imagej熒光定量方法參考模板

1、1、 安裝后首先打開ImageJ：2、 打開要分析圖片：Fileopen（熱鍵為Ctrl+O）3、 轉(zhuǎn)換成8bit的灰度圖：ImageType8-bit4、 黑白反轉(zhuǎn)（因為對于光密度（OD）來說越白數(shù)值越小，純白為0；越黑數(shù)值越大，純黑理論上是無限大。因此我們需要將上一步所轉(zhuǎn)換的灰度圖進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn)，不然的話測出來的數(shù)值就會熒光越亮反而數(shù)值越小）：EditInvert（熱鍵為Ctrl+Shift+I）5、 校正光密度（軟件默認(rèn)為測量灰度，因此我們要改為更加適用的光密度，其中原理不是一兩句話能說得清的，這里忽略）：AnalyzeCalibrate在彈出來的界面的Function選擇Uncalibr

2、ated OD，并下界面左下方勾選Global calibration，然后點擊右下角的OK點擊OK后會跳出校正后的光密度曲線：如不勾選Global calibration，光密度的校正只對這張圖片有效，一般分析都要分析多張圖片，所以需要勾選，勾選后在打開另一圖片時會提示是否將此校正應(yīng)用于所有圖片，不勾選Disable Global Calibration，勾選Disable these Messages6、 選擇測量單位（一般選擇象素，如有明確的比例，也可以選擇相應(yīng)單位）：AnalyzeSet scale1 / 4點擊后在彈出的界面里點擊中間的click to Remove Scale，并勾

3、選下面的Global（同樣的，如不選Global這個測量單位的選擇只對這張圖片有效），最后點擊OK7、 選擇測量項目：AnalyzeSet Measurements在彈出界面中選擇我們需要測量的項目Area、Integrated density，并勾選下面的Limit to threshold（這個選項是指只測量我們選中的范圍，如不勾選側(cè)會測量整張圖片數(shù)據(jù)），選擇后點擊OK8、選擇測量域值：ImageAdjustThreshold（熱鍵為Ctrl+Shift+T）滑動彈出界面中間的滑塊選擇適合的域值，以使的你圖片中的細(xì)胞或待測目標(biāo)剛好全部被選中，選好之后點擊右下角的Set在彈出來的界面點擊OK9、 測量：AnalyzeMeasure（熱鍵為Ctrl+M或直接按M）10、 記錄數(shù)據(jù)并計算：結(jié)果中的Area為選擇范圍的面積，如果是測量的是細(xì)胞的話就是細(xì)胞在圖中的面積；IntDen就是所選范圍的IOD（光密度的總和）。結(jié)果界面中的數(shù)據(jù)可以復(fù)制到Excel等軟件中進(jìn)行計算。用IntDen的數(shù)值除以Area的數(shù)值得出來的就是這張圖片中細(xì)胞的平均光密度，以這張圖片的數(shù)據(jù)為例，即：18854/179252=0.105181532（/pixel）同法測量多張圖的平均光密度值后就可以進(jìn)行半定量比較。以下附上分別應(yīng)用Image-Pro Plus及Image