Biorad凝膠成像軟件

1、 GEL EQ凝膠成像使用指南1. 打開主機電源與計算機電源.2. 點擊凝膠成像軟件,進入QUANTITY ONE操作界面.3. 在FILE菜單中,選擇GEL EQ菜單,進入圖像采集界面4. 點擊LIVE/FOCUS菜單,采集圖像.(根據(jù)被掃膠的要求, 在凝膠成像主機面板上選擇UV/WHITE紫外光/白光).(如需使用透射白光,則把白光臺電源打開,把白光臺放在底板上,把膠放在白光臺上.)5. 調(diào)節(jié)光圈大小,點擊IRIS下OPEN/CLOSE;調(diào)節(jié)聚焦,點擊FOCUSE下NEAR/FAR按鈕;調(diào)節(jié)遠(yuǎn)近即大小,點擊ZOOM下相應(yīng)按鈕,直到滿意為止.6. 爆光時間一般選擇自動AUTO EXPOSE即

2、可.7. 若圖像上有高亮紅點,說明爆光過度,則須縮小光圈.8. 圖像調(diào)好后,點擊SAVE鍵保存.若需保存為其他格式,則在FILE菜單下選擇導(dǎo)出,保存為JPEG/TIFF格式文件.9. 關(guān)于分析處理見Quantity One應(yīng)用講義Quantity One應(yīng)用講義本講義介紹Quantity One的兩個重要分析功能：定量分析和分子量確定。Quantity One軟件HelpàQuick Guide快捷指南提示如何實現(xiàn)一個功能，如定量分析(Volumes Quick Guide)，電泳條帶分析(Band Analysis)，差顯分析(Differential Display Analys

3、is)，克隆計數(shù)(Colony Counting Analysis)等。快捷指南下有1，2，3步驟，根據(jù)提示完成。一 定量分析功能快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能對任意所選區(qū)域進行定量分析,此分析可以報告2個結(jié)果：相對濃度和絕對濃度（如有濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品）1 選擇成像系統(tǒng)或打開已保存的文件(軟件可以控制Bio-Rad所有的成像系統(tǒng)如GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX,如不是Bio-Rad成像系統(tǒng)所攝取的圖象，將圖象保存為Tiff文件格式，軟件也可進行分析處理)2 Zoom Box，縮放，對圖象進行放大觀察3 Transform轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)圖象

4、的對比度黑白4 Volume Rect Tool 矩形區(qū)域選擇，如U15 Volume Free hand Tool自由畫筆選擇區(qū)域，可以勾勒出無規(guī)則形狀,如U26 Volumn Contour Tool等高線勾勒區(qū)域，自動連接濃度濃度相同的點，如U3上面3種方法選擇需要定量的區(qū)域。雙擊所選區(qū)域，出現(xiàn)如下窗口，定義樣品類型，如未知樣品Unkonwn(U1,U2即待計算樣品)，背景Background(B1,B2，軟件在算濃度時會將此區(qū)域的濃度自動扣除) 或標(biāo)準(zhǔn)樣品Standard（Std1,Std2, 如果該樣品是濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品，即定量標(biāo)準(zhǔn)，需在濃度concentration一欄輸入該樣品的濃度

5、）。7 Select Tool選擇不同區(qū)域8 Print Image打印圖像9 Volume Analysis Report 定量報告結(jié)果，打開出現(xiàn)如下窗口，選擇要報告的參數(shù)，主要有2個參數(shù)Volume和Concentration。Volume為相對濃度，如有濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品（Std），軟件可報告Concentration絕對濃度。 二條帶分析功能Band Analysis介紹用此功能對泳道內(nèi)的所有條帶進行分子量確定，相對濃度分析1，2，3同上4，5，6確定泳道lane,并可對泳道進行各種調(diào)整（實際實驗中泳道往往不是垂直的而出現(xiàn)各種變形。在軟件的工具欄中有一Lane Tool圖標(biāo)，包含有更多泳道編

6、輯工具。Band Tool條帶編輯工具包Lane Tool泳道編輯工具包7Lane Background去除泳道背景，建議不做8Detect Band，檢測泳道內(nèi)的條帶，打開出現(xiàn)如下窗口，一般可通過調(diào)節(jié)sensitivity靈敏度來調(diào)節(jié)檢測出的條帶，或通過人工編輯來增加/減少條帶。打開工具欄中Band Tool條帶編輯工具包可看到更多編輯工具（如上圖）10. Standard輸入分子量標(biāo)準(zhǔn)，軟件自帶有許多Bio-Rad的分子量標(biāo)準(zhǔn)，如你用的是自己的標(biāo)準(zhǔn)，進入New Standard建立新的分子量標(biāo)準(zhǔn)，軟件可以選擇標(biāo)準(zhǔn)單位是MW（蛋白質(zhì)）還是BP（核酸）等（左下圖）。在Protein-Stand

7、ard對話框中輸入分子量數(shù)值，完成后單擊賦值圖標(biāo)（右下圖），回到圖象文件上單擊標(biāo)準(zhǔn)樣品的泳道，軟件自動將所輸?shù)姆肿恿繑?shù)值和泳道內(nèi)的條帶一一對應(yīng)。賦值圖標(biāo)：告訴軟件哪條是分子量標(biāo)準(zhǔn)樣品的泳道輸入分子量數(shù)值10. Band Attribute條帶屬性，在完成第9步以后，軟件已自動計算出了其他未知條帶的分子量,打開band attribute選擇要報告的參數(shù)，這里我們選擇Molecular Weight，圖象上可以看到所有條帶的分子量（紅顏色標(biāo)記），標(biāo)準(zhǔn)分子量為藍(lán)色標(biāo)記。11. Match，跳過不做12. Print Image打印圖象13. All Lane Report所有泳道條帶結(jié)果報告。打開窗口，選擇要