大容量注射液密封性驗(yàn)證

1、大容量注射液密封系統(tǒng)完好性驗(yàn)證方案1. 概述 本次容器密封系統(tǒng)的完好性試驗(yàn)采用灌裝大豆胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)基，經(jīng)壓塞、扎蓋、滅菌、微生物侵入試驗(yàn)，試驗(yàn)分為2組，A組為正常微生物侵入試驗(yàn)，B組為微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)，檢查產(chǎn)品無菌可靠性是否達(dá)到要求，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析研究。2. 試驗(yàn)流程3. 驗(yàn)證內(nèi)容3.1 目的證明灌裝培養(yǎng)基的容器經(jīng)壓塞、扎蓋、滅菌、微生物侵入試驗(yàn)后，保證無菌以確認(rèn)大容量注射液密封系統(tǒng)的完好性。3.2 試驗(yàn)樣品的制備3.2.1 在生產(chǎn)線上取足夠量的輸液瓶，灌裝大豆胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)基，使用自動(dòng)壓塞和壓蓋設(shè)備將容器密封。3.2.2 將灌裝好的容器經(jīng)115、20分鐘滅菌。3.2.3 從滅菌柜中

2、取出試樣，冷卻，將每一試樣倒轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與容器內(nèi)表面充分接觸，在3035下豎放培養(yǎng)14天。 小心擰松至少50個(gè)試樣的鋁蓋，注意不要破壞其密封口。將擰松鋁蓋時(shí)不慎損壞容器密封性的所有試樣剔除。按培養(yǎng)樣品。3.2.5 挑選至少10個(gè)封口處缺損的容器，按培養(yǎng)樣品。3.3 確定培養(yǎng)基促菌生長能力營養(yǎng)性試驗(yàn)3.3.1 所有試樣培養(yǎng)14天均不長菌時(shí)，隨即取20個(gè)帶蓋試樣，每個(gè)試樣內(nèi)接種1ml的銅綠假單胞菌ATCC9027，菌液濃度：10100CFU/1ml。3.3.2 3035下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣都呈陽性結(jié)果。3.3.3 若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣中，微生物生長良好，則容器內(nèi)培養(yǎng)基的促菌

3、生長能力可判為合格。3.3.4 使用革蘭染色和紫外燈下肉湯呈藍(lán)綠色熒光的性質(zhì)，來簽訂并確認(rèn)試樣容器內(nèi)生長的菌為接入的銅綠假單胞菌。3.4 挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備3.4.1 從銅綠假單胞菌ATCC9027的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)基，分別接入含10ml無菌培養(yǎng)基的試管中，在3035下培養(yǎng)1618h。3.4.2 將每管的培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)入含1000ml相同培養(yǎng)基（SCDM/2）的容器中，于3035下培養(yǎng)2224h。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。3.4.3 培養(yǎng)結(jié)束后的菌懸液即可用來作容器/密封系統(tǒng)完好性試驗(yàn)。3.5 微生物侵入試驗(yàn)操作步驟3.5.1 本試驗(yàn)須在生物安全柜或其他不影響生產(chǎn)環(huán)境的地

4、方進(jìn)行。3.5.2 將新鮮的銅綠假單胞菌ATCC9027的菌懸液倒入合適的盆中，用金屬絲架固定試樣容器，使試驗(yàn)樣品倒置在菌懸液中。3.5.3 將50個(gè)經(jīng)最長滅菌程序滅菌的試樣倒置，并侵入菌懸液中，該組試樣為A組。試樣容器內(nèi)的無菌培養(yǎng)基應(yīng)充分接觸封口內(nèi)表面，樣品的頸部及封口的外表面應(yīng)完全泡在菌懸液中，見圖：3.5.4 同時(shí)將25個(gè)擰松鋁蓋與10個(gè)容器封口缺損的試樣容器倒置入菌懸液中，該組試樣為B組。3.5.5 實(shí)驗(yàn)開始時(shí)取一份菌懸液，平均計(jì)數(shù)每毫升所含活菌數(shù)。按確認(rèn)試驗(yàn)用微生物是銅綠假單胞菌。3.5.6 將A組和B組試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡約4小時(shí)。3.5.7 浸泡結(jié)束時(shí)，再用平板計(jì)數(shù)菌懸液的

