


下載本文檔
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、實驗前準備實驗器材:干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理鹽水、注射器(1ml、2ml)、黑 色記號筆、固定大鼠用粗線繩、大鼠板、 染色小燒杯、標本瓶 手術(shù)器械:備皮剪子 1、眼科剪 1、大直鑷 1 只、小彎鑷 1 對、(動脈夾 2)、 止血鉗 2-3、縫合線、縫合針、持針器 麻醉劑: 10%水合氯醛( 400mg/kg)保溫:60W白熾燈,于37cm高處直接照射能使肛溫保持在 37C栓線:直徑0.24mm,頭端光滑圓鈍;在栓線18mm的位置用黑色記號筆標記; 75%酒精清潔后置 1: 2500 單位肝素化生理鹽水中備用。體重與栓線直徑:直徑0.24mm的栓線適用于體重220-280g的SD大鼠。
2、TTC的配制:用0.2mol/L磷酸緩沖液(PBS)配成2%TTC溶液(pH7.4),避 光保存。藥物配制:無論生理鹽水還是受試藥物標簽均采用代號, 給藥及評分均采用單盲。儀器激光多普勒血流儀(Laser Doppler Flowmetry, LDF)系統(tǒng),包括:PeriFlux 5001 Ma in Unit,PF5010 LDPM Unit (激光多普勒微血流灌注量檢測單元),LD Probe407-1 ( Perimed Co., Jarfalla, Sweden ;大鼠腦立體定位儀(深圳市瑞沃德生命 科技有限公司);牙科手鉆(Stron g 90#, Korea);大鼠腦切片模具;熒光
3、正置 顯微鏡(NIKON ECLIPSE 80i, X400)及成像系統(tǒng)( ACT-2U NIKON Imaging System)。大腦中動脈栓塞( MCAO )模型的制備參照Zea Lon ga等2建立的大鼠大腦中動脈內(nèi)栓線阻斷方法,作適當改進。10 %水合氯醛溶液400mg/kg,腹腔注射麻醉動物。大鼠仰臥位固定,頸部正 中切開皮膚,鈍性分離各層組織,暴露右側(cè)頸總動脈 (CCA) 。分離至頸內(nèi)動脈(internal carotid artery, ICA)、頸外動脈(external carotid artery,ECA)分叉 后一段,仔細分離避免損傷迷走神經(jīng)和氣管,置線備用。于頸內(nèi)、
4、頸總動脈處用動脈夾夾閉, 頸外動脈近心端及遠心端結(jié)扎, 中間剪 斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線,將尼龍線由頸外動脈插入, 插入后用 0號絲線結(jié)扎,以防止出血,打開頸內(nèi)動脈處動脈夾,將尼龍線插入頸 內(nèi)動脈,繼續(xù)插入至顱內(nèi),插入深度約18.5 ±.5mm至微感阻力,使尼龍線頭端通 過MCA起始處,到達較細的大腦前動脈,此時即實現(xiàn)右側(cè)大腦中動脈的血流阻 塞,結(jié)扎ICA以固定尼龍線和防止出血,逐層縫合,尼龍線殘端留I cm長于皮外。假手術(shù)組只進行術(shù)前麻醉和血管分離術(shù), 不結(jié)扎及導入線栓。 手術(shù)過程中室 溫保持在24-25C,生物機能實驗系統(tǒng)進行動物呼吸及心電監(jiān)測。3局部腦血流量
5、測定大鼠俯臥位固定于立體定位儀上, 開顱窗并清理手術(shù)視野, 以前囟為坐標原 點,選取前囟后1-2mm、右側(cè)2-4mm為測定點9,周圍直徑約2-3mm區(qū)域用牙科 鉆打薄,保持硬腦膜的完整并避開較大的血管,定位并固定好探頭座。將動物從定位儀取下并使其仰臥位于手術(shù)臺上,進行 MCAO 手術(shù),當線插 入 ICA 后先不插入顱內(nèi),穩(wěn)定 LDF 讀數(shù)后,記錄 5min 內(nèi)血流值,以其平均值 作為腦血流的基礎(chǔ)值(baseline value。把線插入顱內(nèi),當血流值突然下降至基 礎(chǔ)值的 10%-20 % 時,提示中腦動脈血流已被阻斷。每組 MCAO 前的血流值為 本組的基礎(chǔ)值( 100),手術(shù)后血流值均以此基
6、礎(chǔ)值的百分率表示。4神經(jīng)行為學檢查Bederson '評分動物于給藥前及處死前進行神經(jīng)行為學觀察,參照 Zea Longa的方法,提鼠 尾離開地面約 1 尺,觀察兩前肢狀況;將大鼠置于水平地面,推動其雙肩,觀察 兩側(cè)抵抗力有無差異;大鼠置于地面,觀察其行走情況。采用四級評分法( 0-5 分),分數(shù)越高,說明其神經(jīng)行為損傷越嚴重。(1)行為完全正常者,記 0分;(2)提起鼠尾離開地面,手術(shù)對側(cè)前肢內(nèi)旋、內(nèi)收者,記 1分;(3) 大鼠至地面,用手擠壓兩側(cè)檢查其抗力,手術(shù)對側(cè)抗力下降者,記2分; ( 4)大鼠至地面,觀察其行走,圍繞手術(shù)對側(cè)轉(zhuǎn)圈者,記 3分;( 5)損傷極其嚴重,已無法自主活動者,記 4分。5腦梗死體積的測定:評分后大鼠斷頭處死,迅速將取出的腦組織置于 -20 °C冰箱,10mi n后置室 溫環(huán)境,將腦置于大鼠腦切片模具中, 切除嗅球、 小腦和低位腦干后按圖譜所示 間隔2mm冠狀切五刀,切成6個大腦連續(xù)冠狀粗切片。然后迅速將腦片置于 5ml 含2%TTC的溶液中,37C恒溫、避光孵育30min,期間每隔5min將腦片翻動一次。 經(jīng) TTC 染色后,正常組織呈玫瑰紅色,梗死組織未被染色而呈白色。將每組腦片 排列整齊, 拍照保
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 初中年級組長教學管理計劃
- 社交媒體分析軟件項目實施計劃
- 2025年海洋臺站儀器項目申請報告模板
- 2025年類毒素項目提案報告
- 初中科學教師培訓發(fā)展計劃
- 2025年血壓調(diào)節(jié)用品項目提案報告
- 2025初二下學期班主任課程改革計劃
- 金融行業(yè)從業(yè)人員職業(yè)道德與職責
- 七年級音樂教學資源開發(fā)與利用計劃
- 園藝行業(yè)苗木養(yǎng)護措施探討
- 國開2024年秋《心理健康教育》形考任務(wù)1-9答案
- 妊娠紋的治療
- 電力運維管理平臺方案設(shè)計
- 安全培訓管理體系
- 古詩教案模板范文
- 屠宰場安全培訓
- 光伏電站運維課件
- 廠區(qū)綠化環(huán)境提升方案
- 南京工業(yè)大學《化工廢水處理》2022-2023學年第一學期期末試卷
- 高三第二輪復習之文言翻譯(李麗君)省公開課獲獎?wù)n件市賽課比賽一等獎?wù)n件
- 教輔資料進校園審批制度
評論
0/150
提交評論