THP-1培養(yǎng)(總結(jié))

1、【精品文檔】如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除，僅供學(xué)習(xí)與交流THP-1培養(yǎng)(總結(jié)).精品文檔.THP-1培養(yǎng)1、 細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮罐中快速取出細(xì)胞，然后在37度水浴中快速搖動(dòng)約1-2min，水面要在凍存管蓋以下，防止水進(jìn)入凍存管。2、 轉(zhuǎn)入平板：在超凈臺(tái)中，取一平板，先加入12ml 1640培養(yǎng)液，鋪滿板底，然后把凍存管中的細(xì)胞全部吸到平板中，8字搖勻，顯微觀察狀況，然后37度培養(yǎng)；3、 細(xì)胞換液：復(fù)蘇過夜后，觀察培養(yǎng)液有變黃(2-3天)，此時(shí)換液，先把細(xì)胞液全部吸入15ml離心管中，900-1000r/min離心5min，（轉(zhuǎn)速不能大于1000），吸掉上層培養(yǎng)液，加入新的1640，吹勻，全部吸到培養(yǎng)

2、板中，37度培養(yǎng)。4、 傳代：懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：有以下兩種方法： 1、直接傳代法：懸浮細(xì)胞自然沉淀瓶底；用吸管吸去上清1/22/3；輕輕吹打成細(xì)胞懸液；等分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶（皿） 2、離心傳代法：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；8001000r/min離心5min，棄上清；加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)；吸管吹打成為細(xì)胞懸液；分瓶（皿）懸浮細(xì)胞傳代，如果需要做實(shí)驗(yàn)大量擴(kuò)增細(xì)胞的話，可以傳代前先將培養(yǎng)瓶直立靜置，待大部分細(xì)胞都沉降的細(xì)胞瓶底，勿晃動(dòng)，輕輕吸出培養(yǎng)基，再加入新鮮培養(yǎng)基即可。這樣細(xì)胞數(shù)目不會(huì)損失多少，而且上層吸去的也是死細(xì)胞。但建議加入新鮮培養(yǎng)基后分瓶擴(kuò)增，畢竟一個(gè)較小的空間和

3、有限的培養(yǎng)基環(huán)境下細(xì)胞擴(kuò)增有限。如果暫時(shí)不要做實(shí)驗(yàn)，只是維持傳代的話，只要將大部分培養(yǎng)基吸去，留一點(diǎn)兒在瓶底，再加入新鮮培養(yǎng)基即可。至于懸浮細(xì)胞何時(shí)傳代合適，個(gè)人經(jīng)驗(yàn)（我只養(yǎng)過THP-1和U937兩種懸浮細(xì)胞）是待培養(yǎng)基變黃有些過，這時(shí)顯示培養(yǎng)基已明顯偏酸，對(duì)細(xì)胞并不適宜。一般待培養(yǎng)基開始變黃，這時(shí)將細(xì)胞瓶放平，細(xì)胞能密密麻麻鋪滿整個(gè)瓶底就要傳代了，這表明細(xì)胞的生長(zhǎng)空間要不夠了，就需傳代分瓶擴(kuò)增。5、 凍存液：20% 1640+70%胎牛血清+10%DMSO （ATCC里邊有說明）；(7:2:1)梯度降溫凍存，4度，30min；-20度，1h；-80度，過夜；然后轉(zhuǎn)入液氮。6、 THP-1 細(xì)

4、胞是懸浮細(xì)胞，相對(duì)貼壁細(xì)胞要求高一點(diǎn)。細(xì)胞養(yǎng)不好，可能的原因有，THP-1細(xì)胞特別依賴細(xì)胞濃度，ATCC上10 5到106每ML，是一個(gè)很高的密度，細(xì)胞少了就不太容易養(yǎng)好。1、細(xì)胞株的來源很重要，如直接來源于ATCC（American Type Culture Collection 美國(guó)模式菌種保藏中心）生命力要強(qiáng)于國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫的2、注意細(xì)胞的密度一定要高，介于5×105106/ML之間，增值的快。細(xì)胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長(zhǎng)，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基嚴(yán)重泛黃，細(xì)胞數(shù)量會(huì)巨增。這一點(diǎn)不同于同是單核細(xì)胞系的U937細(xì)胞。3、THP-1細(xì)胞適合在細(xì)胞ph環(huán)境偏酸環(huán)境生長(zhǎng)，對(duì)培養(yǎng)基變化非常敏感，所以盡量使用相同ph的1640，4、還要注意，傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)顆粒變多。一般THP-1生長(zhǎng)相當(dāng)快，對(duì)于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后34天再觀察，一般4天時(shí)間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細(xì)胞數(shù)量巨增。1)THP-1細(xì)胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養(yǎng)基。越酸的條件，細(xì)胞密度越大，細(xì)胞就長(zhǎng)得越好。2） 不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補(bǔ)充培養(yǎng)基）3） 使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