蛋白 相關(guān)試劑

1、4牛血清蛋白(BSA）（10mg/ml）組份濃度 10mg/ml牛血清蛋白配制量 10ml配制方法 1.稱量下列試劑。牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DNA酶）100mg 2.向15ml試管中加入9.5ml的去離子水。 3.把稱好的試劑裝入含9.5ml的去離子水的試管中，（為削減變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白）蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止，不要渦旋混合。 4.加去離子水將溶液定容至10ml后，然后分裝成小份貯存于-20。5二硫蘇糖醇（DTT）（1mol/L）組份濃度 1mol/L二硫蘇糖醇配制量 32.4ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于100 ml燒杯

2、中二硫蘇糖醇5g 2.向100 ml燒杯中加入32.4ml水或0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2），充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 分成小份貯存于-20。留意事項(xiàng)：DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。6苯甲基磺酰氟（PMSF）（100mmol/L）組份濃度 100mmol/L PMSF配制量 10ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于15ml試管中苯甲基磺酰氟174mg 2.向15ml試管中加入9.5ml異丙醇，充分?jǐn)嚢枞芙?，定容?0ml。 3. 分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。留意事項(xiàng)：PMSF嚴(yán)峻損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過(guò)皮膚吸取后有致命危急。一旦眼睛或皮

3、膚接觸了PMSF，應(yīng)馬上用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性丟失速率隨pH值的上升而加快，且25的失活速率高于4。pH值為8.0時(shí)，20mmol/L PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)整 為堿性（pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可平安地予以丟棄。7蛋白酶K（proteinase K）（20mg/ml）組份濃度 20mg/ml蛋白酶K配制量 10ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于15ml試管中蛋白酶K200mg 2.向15ml試管中加入9.5ml水，輕

4、輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml。 3. 分成小份貯存于-20。8過(guò)硫酸銨溶液（10%）組份濃度 10%過(guò)硫酸銨溶液配制量 10ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于15ml試管中過(guò)硫酸銨1g 2. .向15ml試管中加入9.5ml水，充分?jǐn)嚢枞芙?，定容?0ml。 3. 可在4保存數(shù)周。9-巰基乙醇（BME）溶液組份濃度 14.4mol/L-巰基乙醇配制方法 一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4。留意事項(xiàng)：BME或含有BME的溶液不能高壓處理。10十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液（10%）組份濃度 10%十二烷基硫酸鈉配制量 1L配制方法 1.稱

5、量下列試劑，置于l L燒杯中。十二烷基硫酸鈉100g 2.向燒杯中加入約900 ml的去離子水，加熱至68助溶。 3.加去離子水將溶液定容至l L后，分裝備用。留意事項(xiàng)：SDS的微細(xì)晶粒易集中，因此稱量時(shí)要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10% SDS溶液無(wú)須滅菌。11丙烯酰胺溶液（30%）組份濃度 30%丙烯酰胺配制量 100ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于100ml燒杯中。丙烯酰胺29gN，N-亞甲雙丙烯酰胺1g 2.向燒杯中加入約60 ml的去離子水，加熱至37溶解。 3.加去離子水將溶液定容至100m后，用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過(guò)濾除菌，查證

6、該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。 留意事項(xiàng)：丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸取，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，由于它還可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1 Mallinckrodt），攪拌過(guò)夜，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。12丙烯酰胺溶液（40%）組份濃度 40%丙烯酰胺配制量 100ml配制方法 1.稱量下列試劑

7、，置于100ml燒杯中。丙烯酰胺38gN，N-亞甲雙丙烯酰胺2g 2.向燒杯中加入約60 ml的去離子水，加熱至37溶解。 3.加去離子水將溶液定容至100m后，用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。 留意事項(xiàng)：丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸取，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，由于它還可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1 Mallinckrodt

8、），攪拌過(guò)夜，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測(cè)定.13 Tris溶液(1mol/L，pH7.4)組份濃度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris堿121.91g 2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 加水定容至1L，加入濃HCl約70ml調(diào)整 pH值至所需值。溶液應(yīng)冷卻至室溫后方可最終調(diào)定pH值。 4.分裝后高壓滅菌。留意事項(xiàng)：如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。Tris溶液的pH值因溫度而

9、異，溫度每上升1，pH值大約降低0.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.6。14 Tris溶液(1mol/L，pH7.6)組份濃度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris堿121.91g 2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 加水定容至1L，加入濃HCl約60ml調(diào)整 pH值至所需值。溶液應(yīng)冷卻至室溫后方可最終調(diào)定pH值。 4.分裝后高壓滅菌。留意事項(xiàng)：如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每上升1，pH

10、值大約降低0.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.6。151mol/L Tris溶液(1mol/L，pH8.0)組份濃度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris堿121.91g 2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 加水定容至1L，加入濃HCl約42ml調(diào)整 pH值至所需值。溶液應(yīng)冷卻至室溫后方可最終調(diào)定pH值。 4.分裝后高壓滅菌。留意事項(xiàng)：如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每上升1，pH值大約降低

11、0.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.6。16電泳液(Western雜交用) 組份濃度 250 mM Glycine，25 mM Tris，0.1%(W/V)SDS配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Glycine18.8 gTris3.02 gSDS1 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定容至1L后。 4.室溫保存。17膜轉(zhuǎn)移緩沖液(Western雜交用) 組份濃度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V

12、)甲醇配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Glycine2.9 gTris5.8 gSDS0.37 g 2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。 4.室溫保存。18TBST Buffer(Western雜交膜清洗液) 組份濃度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl8.8 g1 M Tris-HCl(pH8.0)20 ml 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加入0.5 ml Tw