不同方法檢測新型冠狀病毒血清抗體與凝血功能的結(jié)果探討.docx

1、.論著.不同方法檢測新型冠狀病毒血清抗體與凝血功能的結(jié)果探討于超，楊少明，王術(shù)，張家軍rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500于超，楊少明，王術(shù)，張家軍rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500通訊作者(營口市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，營口,115000)摘要：目的通過對新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)免疫球蛋白IgM和IgG的檢測，對比核酸檢測的確診結(jié)果，并檢測

2、其部分凝血功能。方法收集了2020年4月13口至2020年4月16口營口地區(qū)接收的515例調(diào)查對象的檢測血樣，對標(biāo)本以膠體金免疫層析法及磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法進行(SARS-CoV-2)血清抗體IgM和IgG進行檢測，得出結(jié)果，結(jié)合核酸檢測結(jié)果，對比兩種方法的特異度，評估其應(yīng)用于大規(guī)模人群篩檢的可行性。并檢測其部分凝血功能。結(jié)果515例調(diào)查對象核酸檢測結(jié)果均為陰性，抗體檢測結(jié)果分別為膠體金免疫層析法：IgG特異度9961%(2515),IgM特異度99.03%(5515),雙陽性特異度9981%(1515);磁微粒化學(xué)發(fā)光法：IgG特異度95.34%(24515),IgM特異度99.22%(4515

3、),雙陽性特異度100%(0515).磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測【gG陽性的24例標(biāo)本中，結(jié)果sco比值分布于1.0011.500的標(biāo)本12例(50%),分布于1.5012.000的標(biāo)本5例(20.83%),介于20014.000的標(biāo)本4例(16.67%),大于4.001的標(biāo)本3例(125%);IgM結(jié)果陽性的4例標(biāo)本中，sco比值分布于1.001L500的標(biāo)本0例(0%),介于1.5012.000的標(biāo)本1例(25%),大于2001的標(biāo)本3例(75%).顯示凝血功能活化，結(jié)論1,單一方法血清抗體檢測受試劑質(zhì)量及其他亞種冠狀病毒抗體的影響，導(dǎo)致假陽性率較高，不適用于人群初篩，2,磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測I

4、gG抗體假陽性率較高，可以通過調(diào)整其判讀標(biāo)準(zhǔn)可能降低假陽性率，3.血消抗體檢測具有操作方便，節(jié)約成本的優(yōu)點，采用不同方法聯(lián)合檢測血清抗體，進行大規(guī)模的人群篩檢是提高效率的重要方法之一。凝血功能活化可作為治療、預(yù)后的參考。關(guān)鍵詞：新型冠狀病毒，新型冠狀病毒肺炎，化學(xué)發(fā)光法，膠體金免疫層析發(fā)，免疫球蛋白。中圖分類號R446.1文獻標(biāo)志碼A文章編號1009-6213(2020)06-0903-04StudyontheResultsofDifferentMethodsfortheDetectionofSars-Cov-2SerumAntibodyYUChao,YANGShao-ming,WANGShu

5、,ZHANGJia-jun*(DepartmentofRespiratoryMedicine,TheCentralHospitalofYingkou,Yingkou,115000,China)Abstract:ObjectiveTodetectnovelcoronavirus(SARS-CoV-2)immunoglobulinIgMandIgG,pa)nntherestsirif'nucleididrficction,explorethecharacter!stiesofdifferentdetectionmethods,anditwpthefeasiilibytandcostfola

6、rge-scalescreeningbydifferentmethods.Methods515totalofbloodmpleswerecoleltedfromYi即koufromApril13,2020toApril16,2020TheserumantibodyIgMofsars-0v-2wasdefectedbycolloida1go'dimmunochromatographyandmagneticparticlechemiluminescenceAnd4Gdetection,gettheresults,combinedwiththenucleicaciddetectionresu

7、Its,comparethespecificityoftheiromethods,evaluatethefeasibilityofitsappjeationinlarge-scalepopulationscrewing,ResultsThenucleicacidtestresultsof515caseswereallnegative.Theresultsofantibodydetectionwerecolloidalgoldimmunochromatography:IgGspecificity99.61%(2/515),IgMspecificity99.03%(5I515),doublepos

8、itivespecificity99.81%(1515);magneticparticlechemiluminescence:IgGspecificity95.34%(24515),IgMspecificity99.22%(4/515),doublepositivespecificity100%(0/515).Amongthe24IgGpositivesamplesdetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethod,12(50%)sampleswerefoundwithS/COratiointherangeof1.001-1.500,5(20.8

9、3%)intherangeof1.501-2.000,and4(1667%)in(he(0%),from1.501to2.000(25%),andfrom2.001to2.001(75%).Conclusion1.Thesinglemethodofserumantibodydetectionisaffectedbyreagentqualityandothersubspeciesofcoronavirusantibody,resultinginahighfalse-positiverate,whichisnotsuitableforthepreliminaryscreeningofthepopu

10、lation.2.ThefalsepositiverateofIgGantibodydetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethodishigh,whichcanbereducedbyadjustingitsinterpretationstandard.3.Thedetectionofserumantibodyhasrheadvantagesofconvenientoperationandcostsaving.Itisoneoftheimportantmethodstoimprovetheefficiencybyusingdifferentme

