U3000高效液相色譜儀操作規(guī)程及封面

1、省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢驗研究院儀器設備操 作 規(guī) 程(eg 2016)設備編號()儀器名稱U3000液相色譜儀操作規(guī)程編制審核批準2016年 月 日U3000高效液相色譜儀操作規(guī)程一基本原理U3000高效液相色譜系統(tǒng)由：輸液泵自動 進樣器、色譜柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 組成。使用高效液相色譜時，液體待檢測物由流動相 帶入色譜柱，通過壓力在色譜柱中移動，由于試樣中 各組分在色譜柱固定相與流動相間分配或吸附特性 的差異，不同的物質(zhì)組分順序離開色譜柱，經(jīng)檢測器 檢測得到不同的色譜峰信號，依據(jù)組分的保留時間和 響應值（峰面積或峰高）進行定性和定量分析。二操作前準備1.1流動相的配制：1.1.1根據(jù)所

2、供試品的性質(zhì)、相關的文獻資料、工作經(jīng)驗 等按比例配制流動相。1.1.2根據(jù)流動相的性質(zhì)確定采用有機膜（0.45um）還是水相膜（0.45um）對流動相進行過濾。1.1.3將過濾后的流動相進行超聲脫氣1015分鐘。1.2對照品供試品處理：1.2.1稱取或量取適量的對照品或供試品，用適當?shù)娜軇ㄗ詈貌捎昧鲃酉嗷蛄鲃酉嗟闹鞒煞郑┻M行充分溶解（也 可借助超聲波進行超聲溶解），使其濃度為0.11mg/mL（根據(jù)檢測結(jié)果再適當調(diào)節(jié)溶液的濃度）。1.2.2根據(jù)對照品或供試品的性質(zhì)確定采用有機針頭濾 膜（0.45um）還是水相針頭濾膜（0.45um）進行過濾。1.3色譜柱的選擇：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇適當?shù)纳V柱

3、。三操作順序1.開機2.1打開UPS（不間斷電源）電源，打開儀器接線板電源 開關；2.2打開電腦顯示器電源，打開電腦主機電源（POWER）, 啟動電腦；2.3依次打開泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器的電源；2.4雙擊屏幕右下角“服務管理器”快捷圖標，出現(xiàn)對話界3 面后點擊“啟動儀器控制器”啟動，等顯示“本地儀器控制 器運行空閑”，可以關閉界面。2.5雙擊在桌面上的Chromeleon 7圖標（工作站主程序）。2.6在左下方點擊儀器，則在右邊會自動顯示該儀器控制面板。2.7旋開泵上的排液閥（兩圈以上）；設置A通道為100% 點擊“沖洗”，然后再出現(xiàn)的對話框中點擊“忽略并執(zhí)行”；（默認沖洗5分鐘）；

4、然后分別“沖洗”流路中其他通道氣 泡；排完氣泡后關閉排液閥；2.8設置流動相的比例及流速后，點擊“馬達”。此時泵自 動會以設置的流速進行運行。2.9在控制面板“柱溫箱”控制框中,設置準備分析樣品所 使用的柱溫箱溫度。3.0清洗進樣口；2.樣品分析3.1建立儀器方法：3.2建立處理方法及報告模板（此步驟可以省略，直接4 調(diào)用以前的）：3.3建立序列：3.4打開氘燈（待系統(tǒng)壓力穩(wěn)定后約15min后再開燈）： 在控制面板Detector”控制框中，選中“紫外燈”選框，及“可見燈”選框（如果波長在可見圍）。3.5在控制面板“ UV”控制框中，設置波長，采集頻率 （20HZ）;點擊“監(jiān)視基線”，選道1并

5、確定。3.6待基線穩(wěn)定后，點擊“監(jiān)視基線”，點擊確定，關閉查看基線。3.7點擊左下方“數(shù)據(jù)”，并選中要分析的序列，然后點擊“開始”啟動樣品表進行分析（如果序列里有完成的樣品， 則會變成繼續(xù)，點繼續(xù)；如果該序列還在隊列中則會顯 示刪除，點擊刪除后在點擊繼續(xù)）；3.8在審計跟蹤里出現(xiàn)“等待pump-inputl 上的進樣響 應”，此時迅速將手動進樣器扳到load位置，緩慢注入 樣品適量（注意不能有氣泡），然后迅速將手動進樣器扳 到 inject 位置；3.9樣品全部檢測結(jié)束后，如果不再分析樣品應立即關5 掉氘燈，延長氘燈使用的壽命.5、關機：5.1沖洗色譜柱（如果使用了緩沖鹽，首先使用10%甲醇

6、水溶液沖洗色譜柱30分鐘，然后使用純甲醇沖洗色譜 柱30分鐘）。5.2關閉泵馬達，斷開連接，關閉工作站。5.4關閉檢測器、柱溫箱、自動進樣器、泵的電源。5.5關閉計算機。關閉UPS電源或穩(wěn)壓電源。四注意事項6.1溶劑泵的使用注意事項：使用時要留心防止溶劑瓶的流動相被用完，否則空泵運 轉(zhuǎn)會磨損柱塞、缸體和密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏夜。防止任何固體微粒進入泵體，因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì) 微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應預 先除去流動相中的任何固體顆粒。流動相過濾，可采用 濾膜（0.2um或0.45um）等濾過。輸液泵的工作壓力不能超過規(guī)定的最高壓力，否則會使 高壓密圭寸環(huán)變形，產(chǎn)生漏夜。6 流

7、動相應該先脫氣，以免在泵產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn) 定性，如果有大量的氣泡，泵就無常工作。溶劑泵長期不用時，用甲醇以1.0ml/min沖洗各個通道。泵的清洗液要勤換。每次開啟泵之前要排除管道中是氣泡。流動相由無機鹽溶液轉(zhuǎn)換有機溶劑前要用90%去離子水清洗管路。轉(zhuǎn)換不同流動相時注意兩者是否容易混合或者發(fā)生反應。長期不用或運輸前要到空清洗液瓶。6.2色譜柱的使用注意事項：免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然 變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱的填充狀況； 柱壓的突然升高或降低也會沖動柱填料，因此在調(diào)節(jié)流 速時應該緩慢進行，進樣閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)廠家指明該柱

8、可以 反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會7 迅速降低柱效。選擇使用適宜的流動相（尤其是 pH）,以避免固定相被 破壞。有時可以在進樣器前連接一預柱，分析柱是鍵合 硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析之前被硅 膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被破壞。避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱，需 要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一 保護柱。保護柱一般是有相似固定相的短柱，也有用浸 透限制固定相短柱。保護柱可以經(jīng)常更換。保存色譜柱時應將柱充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊， 防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖液留在柱靜置過夜 或更長時間。6.3檢測器的使用注意事項：長時間檢測池中無流動相流動時，關閉檢測器氘燈。不要將物品或其他儀器檔住檢測器的散熱孔。檢測器安裝的位置應沒有震動，溫度變化不大，避免直 射。在關燈命令發(fā)出后，再次開