同種異基因造血干細胞移植受者血清白介素18水平與急性移植物抗宿主病的關(guān)系(一)

1、同種異基因造血干細胞移植受者血清白介素 18水平與急性移植物抗宿 主病的關(guān)系一【摘要】本研究探討同種異基因造血干細胞移植創(chuàng)b HSCT受者血清白介素18IL 18與急性移植物抗宿主病aGVHD的關(guān)系，查明血清 |_ 18在aGVHD發(fā)病中的作用，為臨床早期預(yù)測aGVHD提供可靠指標。 采用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測62例dll。HSCT患者移植前及 移植后aGVHD發(fā)生前后血清18表達水平。62例患者被分為5組： A組為無aGVHD移植前組28例，指移植后沒有發(fā)生aGVHD的患者 在移植前收集的標本；B組為有aGVHD移植前組34例，指移植后發(fā) 生aGVHD的患者在移植前收集的標本;C

2、組為aGVHD病癥前組34例, 指臨床出現(xiàn)I-II級aGVHD病癥前3-4天的標本；然后根據(jù)I-II級aGVHD 患者治療后，有無進展至山-IV級回憶性地將aGVHD前組患者分為療效 好組18例和療效差組16例；D組為I-II級aGVHD組；E組為III-IV 級aGVHD組16例。結(jié)果說明：34例患者發(fā)生I-II級aGVHD其中 16例aGVHD進展至III-IV級；發(fā)生aGVHD患者的血清1 18表達水平 顯著高于未發(fā)生aGVHD患者，血清1 18表達水平上升發(fā)生在aGVHD 臨床病癥出現(xiàn)前3天左右；血清1 18表達水平與aGVHD的嚴重程度 呈正相關(guān)，與HLA配型、預(yù)處理方案及感染無關(guān)；

3、aGVHD早期血清18 表達水平與預(yù)后相關(guān)；血清IL 18高表達者aGVHD容易進展至III IV 級。結(jié)論：血清IL 18與aGVHD的發(fā)病相關(guān)聯(lián)，檢測血清IL 18水平 有助于aGVHD早期診斷，血清1 18表達水平可作為評估aGVHD病 情、判斷預(yù)后的指標。【關(guān)鍵詞】同種異基因造血干細胞移植白介素18急性移植物抗宿主病早期預(yù)測CorrelationbetweenSerumLevelsofIL 18andAcuteGraftVersusHostDisease in Patie ntsafterAlloge neicHematopoieticStemCellTra nspla ntati o

4、n AbstractThisstudywasaimedtoi nv estigatethecorrelati on betwee ntheseruml evelsofIL 18andacutegraftversushostdisease(aGVHD)inpatientsreceivedal logeneichematopoieticstemcelltransplantation(allo HSCT)，andtoexploretheroleofserumlL lSlevelsinthepathogenesisofaGVHDsoast oprovideareliablea ndearly in d

5、icatorforthediag no sisofaGVHD.62patie ntsrec eivedallo HSCTwereenrolledinthisstudy.Beforeandaftertransplantation.as wellasatonsetofaGVHD.theserumlevelsoflL 18wereanalyzedbyELISA.62pa tie ntsweredividedi nto5groups:groupAwithoutaGVHD(28cases)referredtoth epatie ntswhohad no aGVHDaftertra nspla ntati

6、o nan dwhosespecime nwereco llectedbeforetra nspla ntatio n;groupBwithaGVHDbeforetra nspla ntatio n(34c ases)referredtothepatie ntswhohadaGVHDaftertra nspla ntatio nan dwhosesp ecime nwerecollectedbeforetra nspla ntatio n;groupCbeforethe on setofaGVH D(34cases)referredtopatie ntswithl-llgradeaGVHDwh

7、osespecime nwerecoll ectedbefore3-4days,a ndaccordi ngtowhetherthel-llgradeaGVHDpatie ntsde velopedIII-IVgradeornotaftertreatme nt,thesepatie ntsweredivided in totwos ubgroupsretrospectively ,on esubgrouphadgoodcurativeeffect(18cases)a ndt heothersubgrouphad no t(16cases);groupDwithl-llgradeaGVHD;gr

8、oupEwithl ll-IVgradeaGVHD(16cases).Theresultsshowedthat34patie ntsdevelopedl-llgr adeaGVHD,the noutofthem16patie nts(16/34)developedHI-IVgradeaGVHD.T heserumlevelsofIL ISinthesepatientSwithaGVHDwerehighertha nthati npa tie ntswithoutaGVHD.About3daysbefore on setofaGVHD,theserumlevelsoflL 18startedto

9、increaseJheserumlevelsoflL 18werecorrelatedwiththeseve rityofaGVHD,but no correlati on wasfo un dwith in fectio n,con diti onin gregime n sanddisparityofHLA typing.TheserumlevelsoflL ISintheearlystageofaGV HDwerecorrelatedwithprog no sis.TheaGVHDofpatie ntswithhigherserumlev elsofIL 18easydevelopedt

10、oIII IVgradeaGVHD.Itisconcludedthattheseru mlevelofIL ISinthepatientsreceivedallo HSCTisrelatedtotheoccurrence ofaGVHD.DetectionsofwrumlL 18arehelpfulfortheearlydiagnosisofaGVH D;andtheserumlevelsoflL lSmaybeconsideredasareliableindicatortoevalu atetheprog no sisa ndseverityofaGVHD.Keywordsallogenei