11、thodstodetectscrumantibodyandlarge-scalepopulationscreening.Keywords:Novelcoronavirus,NovelcoronavirusPneumonia,Chemiluminescence,Colloidalgo：dImrnunochromatography,Immunoglobulin新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是人畜共患的正單鏈RNA病毒，有包膜，屬冠狀病毒。該科分為。、B、R了四個屬,SARS-CoV-2屬于6族，被列為第7類冠狀病毒，可引起新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)1,嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。COVID-

12、19主耍通過呼吸道飛沫和密切接觸傳播，無癥狀感染者及SARS-CoV-2患者均為傳染源，且人群普遍易感故早發(fā)小岫早皿"效控制皿°心"關(guān)淀。目前，明確的確診標(biāo)準(zhǔn)包括：1.實時熒光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性；2.病毒基因測序，與已知的的新型冠狀病毒高度同源；3.血清新型冠狀病毒特異性IgG抗規(guī)和IgM抗體陽性；血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性或恢復(fù)期較急，|生期4倍以卜升高"L研究表明，冠狄州Si至少餉碼'種炫構(gòu)夜白包拈勃夾安白spikeprotein.S坂白).小包B5精賞白(envekipeprotein.E白白>、

13、膜近線白(membranepTO-tein.Mifil3)以及核衣殼ifi臼N2HA).抗體檢測的將異性主耍與抗隙位點.的迭肝有關(guān),N步白和S策在是COVID-19憐測的主要抗煉位點.利用體待異性堵合的晾理.W通過抗嗯檢測抗體的存在【5】，共果用的核洌方$去主妥有膠體金法和化學(xué)發(fā)光法.就止到6月4幾全球輸診韌例己超過六百萬例，對全球各國的政治，經(jīng)濟等方力面面產(chǎn)生了尸或的影響.我國夜情控刮己經(jīng)進入內(nèi)反彈的階段.從武漢開始，各個城市開始道行大規(guī)模的人群播檢，本文詁含抗體校測詁果，對于大埋模人群券檢的使用方注進行討論.1資料與方法1.1標(biāo)本來源收集2020年4月13日至2020年4JJ16日營口地區(qū)

14、接收的515例調(diào)查對象的515份血清標(biāo)本。1.2試劑膠體金免疫層析法為新型冠狀病毒2019-nCoV抗體檢測試劑盒(英諾特生物技術(shù)有限公司)，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法為新型冠狀病毒(2019-nCoV)IgM抗體檢測試劑盒(奧博賽斯生物科技有限公司)及新型冠狀病毒(2019-nCoV)IgG抗體檢測試劑盒(奧博賽斯生物科技有限公司)。1 3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS210統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料用(%)表示，用軟小檢驗，計量資料用"礦表示，用，檢驗，P<0.05示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，2結(jié)果2 1515例調(diào)查對象不同檢測方法抗體陽性結(jié)果(表1)515例調(diào)查對象均進行了核酸檢測，結(jié)果均為陰性，抗體檢測

15、結(jié)果分別為膠體金免疫層析法：IgG陽性2例，特異度9961%(2I515),IgM陽性5例，特異度9903%(5515),其中包括IgG及IgM均陽性1例，性特異度99.81%(1/515);磁微粒化學(xué)發(fā)光法：IgG陽性24例，特異度95.34%(241515),IgM陽性4例,特異度99.22%(4/515),無IgG及IgM均陽性對象，雙陽性特異度100%(0/515)0兩種方法均出現(xiàn)陽性結(jié)果的調(diào)查對象0例。表1515例調(diào)查對象不同檢測方法抗體陽性結(jié)果膠體金免疫層析法磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法IgGIgM雙陽IgGIgM雙陽例數(shù)1412440特異度(%)99.619903998195.3499221

16、00'2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測IgG抗體與IgM抗體陽性對象及結(jié)果(表2)其中IgG陽性的24例標(biāo)本中,結(jié)果sl'co比值分布于1.001L500的標(biāo)本12例(50%),分布于1.501、2.000的標(biāo)本5例(20.83%),介于20014.000的標(biāo)本4例(16.67%),大于4.001的標(biāo)本3例(12.5%);IgM結(jié)果陽性的4例標(biāo)本中,s/co比值分布于1.0011.500的標(biāo)木0例(0%),介于1,5012.000的標(biāo)本1例(25%),大于2.001的標(biāo)本3例(75%).表2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測IgG抗體與IgM抗體陽性對象及結(jié)果IgG標(biāo)本編號37465789115sco

17、值1.4921.1765.3463.1551.1442.741標(biāo)本編號148154163216261275sco值1.7811.5831.6931.3471.2281.303標(biāo)本編號281332333356359373sco值1.9381.2641.1091.7143.7171.454標(biāo)本編號379400419423494515sco值1.0531.2791.0314.3212.0773.316IgM標(biāo)本編號74155190238sco值24.0771.8643.1563.8441調(diào)查對象凝血功能相關(guān)指標(biāo)篩檢結(jié)果及例數(shù)(表3)本研充同時對調(diào)查結(jié)果的凝血功能進行了篩查，包括部分凝血活酶時間(aP

