎂粉反應(yīng)：加入鎂粉后產(chǎn)生氣泡，并放大量的熱。溶液由淺黃色透明溶液變?yōu)樯罘凵该魅芤?，為陽性反?yīng)，說明含有黃酮

10、類化合物，即應(yīng)含有蘆丁。2.ZrOCl2 /枸櫞酸反應(yīng)：加入鋯鹽后溶液顏色加深，加入枸櫞酸后溶液黃色變淺。說明蘆丁為5-羥基黃酮化合物。3.Molish反應(yīng)：溶液分層，上層呈紅褐色，下層墨綠色，兩層交界處有深棕色環(huán)。說明蘆丁中含有糖。蘆丁的紫外光譜解析上圖顯示：峰帶2在256nm左右，峰帶1在360nm左右，初步判斷其為黃酮或黃酮醇類化合物。蘆丁的水解1.糖的鑒定RF值12平均葡萄糖0.0630.0790.07鼠李糖0.260.310.28樣品0.0450.050.052、蘆丁及苷元的鑒別所加試劑無NH32%AlCl3日光紫外日光紫外日光紫外蘆丁黃微弱熒光顏色加深熒光稍強有熒光有熒光槲皮素色極

11、淡無熒光顏色加深有熒光有熒光有熒光明顯討論1. 根據(jù)所查文獻(xiàn)顯示，粗品率可為20%左右，按照我們所稱20克，應(yīng)得到近4克，但最后只得到了1.3243g粗品?？赡茉颍海?） 所使用藥物不夠好，整個實驗室的結(jié)果普遍不夠；（2） 據(jù)所查文獻(xiàn)介紹，堿提酸沉法的pH調(diào)整在堿提pH 10、酸沉pH 2時，提取率比較高，所以實驗操作時為防止失敗，堿一直維持在9或9以下，而酸由于一直未有沉淀析出，后來多加了一些，不過也未到2,可能是提取率低的又一原因；（3） 按照參考書所說為防止抽濾時粉末過細(xì)堵住濾孔，未將槐花米研磨過細(xì)，不過可能也因此導(dǎo)致提取不充分。（4） 沉淀析出過慢，最后實驗結(jié)束時還有沉淀析出，不過無

12、法計算在內(nèi)。2. 精制產(chǎn)率過低可能與晶體析出過慢有關(guān)，有些未計算在產(chǎn)率內(nèi)。3. 鹽酸鎂粉反應(yīng)加入鎂粉較多，所以冒了很多的氣泡和放出大量熱。4. 本實驗紫外鑒定時未加入鑒定試劑AlCl3等進(jìn)行紅移或藍(lán)移的測定，不過也粗略檢測出其為黃酮類化合物。5. 糖類樣品的點出的不好，只看到了一個，可能原因是葡萄糖與鼠李糖點樣次數(shù)相同，但葡萄糖的色較鼠李糖的色深的多，可能是由于鼠李糖與此顯色劑結(jié)合效果不夠好，而樣品點樣次數(shù)較少，所以鼠李糖那個點可能就看不到了，能看到葡萄糖說明蕓香糖水解下來并水解開了，但由于時間原因，并未水浴，所以溫度可能過高，有損失。結(jié)論用堿-酸法的確可從槐花米中得到一定的蘆丁，進(jìn)一步水解可得苷元。通過特征鑒別實驗及紫外可對蘆丁進(jìn)行定性鑒定。紙薄層