5、濃度。3.5.8 從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒容器外表面。3.5.9 取裝滿培養(yǎng)基未擰松鋁蓋與擰松鋁蓋的試樣各2個(gè)，作陽性對(duì)照。陽性對(duì)照用樣品制備方法同試樣，但不經(jīng)菌懸液浸泡，其外表面用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒。此后，接種入10100CFU銅綠假單胞菌ATCC9027，按步驟3.3進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗(yàn)。3.5.10 將消毒后的容器放在塑料袋中，置3035培養(yǎng)7天，操作中應(yīng)特別注意不要損壞B組無鋁蓋試樣膠塞的密封性。3.5.11 挑戰(zhàn)試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。3.5.12 將挑戰(zhàn)試驗(yàn)用的試樣培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內(nèi)培養(yǎng)基中

6、微生物的生長情況。3.5.13 對(duì)每一試樣進(jìn)行觀察檢查，有生長的記作十，無生長的記作一。3.5.14 如果試樣容器長菌，按3.3.4方法確認(rèn)生長菌是挑戰(zhàn)微生物銅綠假單胞菌。3.5.15 如果所有容器都不長菌，則從浸過菌懸液的A組取10個(gè)試樣，B組5個(gè)試樣，分別按3.3進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)檢查。3.5.16 試驗(yàn)注意事項(xiàng)3.5.16.1 步驟3.3、步驟3.5.9、步驟3.5.15中進(jìn)行的營養(yǎng)試驗(yàn)都合格，試樣的挑戰(zhàn)試驗(yàn)才有效。3.5.16.2 在挑戰(zhàn)試驗(yàn)開始時(shí)，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達(dá)到1106CFU/ml。3.5.16.3 挑戰(zhàn)試驗(yàn)中A組和B組如有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)。在A組中如出現(xiàn)長

7、菌試驗(yàn)，則需按下述需求進(jìn)一步調(diào)查。第一，仔細(xì)去除微生物生長的容器蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。第二，將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照或及其他適當(dāng)詳細(xì)記錄。3.5.16.4 如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，即判定容器/密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)作失敗。3.6 檢驗(yàn)方法與可接受標(biāo)準(zhǔn)3.6.1 培養(yǎng)基無菌檢查取樣方法：生產(chǎn)線上罐裝100ml SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉湯)培養(yǎng)基，經(jīng)過最長滅菌程序滅菌，從滅菌釜中取出試樣，冷卻，將每一試樣倒轉(zhuǎn)，在3035C下豎放培養(yǎng)14天。檢測方法：可接受標(biāo)準(zhǔn)：3.6.2 營養(yǎng)試驗(yàn)取樣方法：隨機(jī)抽取經(jīng)檢驗(yàn)過的20個(gè)帶蓋試

8、樣。檢測方法：每個(gè)試樣內(nèi)接種0.1ml銅綠假單胞菌ATCC9027，菌液濃度：10100CFU/0.1ml。在3035C 下培養(yǎng)7天，或者培養(yǎng)到所有試樣都呈陽性結(jié)果?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：若7天內(nèi)，所有接種的銅綠試樣，微生物都生長良好，則培養(yǎng)基的促進(jìn)生長能力判斷合格。3.6.3 菌種鑒別試驗(yàn)取樣方法：取接種銅綠的試樣，經(jīng)革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)鑒別待檢試樣存在銅綠假單胞菌。檢測方法：革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)可接受標(biāo)準(zhǔn)：鏡檢結(jié)果應(yīng)呈紅色，并觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)符合銅綠假單胞菌特征，證明是銅綠假單胞菌。3.6. 計(jì)算菌懸液濃度銅綠假單胞菌：【ATCC9024】 第5代 菌號(hào)：9024-4-5-2銅綠假單胞菌斜面培養(yǎng)物 少許 至10

9、ml營養(yǎng)肉湯35 24小時(shí)培養(yǎng)。銅綠假單胞菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1ml 9ml0.9%無菌NaCl溶液 至 10 -11含菌量 10100 cfu/ml 10倍系列稀釋大容量注射液密封系統(tǒng)完好性驗(yàn)證報(bào)告1. 概述 本次容器密封系統(tǒng)的完好性試驗(yàn)采用灌裝大豆胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)基，經(jīng)壓塞、扎蓋、滅菌、微生物侵入試驗(yàn)，試驗(yàn)分為2組，A組為正常微生物侵入試驗(yàn)，B組為微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)，檢查產(chǎn)品無菌可靠性是否達(dá)到要求，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析研究。2. 試驗(yàn)流程3. 驗(yàn)證過程3.1 目的證明灌裝培養(yǎng)基的容器經(jīng)壓塞、扎蓋、滅菌、微生物侵入試驗(yàn)后，保證無菌以確認(rèn)大容量注射液密封系統(tǒng)的完好性。3.2 驗(yàn)證樣品的制備3.2.1

