傳染病項目SOP

1、徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第1 頁 共62 頁一、目的：規(guī)范乙型肝炎病毒表面抗原測定的標準操作程序，確保乙型肝炎病毒表面 抗原測定的結果準確有效。二、適用范圍：在AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的乙型肝炎病毒 表面抗原。三、臨床意義 乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據估計全球范圍內目前 大約有3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝 臟疾病，流行病學研究已經清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯系。 HB

2、sAg是乙肝病毒顆粒（HBV）的外殼成分，為大小不一的多肽。感染乙 型肝炎病毒后，機體會產生各種不同模式的抗原、抗體血清學免疫應答反應。 通過檢測這些標志物，不僅可以診斷感染，而且還可以判斷疾病的進程和預 后。HBsAg是HBV感染后第一個標志物，是提示樣本是否有潛在傳染性的最 好的間接指標。四、方法原理 本產品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBs抗體包被磁微粒，用 辣根過氧化物酶標記的抗-HBs抗體制備酶結合物。通過免疫反應形成抗體- 抗原-抗體-酶復合物，該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與HBsAg 含量成正比。五、標本的采集與處理5.1. 采用正確醫(yī)用技術收集血清/血漿樣本，

3、推薦對于使用普通管采血的樣 本，離心前樣本應37孵育至少1h；對于使用促凝管采血的樣本，離 心前樣本應37孵育至少0.5h，離心條件10000g/min，10min；對于使 用抗凝管采血的樣本，離心條件10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用 肝素作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和EDTA抗凝劑。 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結果，應離心除去，并確定樣 本未變質方可使用。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第2 頁 共62 頁 5.3.溶血或脂血的樣本

4、不能用于測定。 5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過8小時；如果不在8小時內檢測需將樣 本放置在28的冰箱中；若需48小時以上保存或運輸，則應凍存于 -20以下，避免反復凍融。使用前恢復到室溫，輕輕搖動混勻。 5.5.避免反復凍融。使用前恢復到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準 1）嚴重溶血、脂血 2）標本標識不明 七、儀器與材料 7.1.儀器：AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀 7.2.試劑：AutoLumo A2000專用乙型肝炎病毒表面抗原試劑 .試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。 .試劑盒于28儲存，有效期12個月。 .試劑盒應防止冷凍，避免強光照射。 .試

5、劑盒開啟使用后，28保存可使用1個月。 .試劑盒可適應1周內常溫運輸，運輸過程中應輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。 .試劑機載穩(wěn)定性 .1.試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結合物）豎直向上存放， 在2 10°C環(huán)境下冷藏保存2小時后，才可上機使 用。首次使用后，機載或在2 10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期 為28天。 .2.校準品開瓶后保存于28°C，穩(wěn)定期可維持1個月； 若需使用更長時間，應根據需要進行分裝，于-20 凍存（可以保存2個月），但應避免反復凍融。八、檢驗方法徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主

6、題內容乙型肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第3頁 共62 頁 8.1.消耗品檢查： . 根據儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.2.試劑包裝載： .試劑包首次上機前，輕輕地倒轉試劑包多次以混合新試劑包內的成 份，避免產生氣泡。不要倒轉已經打開的試劑包。 .儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數。 .如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.3.測試： .將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為150µl。 .裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。 .選擇“運行”開始測試

7、，系統自動進行試驗操作。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.4.定標： .儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數。 .如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。 .將校準品轉移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。 .裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標信息。 .選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。 .定標曲線有效期為28天。 .參考相應的儀器系統操作說明。 .出現以下情況需要進行定標曲線的重新生成： .1.質控結果經重復測定后仍然超出范圍； .2.試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型

8、肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第4 頁 共62 頁 .3.超出定標曲線的有效期限； .4.儀器重要部件更換或維修。 8.5.質控： 8.5.1.使用至少兩個分析物水平的質控品進行質控。 .出現以下情況需要進行質控： 8.5.2.1.測試試劑盒使用超過24小時； 8.5.2.2.更換新的試劑盒； 8.5.2.3.重新生成定標曲線； 8.5.2.4.停機。 .各實驗室需根據自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確 保合適的測試性能。 .質控值應落在規(guī)定的范圍內，如出現失控，應采取糾正措施。 8.6.稀釋 .使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為 1:100。

