高效液相色譜實驗報告

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上高效液相色譜實驗報告一 、實驗目的1了解液相色譜的發(fā)展歷史及最新進展2 學習液相色譜的基本構造及原理3 掌握液相色譜的操作方法和分析方法，能夠通過HPLC分離測定來對目標化合物的分析鑒定。二 、實驗原理液相色譜法采用液體作為流動相，利用物質在兩相中的吸附或分配系數(shù)的微小差異達到分離的目的。當兩相做相對移動時，被測物質在兩相之間進行反復多次的質量交換，使溶質間微小的性質差異產(chǎn)生放大的效果，達到分離分析和測定的目的。液相色譜與氣相色譜相比，最大的優(yōu)點是可以分離不可揮發(fā)而具有一定溶解性的物質或受熱后不穩(wěn)定的物質，這類物質在已知化合物中占有相當大的比例，這也確定了液相色譜在應

2、用領域中的地位。高效液相色譜可分析低分子量、低沸點的有機化合物，更多適用于分析中、高分子量、高沸點及熱穩(wěn)定性差的有機化合物。80%的有機化合物都可以用高效液相色譜分析，目前以已經(jīng)廣泛應用于生物工程、制藥工程、食品工業(yè)、環(huán)境檢測、石油化工等行業(yè)。三 、高效液相色譜的分類吸附色譜法、分配色譜法、空間排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學鍵合相色譜法四 、高效液相色譜儀的基本構造高效液相色譜至少包括輸液系統(tǒng)、進樣器、分離柱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分。1 輸液系統(tǒng)：包括貯液及脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置。貯液裝置用于存貯足夠量、符合HPLC要求的流動相。高效液相色譜柱填料顆粒比較小，通

3、過柱子的流動相受到的流動阻力很大，因此需要高壓泵輸送流動相。2 進樣系統(tǒng)：將待測的樣品引入到色譜柱的裝置。液相色譜進樣裝置需要滿足重復性好、死體積小、保證柱中心進樣、進樣時引起的流量波動小、便于實現(xiàn)自動化等多項要求。進樣系統(tǒng)包括取樣、進樣兩項功能。3 分離柱：色譜柱是色譜儀的心臟、柱效高、選擇性好、分析速度快是對色譜柱的一般要求。商品化的HPLC微粒填料，如硅膠和以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）等的粒度通常在3m、5m、7m、以及10m。采用的固定相粒度甚至可以達到1m，而制備色譜所采用的固定相粒度通常大于10m。HPLC填充柱效的理論值可以達到50000/m/

4、m理論板，一般采用100-300mm的柱長可滿足大多數(shù)樣品的分析的需要。由于柱效內、外多種因素的影響，因此為使色譜柱達到其應有的效率。應盡量的減小系統(tǒng)的死體積。4 檢測系統(tǒng)：HPLC檢測器分為通用型檢測器和專用型檢測器兩類。通用型檢測器可連續(xù)測量色譜柱流出物（包括流動相和樣品組分）的全部特性變化。這類檢測儀器包括示差折光檢測器、介電常數(shù)檢測器、電導檢測器和磁光旋轉檢測器。這類檢測器適用范圍廣，但是對于流動相有響應，受溫度變化、流動相流速和組成變化的影響，檢測靈敏度低，不能用于梯度洗脫的分離模式。專用型檢測器對樣品中組分的某種物理或化學性質敏感，可用于測量被分離組分某類特性的變化。這類檢測器包括

5、紫外檢測器、熒光檢測器、質譜檢測器、放射性檢測器。5 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)可以分為數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和專用智能處理系統(tǒng)兩類，前者可以完成一般的色譜數(shù)據(jù)處理任務，有些軟件可以實現(xiàn)部分儀器的控制功能。前者即一般的色譜工作站，后者通常稱之為專家系統(tǒng)。五 、實驗數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)一：11HPLC-RSample Name:1HPLC-RInjection Volume:5.0 Vial Number:RB1Channel:UV_VIS_1Sample Type:unknownWavelength:358Control Program:甲醛衍生Bandwidth:n.a.Quantif. Method:metho

6、d fileDilution Factor:1.0000 Recording Time:3:27 PMSample Weight:1.0000 Run Time (min):8.00Sample Amount:1.0000 No. Ret.Time Peak Name Area Rel.Area Amount Type minmAU*min%1 2.14 n.a.0.582 10.41 n.a.BM 2 2.62 n.a.0.142 2.55 n.a. MB3 3.33 n.a.2.059 36.82 n.a.BMB4 3.71 n.a.0.326 5.83 n.a.BMB5 5.95 n.a

7、.2.482 44.39 n.a.BMBTotal:5.590 100.00 0.000 數(shù)據(jù)二：11Sample Name:1Injection Volume:5.0 Vial Number:RB1Channel:UV_VIS_1Sample Type:unknownWavelength:358.0Control Program:甲醛Bandwidth:1Quantif. Method:method fileDilution Factor:1.0000 Recording Time:4:31 PMSample Weight:1.0000 Run Time (min):11.63Sample

8、Amount:1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type minmAUmAU*min%1 1.17 n.a.1.382 0.158 2.63 n.a.BMB2 1.83 n.a.1.218 0.210 3.51 n.a.BMB3 2.79 n.a.6.344 0.578 9.65 n.a.BMB4 3.28 n.a.1.335 0.145 2.43 n.a.BMB5 4.04 n.a.16.810 1.909 31.88 n.a.BMB6 4.34 n.a.2.883 0.333 5.57 n.a.Rd7 6.4

9、1 n.a.16.212 2.654 44.33 n.a.BMBTotal:46.184 5.988 100.00 0.000 六 、高效液相色譜的使用中的注意事項流動相：1 、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍； 2、 水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質； 樣品：1、 采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒； 2、 用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量用流動相制備樣品液； 手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的35倍；色譜柱： 1、 使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等； 2、 使用符合要求的