10、驗(yàn)證樣品培養(yǎng)基輸液瓶規(guī)格膠塞廠家規(guī)格灌封數(shù)滅菌條件大豆胰蛋白胨肉湯100ml博生膠塞130115、30分鐘3.2.2 無菌檢查結(jié)果：培養(yǎng)基沒有出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，證明無菌落生長。3.3 確定培養(yǎng)基促菌生長能力營養(yǎng)性試驗(yàn)3.3.1 營養(yǎng)試驗(yàn)檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：編號(hào)有菌生長無菌生長編號(hào)有菌生長無菌生長1+/11+/2+/12+/3+/13+/4+/14+/5+/15+/6+/16+/7+/17+/8+/18+/9+/19+/10+/20+/結(jié)論：從上面統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，培養(yǎng)基的營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)合格，說明培養(yǎng)基有效，證明試驗(yàn)可以繼續(xù)。3.3.2 鑒別培養(yǎng)基生長的菌是否為銅綠假單胞菌，檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：編號(hào)是否銅綠假單胞菌編

11、號(hào)是否銅綠假單胞菌1是11是2是12是3是13是4是14是5是15是6是16是7是17是8是18是9是19是10是20是結(jié)論：符合規(guī)定3.4 挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備侵入前菌懸液濃度統(tǒng)計(jì)：取試驗(yàn)菌懸液1ml注入3個(gè)平皿，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。菌濃度：110-11CFU/ml含菌量10100cfu/ml。結(jié)論：菌懸液濃度符合規(guī)定，說明菌懸液可用。3.5 微生物侵入試驗(yàn)3.5.1 侵入后菌懸液濃度統(tǒng)計(jì)：取試驗(yàn)菌懸液1ml注入3個(gè)平皿，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)。菌濃度：1106CFU/ml；結(jié)論：從統(tǒng)計(jì)可以看出，侵入試驗(yàn)后菌懸液濃度符合濃菌液要求，說明侵入試驗(yàn)具有有效性。3.5.2 A組2只與B

12、組2只陽性對(duì)照營養(yǎng)試驗(yàn)檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：A組編號(hào)有菌生長無菌生長B組編號(hào)有菌生長無菌生長1+/3+/2+/4+/結(jié)論：2組營養(yǎng)試驗(yàn)均陽性，說明培養(yǎng)基符合規(guī)定。3.5.3 鑒別培養(yǎng)基生長的菌是否為銅綠假單胞菌，檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：編號(hào)是否銅綠假單胞菌編號(hào)是否銅綠假單胞菌1是3是2是4是結(jié)論：符合規(guī)定3.5.4 微生物侵入檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：編號(hào)有菌生長無菌生長編號(hào)有菌生長無菌生長1/-26/-2/-27/-3/-28/-4/-29/-5/-30/-6/-31/-7/-32/-8/-33/-9/-34/-10/-35/-11/-36/-12/-37/-13/-38/-14/-39/-15/-40/-16/-41/

13、-17/-42/-18/-43/-19/-44/-20/-45/-21/-46/-22/-47/-23/-48/-24/-49/-25/-50/-結(jié)論：從上面的統(tǒng)計(jì)可以看出侵入后樣品經(jīng)過培養(yǎng)7天以后，均無菌生長，說明大容量注射液密封系統(tǒng)在現(xiàn)有的工藝生產(chǎn)條件下符合規(guī)定。3.5.5 B組微生物侵入檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：編號(hào)有菌生長無菌生長編號(hào)有菌生長無菌生長1/-6/-2/-7/-3/-8+/4+/9/-5+/10/-結(jié)論：從上面的統(tǒng)計(jì)可以看出侵入后樣品經(jīng)過培養(yǎng)7天以后，有3瓶有菌生長， 分析其原因應(yīng)該是去鋁蓋過程中破壞容器的密封性所致。3.5.6 A組10只與B組5只營養(yǎng)試驗(yàn)檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)：A組編號(hào)有菌生長無菌生長B組編號(hào)有菌生長無菌生長1+/11+/2+/12+/3+/13+/4+/14+/5+/15+/6+/7+/8+/9+/10+/3.5.7