醫(yī)用生物蛋白膠項目簡介.doc

1、醫(yī)用生物蛋白膠項目簡介 山西志成生物技術有限公司 聯(lián)系：楊先生一、項目背景醫(yī)用生物蛋白膠（BFG），又稱纖維蛋白封閉劑、纖維蛋白粘合劑（Fibrin Adhesive）。是一種新型安全、可靠的生物止血材料，廣泛運用于各種外科手術，有效起到止血、促愈合、防止粘連等作用，20世紀40年代，以纖維蛋白原粉為原料，進行了組織粘合的早期實驗。70年代，隨著分離、提純技術的完善，纖維蛋白膠初步在臨床進行了實驗性試用。直至80年代，由奧地利Immuno公司將其商品化，在歐洲市場迅速推廣。在亞洲，生物纖維蛋白膠也得到醫(yī)學界人士的青睞，日本多家公司生產了此項產品。我國于80年代初由上海

2、學者研制出由人血提取的醫(yī)用纖維蛋白粘合劑并進行臨床應用，由于人血來源受限，形成商品化有困難。1994年，我國學者以哺乳動物血液作為原料，研制出新一代生物止血材料纖維蛋白膠。原料來源豐富，經(jīng)過處理既降低了成本，排除了人體血源性疾病的感染機會，先后有廣州倍繡、上海利康瑞、上海松力生物技術有限公司等國內動物血FS以醫(yī)療器械形式上市；經(jīng)國內醫(yī)學界試用取得良好的效果，為生物止血材料的推廣應用提供了條件。本產品由主體膠、主體膠溶解液和催化劑、催化劑溶解液組成。 主膠體纖維蛋白原和凝血酶是從哺乳動物血中提純，豬血深加工綜合利用項目的一個生物高科技產品。二、技術研究1、豬血采集和檢測  &

3、#160;   豬血采集應在國家定點的規(guī)?；涝讏觯⒎现腥A人民共和國國務院令第525號生豬屠宰管理條例的有關要求。為控制采血過程中的污染和保證血液質量，對采血環(huán)境應有一定的潔凈度要求，同時應采用封閉方式采集于無菌容器中。應固定采集量（即每一容器收集多少頭豬的血液）及采集時間（即每一容器的收集時間）。對于已采血的每批生豬，應出據(jù)屠宰場的宰后檢疫證明；如檢疫不合格需對相應批號產品進行處理（提出具體處理措施）。應對采集的混合后血液/血漿進行蛋白量、微生物指標等檢測，并建議做有代表性的人畜共患病原的檢測（如乙型腦炎病毒、戊型肝炎病毒、豬鏈球菌等）。2、主膠的制備豬血漿的預處理：

4、新鮮豬血漿于 - 20冷凍1周以上,自然解凍,綢布過濾去除絮狀物,得濾液,備用。纖維蛋白原的分離: 采用凍融法從豬血中提取纖維蛋白原。確定提取條件為:將抗凝血漿在-20溫度下冷凍12h,經(jīng)4解凍,低溫離心收集纖維蛋白原樣品。,然后加 0.3%TNBP 和 1%Tween-80,24 26 6h 保溫滅活病毒 , 樣品中纖維蛋白原含量達82.6%,提取率達91.0%,再經(jīng)分離去除殘余的 TNBP及 Tween-80 而得到純化并經(jīng)病毒滅活的纖原 ,加適量保護劑澄清和除菌過濾 ,分裝冰凍干燥，干熱滅活。 凝血酶的分離: a.取冷凍血漿加入血漿體積 8%,12%和 16%的1 mol/L BaCl2

5、溶液,均攪拌20min,壓濾,取濾餅分別用pH7.4,0.02mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌2次,再分別用pH7.4,0.02 mol/L Tris-HCI400 mL解吸附,3 000 r/min離心20 min,取上清;向上清液中加入固體硫酸銨至 35%飽和度,靜置2 h后3 000 r/min離心20 min,上清液中再加入固體硫酸銨至65%飽和度,靜置4 h,3 000 r/min離心20 min,沉淀用生理鹽水(10 mg/mL)溶解后流水透析過夜。用堿性碘化汞鉀試液檢測透析內液,待銨離子為陰性后終止透析,收集得凝血酶原溶液。b. 凝血酶原的激活 加入 CaCl2至終濃度,于

6、37激活1 h,測定凝血酶活性。c.凝血酶粗酶液的制備 按最佳激活條件(Ca2+0.05 mol/L,37,30 min) ,分別將上述制備的溶液激活,用相對分子質量截留量10 000的超濾器超濾。待超濾液中加入0.1 mol/L AgNO3溶液不出現(xiàn)絮狀沉淀時停止超濾,收集濃縮液,測定蛋白質濃度、酶活性,計算產量。 d.凝血酶分離與純化將c項由冷凍血漿制備的凝血酶粗酶液上樣到用pH5.5,0.01 mol/L醋酸銨緩沖液平衡好的CM-Sepharose Fast Flow離子交換柱,用同樣緩沖液洗脫23柱體積后,用含00.6 mol/L NaCl 的上述緩沖液進行直線梯度洗脫,收集凝血活性組