11、chematopoieticstemcelltransplantationjIL 18;acutegraft versus hostdisease;earlypredict ionJExpHematol2007;15(3):553-557中國實驗血液學雜志 JExpHematol2007;15(3同種異基因造血干細胞移 植受者血清白介素18水平和急性移植物抗宿主病的關(guān)系急性移植物抗 宿主病(aGVHD是同種異基因造血干細胞移植(汕0 HSCT)的主要 并發(fā)癥之一。已有的研究說明，aGVHD發(fā)生與細胞因子密切相關(guān)1-4。目前臨床上主要根據(jù)皮膚、肝臟、胃腸道受累病癥的出現(xiàn)和程度對aGVHD進行診斷

12、和分級，缺乏直接的免疫學證據(jù)，因此需要尋找一種 能夠直觀、實時反映aGVHD的免疫學指標。本研究采用雙夾心酶聯(lián)免 疫吸附法ELISA檢測62例汕0 HSCT患者其中HLA配型不合/單倍型 相合的34例移植前及移植后aGVHD發(fā)生時血清8表達水平，以 探討血清18在aGVHD發(fā)病中的作用，為臨床早期診斷 aGVHD提 供可靠指標。至今為止，有關(guān)olio HSCT后血清1 18水平報道，均 為hla全相合單純allo BMT或olio PBSCT受者血清1 18水平檢測 結(jié)果，我們第一次報道hla配型不合/單倍型相合訓(xùn)o BMT加Silo PBSCT受者血清IL 18水平與aGVHD的關(guān)系。材料和

13、方法病例62例dllo HSCT患者為2004年1月至2004年11月期間北京大學人 民醫(yī)院血液病研究所骨髓移植病房住院病人，男43例，女19例，中位 年齡309-49歲。62例中診斷為急性淋巴細胞白血病ALL13例，急性髓 系白血病AML15例,慢性髓系白血病CML27例,骨髓增生異常綜合征 MDS3例,非霍杰金淋巴瘤NHL2例，再生障礙性貧血AA1例， 多發(fā)性骨髓瘤MM 1例。HLA配型全相合28例，HLA配型不合34 例，1個位點不合4例,2個位點不合18例,3個位點不合12例。所有患 者均簽署知情同意書。本研究選擇 34例I-II級aGVHD患者HLA配型 不合和全相合分別為20和14

14、例，其中16例為I-II級進展至III-IV級 aGVHD患者HLA配型不合和全相合分別 9例和7例，同時選擇28例無aGVHD患者作為比照其中 HLA配型不合和全相合各14例。 aGVHD的診斷及分級參照參考文獻5。62例患者分為5組：A組為 無aGVHD移植前組28例，指移植后沒有發(fā)生aGVHD的患者在移植 前收集的標本；B組為aGVHD移植前組34例，指移植后發(fā)生aGVHD 的患者在移植前收集的標本；C組為aGVHD病癥前組34例，指臨床 出現(xiàn)1-11級aGVHD病癥前3-4天的標本根據(jù)1-11級aGVHD患者治療后， 有無進展至III-IV級回憶性將aGVHD前組患者分為療效好組18例

15、 和療效差組16例；D組為I-II級aGVHD組；E組III-IV級aGVHD組16例。28例無aGVHD組與34例有aGVHD組中位年齡無顯著差異 P>0.05。另設(shè)感染組24例，是指沒有合并aGVHD時單純感染患者 的標本。血清標本米集分別于移植預(yù)處理前、預(yù)處理后輸注干細胞前，移植后住院期間每周1、 4采集外周靜脈血標本5ml，血液標本經(jīng)離心后取血清于-80度凍存?zhèn)?用。血清IL 18檢測患者血清IL 18水平采用人IL 18試劑盒由深圳市炬英生物科技有 限公司提供用ELISA法檢測。主要步驟如下：在微孔板留一空白對照 孔，其他孔加血清標本或不同濃度標準品100卩參加50 生物素標記

16、的抗體；室溫孵育3小時后洗滌3次，參加100卩酶結(jié)合物；室溫孵育30分鐘后洗滌3次，參加100卩底物；室溫避光，顯色12至15分鐘， 加100卩硫酸，終止反響，450nm處讀取OD值。試劑盒的最小檢測濃 度為 45pg/ml。HLA配型、預(yù)處理方案、供者造血干細胞發(fā)動及采集、GVHD預(yù)防、植活檢測HLA配型A、B位點檢測方法為低分辨方法，DR位點采用高分辨方法。 預(yù)處理方案阿糖胞苷4g/m2, HLA配型全相合者用1天移植前10天， HLA配型不合者用2天移植前10，移植前9天；Bu馬利蘭 2mg/kg d X3天；環(huán)磷酰胺1.8g/m2 d X2天；甲基環(huán)己亞硝脲ME CCNU250mg/m2< 1 天。供者造血干細胞發(fā)動及采集供者接受 hG CSF日本中外制藥株式會 社產(chǎn)品5卩g/kg ，連續(xù)皮下注射5-6天，第4天采集骨髓有核細胞； 第5至6天采集PBSC總單個有核細胞數(shù)3-4 x 108/kgGVHD預(yù)防在經(jīng)典的環(huán)孢菌素 A加短程甲氨喋呤方案根底上，加用霉酚 酸酯，HLA配型不合者加用抗人胸腺細胞球蛋白預(yù)防 GVHD 植活