mmp2upa在胃癌中的表達(dá)及意義

1、              作者：劉建紅 張成武 竇拉加 【摘要】  目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶-2(mmp-2)和尿激酶型纖溶酶原激活物(u-pa)在人胃癌中的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組織化學(xué)s-p法檢測(cè)60例胃癌和30例正常胃組織mmp-2和u-pa表達(dá)情況。結(jié)果 mmp-2和u-pa在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.67、75.00；在正常胃組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.33、6.67。mmp-2的表達(dá)與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而與胃癌

2、分化程度無(wú)關(guān)；u-pa的表達(dá)與胃癌分化、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān),且mmp-2、u-pa在胃癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性。結(jié)論 mmp-2和u-pa在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，兩者呈正相關(guān)，可作為判斷胃癌預(yù)后的分子標(biāo)志物。 【關(guān)鍵詞】  胃癌 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 尿激酶型纖溶酶原激活物     abstract  objective  to study the significance of mmp-2 and u-pa expression and the relationship with invasion and met

3、astasis of gastric cancer as well as their interactionmethods  mmp-2a and u-pa  expression were examined by immunochemical s-p staining method in 60 cases of human gastric cancer and in 30 cases normal tissueresults  the positive rates for the expression of mmp-2 and u-pa in gastric c

4、ancer tissues were 61.6 and 75.00; 13.33 and 6.67 in normal tissue respectively. there were significant correlation between the positive expression of mmp-2 and the depth of invasion, lymph node metastasis except for differentiation. the positive expression of u-pa are correlated with the differenti

5、ation，depth of invasion and lymphatic metastasis. moreover, there was a positive relationship between the expression of mmp-2 and u-pa in gastric cancer tissues. conclusion the positive expression of mmp-2 and u-pa are correlated with the invasion and metastasis in gastric carcinoma. the expression

6、may be important to the determination of the malignant biological property and the prognosis of gastric cancer     key words  gastric cancer  mmp-2  u-pa     細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解、破壞是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要步驟，研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶(mmps)是降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的最主要的蛋白水解酶，mmp-2是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要成員，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)

7、程中起重要作用。尿激酶型纖溶酶原激活物（u-pa）存在于人類大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，通過(guò)參與組織結(jié)構(gòu)的再改造過(guò)程促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。我們對(duì)60例胃癌手術(shù)患者的胃癌組織及30例正常胃組織中的 mmp-2、u-pa表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，希望通過(guò)該檢測(cè)結(jié)果分析、探討mmp-2、u-pa的表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)程度、分化程度及與淋巴轉(zhuǎn)移間的關(guān)系。     1  材料與方法     11  材料     收集 2006年 12月至2007年 12月青海大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)采集的胃癌標(biāo)本 60例和正常胃組織(距癌邊緣

8、5 cm以外)標(biāo)本30例。其中男性 38例，女性 22例，年齡 3076歲，平均年齡約為53歲。60例患者中癌細(xì)胞呈中高分化者28例，低分化者32例；侵及漿膜層者42例，未侵及漿膜層者18例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者20例。所有患者術(shù)前未經(jīng)放療和化療。標(biāo)本均經(jīng)10中性福爾馬林液固定和石蠟包埋，連續(xù)切片后常規(guī)制切片。主要試劑鼠抗人mmp-2單克隆抗體、鼠抗人u-pa單克隆抗體、s-p試劑盒、 dab顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。     12  方法     石蠟標(biāo)本經(jīng)連續(xù)切片后，所有標(biāo)本均常規(guī)行he染色和鏈

9、霉素親和素-生物素-過(guò)氧化酶復(fù)合物(s-p)法染色。免疫組織化學(xué)染色程序嚴(yán)格按 s-p試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。每組染色均設(shè)立對(duì)照，以 pbs液代替一抗作陰性對(duì)照。     13  結(jié)果判斷     mmp-2判定：胞膜和胞質(zhì)內(nèi)顯示棕黃色顆?；驁F(tuán)塊者視為陽(yáng)性。細(xì)胞計(jì)數(shù)方法：每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，在每個(gè)視野所觀察的100個(gè)細(xì)胞中計(jì)數(shù)出其中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取5個(gè)視野均值以百分?jǐn)?shù)表示細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)。陽(yáng)性細(xì)胞< 10者為陰性(-)，10者為陽(yáng)性(+)。     u-pa判定：染色以胞漿為主，胞核、胞膜

10、有時(shí)亦可見染色，出現(xiàn)棕黃色顆粒者判定為陽(yáng)性。每張切片觀察5個(gè)視野 ，中度或中度以上著色細(xì)胞數(shù)25者為陽(yáng)性(+)，<25者為陰性(-)。     14  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法     采用spss 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用 spearman相關(guān)性檢驗(yàn) ，檢驗(yàn)水準(zhǔn)=005。     2  結(jié)果     21  mmp-2、u-pa的表達(dá)     mmp-2、u-pa在胃癌組織陽(yáng)性表達(dá)