7、份即為凝血酶精品,測定蛋白質含量和活性。生產過程采用兩步病毒滅活，安全可靠，經(jīng)澄清和除菌過濾分裝凍干制成。3、檢測 因子活性測定:用含 0.1%牛纖原和 0.4%的白蛋白的 NaCl2檸檬酸鹽緩沖液稀釋樣品 ,然后用高活性的凝血酶和高嶺土懸液使溶液凝固 ,加入 5%單氯乙酸溶液來測定凝塊的穩(wěn)定性 ,用標準血漿代替樣品 ,以后一個出現(xiàn)不溶凝塊的稀釋倍數(shù)為準 ,并定為 100%(U/ml) 。纖原與凝血酶成膠速度測定取等量溶解后的凍干人纖原和凝血酶溶液 ,在 37 充分混勻 ,記錄其凝固時間 ,應在 10s內凝結。FS抗張強度測定:取溶解后的凍干人纖原和凝血酶溶液各100 l,均勻混合后噴在被剪去

8、皮膚的小白鼠背部 ,并迅速粘合皮膚 ,分別測定40 和 120min的拉力。FS彈力測定:取重溶后凍干人纖原和凝血酶溶液于玻璃上 ,涂成1cm2正方形膠塊 ,待 10min用小鑷子夾住凝膠塊中部輕輕上提 ,測定其最大被拉伸的高度(mm) 。其他質量標準參照«中華人民共和國藥典»人源纖維蛋白膠質量標準本產品經(jīng)過滅菌消毒，凍干制成，不含致熱源。主體膠主要含纖維蛋白原、XIII因子，其溶解液為磷酸鹽緩沖液；催化劑主要含凝血酶，其溶解液為氯化鈣溶液。4主要設備自動平衡離心機、不銹鋼料桶、不銹鋼反應罐、洗瓶分裝機、制水設備、真空干燥設備等。三、臨床應用醫(yī)用生物蛋白膠是模擬人體自身凝血

9、反應最后階段而起作用的一種現(xiàn)代生物工程產品，當各成分混合后，凝血酶將纖維蛋白原水解成纖維蛋白單體，并在 XIII因子、Ca2 的作用下聚集形成穩(wěn)定的纖維蛋白多聚體。從而在外科手術中產生生物止血、封閉組織創(chuàng)面的作用，纖維蛋白網(wǎng)提供基質和間皮趨化活性物質，纖維母細胞長入，新生的毛細血管形成，肉芽組織生成，促進創(chuàng)傷愈合。 主要功能 ：1.封閉： 封閉組織創(chuàng)面，減少滲出，減少術后引流量，縮短引流時間。2.生物止血： 手術野彌漫性滲血和靜脈性出血的輔助止血，尤其當常規(guī)方法（如縫合、結扎或電凝）無效或無法實施時。3.粘合作用： 充填粘合實質性臟器裂口，粘合管腔及神經(jīng)的顯微吻合口。4.促進創(chuàng)傷組織愈合：維蛋

10、白網(wǎng)提供基質和間皮趨化活性物質，纖維母細胞長入，新生的毛細血管形成，肉芽組織生成，促進創(chuàng)傷愈合。5.防止組織粘連： 封閉隔離膜性組織創(chuàng)面，減少滲出和炎性反應，促進膜的再生與修復，防止膜性粘連。6.緩釋劑： 與抗腫瘤藥、抗生素等合用，可在局部緩慢釋放，維持局部藥物有效濃度，延長藥物作用時間。 應用范圍 ：醫(yī)用生物膠在普外科、婦科、心腦外科、神經(jīng)外科、骨科、整形外科等領域都有應用，常規(guī)手術、各種腔鏡手術以及內窺鏡治療。 安全性：醫(yī)用生物蛋白膠是從經(jīng)嚴格檢疫的哺乳動物的血液中提取制成的，具有良好的組織相容性和完全的降解吸收性，可避免傳播HIV、肝炎等人類血源性疾病的危險，常規(guī)局部使用，所以產品安全性

11、強。醫(yī)用生物膠在止血方面與化學膠相比具有六大優(yōu)勢：產品綠色環(huán)保；良好的生物相溶性；不受人體正常凝血機制的影響；溶解快捷起效迅速；產品質量安全可靠；完全徹底勻速降解。纖維蛋白膠臨床應用以來，由于這種材料既有止血作用，又促進了傷口愈合，是一種新型止血劑，得到了越來越多的臨床醫(yī)師的重視和使用。據(jù)了解，目前，國內外已有數(shù)百萬例病人受益于纖維蛋白膠。醫(yī)用生物蛋白膠具有卓越的快速止血、封閉創(chuàng)面、促進創(chuàng)傷愈合、防止術后膜性粘連、減小疤痕形成等功效。四、項目前景本項目建設一個擁有1000m2符合GMP標準的生產車間，預計建成后的生產規(guī)模為每年生產50萬套產品。 是豬血深加工綜合利用項目的一個產品，該產品為生物工程產品，利用現(xiàn)代生物工程技術，從豬血漿中提取具有止血、促進愈合、防止粘連等功能的相應蛋白質成份，經(jīng)冷凍干燥后制成。如果可以廣泛的應用，可減少中國250萬人次獻血；據(jù)初步統(tǒng)計，我國有縣級以上醫(yī)院2萬多家，平均年手術量在4000萬臺左右，如果按總手術量的5%使用醫(yī)用生物膠量計算，年需求量大約在200萬套（生物膠由其主體部分和相關附件組成），市場銷售額達8億元，但目前市場銷售量僅為20萬套左右。所以