18、TT)，凝血酶原時間(PT),國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)及纖維蛋白原(Fbg),檢測采用sysmexCA-1500全自動血凝儀器進行檢驗,國內(nèi)有報導(dǎo)證實了不同一起的測定結(jié)果具有較好的相關(guān)，性12.結(jié)果顯示.所有禎黃對皺;血功能均存在源戳傾向.表3調(diào)查對象凝血功能相關(guān)指標(biāo)篩檢結(jié)果及例數(shù)aPTTPTEbgINR結(jié)果范圍n結(jié)果范圍n結(jié)果范圍n結(jié)果范圍n>37.00s0313.00s034.00g'L300>12002300-37.00s515900-13.00s5152.00-4.00gL2150.80-1.20215W23.00s0W9.00s0W2.00gL0WO803003討

19、論2種不同方法進行的抗體檢測，特異度均在95%以上，另有國內(nèi)研究表明，對46例新型冠狀病毒肺炎確診病例進行抗體檢測，IgG及IgM均陰性患者為0例，由此可見，將血清抗體結(jié)果作為COVID-19感染診斷的重要輔助手段是切實可行的。但兩種方法均存在較多的假陽性結(jié)果，其原因可能由于目前批準(zhǔn)的抗體（IgG及IgM）檢測試劑盒多為應(yīng)急審批，未經(jīng)過嚴(yán)格的特異性（與其他冠狀病毒的交叉反應(yīng)）測試，也未經(jīng)過臨床驗證;此外,類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補體以及外源性干擾等因素也可能造成試驗結(jié)果的假陽，性5J.另有大M研究表毗不同神冠狀向毒Nfits濱H存任免疫交板應(yīng).11冠狀病毒的N溯形賀1*1的免疫交又反應(yīng)不僅弁在

20、亞磷內(nèi)，也#在于不同亞劇何，WitCOVID19抗體檢溺可受It他沖類抵狀麻存的彩響.可能死有一定的停串性率6.蜂上所建，單一萬法杭體校Ml的段III性率較高，W能受檢Ml試制本身性質(zhì)及其他亞種冠狀心毒抗修的影響.故將某一單一方法用于無徒狀人制的大艦?zāi)６紮z.用機次眼方法的姑果作為N定株準(zhǔn)，訶能造或較多的狀判,從而增加疾病篩查及管控的負(fù)擔(dān)。值得一提的是，膠體金免疫層析法檢測的IgG抗體，IgM抗體檢測及磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測的IgM抗體檢測結(jié)果的特異度均在99%以上，而磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測的IgG抗體陽性標(biāo)本數(shù)遠高于其他項目，且由表2可見，其s/co比值小于1.5的標(biāo)本占陽性結(jié)果的50,小于2.0

21、00的標(biāo)本占70.83%o而同一標(biāo)本采用膠體免疫層析法檢測IgG抗體結(jié)果提示陰性。針對這一結(jié)果，推測可能的原因1.調(diào)查對象確實存在IgG抗體陽性，但膠體金層析法提示其結(jié)果均為陰性，故考慮其中存在部分或大量假陽性標(biāo)本，2.假陽性標(biāo)本可能由于不同批號試劑本身及操作上的差別所致，由于本文中的標(biāo)本均未用同種方法復(fù)測，故其結(jié)果暫不能斷言。3.對于磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法結(jié)果判讀的標(biāo)準(zhǔn)，本文中陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)為s/co比值大于1.000,但表2可見大部分IgG抗體陽性的標(biāo)本，其sico比值均相對較小，sco比值大于2.()01的僅7例(29.17%),大于4.001的標(biāo)本3例(12.5%)。如調(diào)整陽性判讀值為大于2.

22、001或4.001,則其特異度分別提升為98.64%及9961%。所以，本文建議可以通過調(diào)整判定標(biāo)準(zhǔn)，從而降低假陽性率，提高特異度。本文結(jié)果中的515例標(biāo)本，分別均采用2種檢查方法，其中存在單一方法陽性的標(biāo)本，但兩種方法陽性的標(biāo)本之間無相互重疊。由此可見不同方法對于血清抗體的檢測，可以有效的排除假陽性標(biāo)本。調(diào)查對象經(jīng)呼吸道咽拭子核酸檢測確證均無COVID-19感染，也證實了這一設(shè)想。此外，血清抗體檢測相比呼吸道咽拭子抗體檢測，具有標(biāo)本采集易標(biāo)準(zhǔn)化，操作簡便，節(jié)約時間，且檢測快速等優(yōu)點。那么，可以將兩種不同方法聯(lián)合檢測血清抗體，作為人群COVID-19感染的篩查手段，從而有效控制人群大規(guī)模篩檢的成本。參考文獻WORLDHEALTHORGANIZATION.ClinicalmanagementofsevereacuterespiratoryinfectionwhenMiddleEastrespiratorysyndromecoronavirus(MERS-CoV)infectionissuspected:interimguidanceJ.2015.1 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會新型冠狀