9、 .手工稀釋使用系統通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結果 乘以稀釋倍數計算最終結果。 .選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結果，參考相應的儀 器系統操作說明以及幫助系統。 .稀釋后的樣本含量應不低于0.05IU/ml。 8.7.結果計算： 選擇適當的曲線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數擬合方式，以校 準品濃度值為x軸，以校準品發(fā)光強度log值為y軸建立定標曲線。根據 待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統可通過存儲 的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結果。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主

10、題內容乙型肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第5頁 共62頁九、參考范圍 檢測1040例樣本，用ROC曲線方法確定正常參考值為0.05IU/ml； 建議各實驗室根據自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒 僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗結果的解釋 10.1. 用本試劑盒檢測結果濃度值為0.040.06IU/ml的弱反應性可疑樣本， 建議復孔重新測定，如果雙孔復查濃度值均小于0.05IU/ml，結果判為 陰性，如果單份或雙份測定不低于0.05IU/ml，結果判為有反應性，有 條件的實驗室建議做中和確證實驗，同時動態(tài)觀察。 10.2.本試劑盒測定范圍為0.

11、05250IU/ml，濃度值大于250IU/ml的樣本， 其結果是通過定標曲線外延得出的計算結果。如果要獲得其更準確的結 果，需對樣本進行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為1/500，使用系統 通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增 大稀釋比例。 10.3.由于方法學或免疫特異性等原因，使用不同生產商的試劑對同一份樣 本進行檢測可能會得到不同的檢測結果，因此不同試劑檢測所得結果 不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋，建議實驗室在檢測報 告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應進行 額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結果進行平行比較以重新確定基線 值。十一、檢驗

12、方法的局限性 11.1.本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應與臨床檢查、病史 及其他檢測相結合。 11.2.樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結果。此類樣本不適合 用本試劑盒進行檢測。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗原定量測定生效日期：20151008第6 頁 共62 頁 11.3.溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結果。十二、產品性能特征 12.1.陰性參考品符合率：檢測國家陰性參考品20份，不出現假陽性。 12.2. 陽性參考品符合率：檢測國家陽性參考品3份，不出現假陰性。 1

13、2.3.最低檢出量：用國家靈敏度參考品進行檢測，符合相應參考品要求。 12.4.精密性：10孔平行檢測濃度值為0.5IU/ml樣本，CV%15.0%；10 孔平行檢測濃度值為1.5IU/ml樣本，CV%10.0%。 12.5.線性：在0.05IU/ml250IU/ml范圍內，線性相關系數（r）不低于 0.9900。 12.6.分析特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗體無 交叉反應。2.5mg/ml血紅蛋白、200mg/L膽紅素、20g/L甘油三酯和 500mg/dl膽固醇對檢測結果無顯著干擾。 十三、參考文獻 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD

14、 practice guidelines：chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11: 97-107. 3.巴德年,1998年.當代免疫學技術與應用.北京醫(yī)科大學中國協和醫(yī)科大學聯 合出版社. 4.陶義訓, 1997年第二版,

15、免疫學與免疫學檢驗.人民衛(wèi)生出版社. 5.中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第7頁 共62 頁1、 目的：規(guī)范乙型肝炎病毒表面抗體測定的標準操作程序，確保乙型肝炎病毒表面 抗體測定的結果準確有效。2、 適用范圍：在AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的乙型肝炎病毒 表面抗體。三、臨床意義 乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據估

16、計全球范圍內目前 大約有3億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝 臟疾病，流行病學研究已經清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯系。 表面抗體(Anti-HBs)是一種保護性抗體，是乙肝感染后痊愈或趨向治愈 的象征；全程（3針）疫苗接種結束后1個月檢測保護性表面抗體(Anti-HBs) 的濃度，能夠判定免疫效果。關于表面抗體與保護力的關系，世界標準未完 全統一，目前普遍認為普通人群表面抗體濃度值10mIU/ml，就有足夠的保 護作用；高危人群表面抗體濃度值100mIU/ml，具有足夠的保護作用。肝 移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測表面抗體濃度值，每次檢測值 100mI