11、率分別為61.67、75.00，在正常胃組織中表達(dá)率分別為13.33、6.67。mmp-2、u-pa在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與在正常胃組織中的表達(dá)有差別(p<0.001)，在胃癌組織中呈高表達(dá)，見表 1。表1mmp-2、u-pa在胃癌組織和正常胃組織中的表達(dá)情況    22   mmp-2、u-pa表達(dá)與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析     mmp-2表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度有關(guān)(p     23  mmp-2與u-pa表達(dá)的相關(guān)性分析   &#

12、160; 對(duì)癌組織中mmp-2和u-pa的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，二者的相關(guān)系數(shù)為rspearman=0.336，p=0.009，此二者關(guān)系呈正相關(guān)，見表 3。表2胃癌組織mmp-2、u-pa表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系 例()     病理因素例數(shù)mmp-2陽(yáng)性2值p值u-pa陽(yáng)性2值 p值浸潤(rùn)程度  侵及漿膜層4231(73.81)36(85.71)  未侵及漿膜層186(33.33)8.730.059(50.00)8.570. 05分化程度  中高分化2816 (57.14)15 (53.57)  低分化3221(65.6

13、2)0.450.0530(85.71)12.850. 05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移  轉(zhuǎn)移4030(75.00)35(93.75)  未轉(zhuǎn)移207 (35.00)9.02 0. 0510(50.00)10.580. 05  表3mmp-2與u-pa的表達(dá)相關(guān)性     3  討論     轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)是惡性腫瘤最重要的生物學(xué)特征，其機(jī)制復(fù)雜,尚未得以闡明。mmp-2是一種 zn 依賴性蛋白酶，是降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類，其底物為?型膠原，具有很強(qiáng)的水解?型膠原的能力，其主要作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)，分解基

14、底膜中的纖維連接蛋白和層粘連蛋白。因此它在腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起重要作用。     本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在正常胃組織中其表達(dá)率為13.3。結(jié)果與國(guó)內(nèi)外研究略有差異，國(guó)內(nèi)潘留蘭1 、國(guó)外derric等2報(bào)道正常胃黏膜上皮mmp-2呈陰性表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)中mmp-2在正常胃組織中表達(dá)陽(yáng)性不除外與取材于同一標(biāo)本因素有關(guān)。mmp-2在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為61.67，mmp-2高表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與多數(shù)研究結(jié)果相一致。nomura3研究發(fā)現(xiàn)，mmp-2主要表達(dá)于進(jìn)展期胃癌，并與腫瘤的血管侵犯情況密切相關(guān)。allgayer4同樣認(rèn)為mmp-2的激活酶在

15、過(guò)度表達(dá)的情況下，mmp-2可作為判斷胃癌預(yù)后的指標(biāo)。     近年來(lái)的研究表明，腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移與局部的纖溶酶活性增強(qiáng)有關(guān)。u-pa及upa-r系統(tǒng)可降解消化大多數(shù)基質(zhì)物質(zhì)，并且使膠原酶原形成活性膠原酶共同在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程（如腫瘤血管生成，腫瘤細(xì)胞脫落，基質(zhì)浸潤(rùn)、侵入和逸出循環(huán)系統(tǒng)等多個(gè)重要過(guò)程）發(fā)揮作用。在很多腫瘤組織中upa-r的表達(dá)明顯高于正常組織，且upa-r的表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)方式明顯相關(guān)5。bianchi等6發(fā)現(xiàn)，upa-r出現(xiàn)在浸潤(rùn)的乳腺癌中，而在正常組織中未出現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，u-pa在胃癌組織陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)75.0，其與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、浸

16、潤(rùn)程度相關(guān)（p     目前對(duì)這兩個(gè)因子的聯(lián)合研究很少。我們的研究顯示，mmp-2和u-pa在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且兩者作用呈正相關(guān)。allgayer h 研究表明，高水平upa-r表達(dá)的胃癌患者組存在mmp-2與預(yù)后的相關(guān)性，提示僅在mmp-2的激活酶過(guò)度表達(dá)的情況下，mmp-2可作為胃癌的預(yù)后因素。纖維蛋白酶原在u-pa 作用下形成纖維蛋白溶解酶，后者可降解消化大多數(shù)基質(zhì)物質(zhì)，與mmp-2的作用有相同之處，因此通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)mmp-2和u-pa可為臨床判斷胃癌的預(yù)后提供有效依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 潘留蘭，鮑曉蕾 ，陳永勝，等.mmp-2

17、、mmp-7蛋白在胃癌組織中表達(dá)的意義.實(shí)用癌癥雜志，2006，21（4）363-3652derrico a, garbisa s, liotta la, et al. augmentation of type iv collagenase, lamin receptor, ki 67 proliferation antigen associated with human colon, gastric and breast carcinoma progression. mod pathol, 1991，4239-2463 nomura h, fujimoto n, seiki m, et al

18、. enhanced production of matrix metalloproteinases and activation of matrix metalloproteinase 2 (gelatinase a) in human gastric j cancer, 1996,699-164allgayer h, heiss mm, sohildberg fw. prognostic factors in gastric cancer. br j surgery， 1997，841651-16645 童苗，張啟良，倪玉英，等.胃和結(jié)腸組織中upa受體表達(dá)的病理意義.上海第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，14217-2206 bianchi e,cohen rl,thor