17、U/ml為宜。四、方法原理 本產品采用雙抗原夾心法原理進行檢測。用表面抗原包被磁微粒，用辣 根過氧化物酶標記表面抗原制備酶結合物。通過免疫反應形成抗原-抗體-酶 標抗原復合物，該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與表面抗體的含 量成正比。五、標本的采集與處理5.1. 采用正確醫(yī)用技術收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣 本，離心前樣本應37孵育至少1h；對于使用促凝管采血的樣本，離 心前樣本應37孵育至少0.5h，離心條件10000g/min，10min；對于使 用抗凝管采血的樣本，離心條件10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文

18、件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第8 頁 共62 頁 肝素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和EDTA抗凝劑。5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結果，應離心除去，并確定樣 本未變質方可使用。 5.3.溶血或脂血的樣本不能用于測定。5.4.樣本收集后在室溫放置不可超過8小時；如果不在8小時內檢測需將樣 本放置在28的冰箱中；若需48小時以上保存或運輸，則應凍存于 -20以下，避免反復凍融。使用前恢復到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準 1）嚴重溶血、脂血 2）標本標識不明 七、儀器與材料 7.1.儀器：適

19、用于AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀。 7.2.試劑：AutoLumo A2000專用乙型肝炎病毒表面抗體試劑 .試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。 .試劑盒于28儲存，有效期12個月。 .試劑盒應防止冷凍，避免強光照射。 .試劑盒開啟使用后，28保存可使用1個月。 .試劑盒可適應1周內常溫運輸，運輸過程中應輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。 .試劑機載穩(wěn)定性 .1.試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結合物）豎直向上存放， 在2 10°C環(huán)境下冷藏保存2小時后，才可上機使 用。首次使用后，機載或在2 10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期 為28天。 .2.校準品

20、開瓶后保存于28°C，穩(wěn)定期可維持1個月；若 需使用更長時間，應根據需要進行分裝，于-20凍徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第9頁 共62頁 存（可以保存2個月），但應避免反復凍融。八、檢驗方法 8.1.消耗品檢查： .根據儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.2.試劑包裝載： .試劑包首次上機前，輕輕地倒轉試劑包多次以混合新試劑包內的成 份，避免產生氣泡。不要倒轉已經打開的試劑包。 .儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的

21、參數。 .如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.3.測試： .將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為50µl。 .裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。 .選擇“運行”開始測試，系統自動進行試驗操作。 .參考相應的儀器系統操作說明。 8.4.定標： .儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數。 .如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。 .將校準品轉移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。 .裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標信息。 .選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。 .定標曲線有效期為28天。 8.4.7.

22、參考相應的儀器系統操作說明。 8.4.8.出現以下情況需要進行定標曲線的重新生成：徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第10 頁 共62 頁 8.4.8.1.質控結果經重復測定后仍然超出范圍； 8.4.8.2.試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改； 8.4.8.3.超出定標曲線的有效期限； 8.4.8.4.儀器重要部件更換或維修。 8.5.質控： 8.5.1.使用至少兩個分析物水平的質控品進行質控。 .出現以下情況需要進行質控： 8.5.2.1.測試試劑盒使用超過24小時； 8.5

23、.2.2.更換新的試劑盒； 8.5.2.3.重新生成定標曲線； 8.5.2.4. 停機。.各實驗室需根據自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確保 合適的測試性能。 8.5.4.質控值應落在規(guī)定的范圍內，如出現失控，應采取糾正措施。 8.6.稀釋 8.6.1.使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為 1:100。 8.6.2.手工稀釋使用系統通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結果 乘以稀釋倍數計算最終結果。 8.6.3.選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結果，參考相應的儀 器系統操作說明以及幫助系統。 8.6.4.稀釋后的樣本含量應不低于5mIU /ml。 8.7.結

24、果計算： 選擇適當的曲線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數擬合方式，以校 準品濃度值為x軸，以校準品發(fā)光強度log值為y軸建立定標曲線。根據徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第11 頁 共62頁 待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統可通過存儲 的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結果。九、參考范圍 正常參考值：10mIU/ml 建議各實驗室根據自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒 僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗結

25、果的解釋 10.1. 用本試劑盒檢測結果濃度值為8.012.0 mIU/ml的弱反應性可疑樣 本，建議雙份重新測定，如果雙份復查濃度值均小于10 mIU/ml，結果 判為陰性，如果單份或雙份測定不低于10 mIU/ml，結果判為陽性，同 時建議動態(tài)觀察。 10.2.本試劑盒測定范圍為51000mIU/ml，濃度值大于1000mIU/ml的樣本， 其結果是通過定標曲線外延得出的計算結果。如果要獲得其更準確的結 果，需對樣本進行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為1/100，使用系統 通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增 大稀釋比例。 10.3.由于方法學或免疫特異性等原因，使

26、用不同生產商的試劑對同一份樣 本進行檢測可能會得到不同的檢測結果，因此不同試劑檢測所得結果 不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋，建議實驗室在檢測報 告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應進行 額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結果進行平行比較以重新確定基線 值。十一、檢驗方法的局限性 11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應與臨床檢查、病 史及其他檢測相結合。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒表面抗體定量測定生效日期：20151008第12 頁 共62 頁 11.2.樣本中的異嗜

27、性抗體或類風濕因子會干擾檢測結果。此類樣本不適合 用本試劑盒進行檢測。 11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結果。 十二、產品性能特征 12.1. 符合率：與SFDA批準的試劑平行檢測1024份臨床樣本，陰性符合率 99.58%，陽性符合率99.02%，總符合率99.41%。 12.2. 最低檢出限：10mIU/ml。 12.3. 精密性：10孔平行檢測濃度值為10mIU/ml樣本，CV%15.0%；10孔 平行檢測濃度值為100mIU/ml樣本，CV%10.0%。 12.4.線性：在51000mIU/ml范圍內，線性相關系數（r）不低于0.9900。 12.5.分析特異性

28、：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗體無交叉 反應。2.5mg/ml血紅蛋白、200mg/L膽紅素、10g/L甘油三酯和500mg/dl 膽固醇對檢測結果無顯著干擾。 12.6.HOOK效應：測定HBsAb濃度值為30000mIU/ml的樣本，未出現HOOK 效應引起的假陰性結果。十三、參考文獻 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epide

29、miology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11: 97-107. 3.巴德年,1998年.當代免疫學技術與應用.北京醫(yī)科大學中國協和醫(yī)科大學聯 合出版社. 4.陶義訓, 1997年第二版,免疫學與免疫學檢驗.人民衛(wèi)生出版社. 5.中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案.徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病

30、毒e抗原定量測定生效日期：20151008第13 頁 共62 頁1、 目的：規(guī)范乙型肝炎病毒e抗原測定的標準操作程序，確保乙型肝炎病毒e抗原 測定的結果準確有效。2、 適用范圍：在AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的乙型肝炎病毒 e抗原。三、臨床意義 乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg），一般通稱e抗原。它來源于乙型肝炎病 毒的核心，是核心抗原的亞成分，或是核心抗原裂解后的產物，是可溶性蛋 白1。當核心抗原裂解時，可溶性蛋白部分（即e抗原）就溶于血清中，存 在于血液循環(huán)中。有研究表明，在PegIFN2a治療過程中，HBeAg水平對乙 肝治療應答有較好的預測價值2。許多專家

31、關注聚乙二醇干擾素治療過程中 HBeAg或HBsAg濃度的動態(tài)變化，認為這種量的變化往往是抗原消失或血 清轉換的前提，具有療效預測作用。對于乙肝治療過程中HBeAg和HBsAg 濃度明顯下降的患者應鼓勵繼續(xù)治療，以爭取獲得更好的療效3。4、 方法原理 本產品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBe制備磁微粒，辣根過 氧化物酶標記抗-HBe制備酶結合物。通過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗體 復合物，該復合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子，發(fā)光強度與HBeAg的含量成正 比。五、標本的采集與處理5.1.采用正確醫(yī)用技術收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣 本，離心前樣本應37孵育至少1h；對于

32、使用促凝管采血的樣本，離心 前樣本應37孵育至少0.5h，離心條件10000g/min，10min；對于使用 抗凝管采血的樣本，離心條件10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝 素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和EDTA抗凝劑。 5.2.樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結果，應離心除去。 5.3.嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本不能用于測定。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒e抗原定量測定生效日期：20151008第14 頁 共62 頁5.4.樣本收集后在室溫放置不可超過8小時；如果不在8小時內檢測需將樣

33、 本放置在28的冰箱中；若需48小時以上保存或運輸，則應采用正確 離心條件提取血清或血漿凍存于-20以下，避免反復凍融。使用前恢復 到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準 1）嚴重溶血、脂血 2）標本標識不明 七、儀器與材料 7.1.儀器：適用于Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀。 7.2.試劑：AutoLumo A2000專用乙型肝炎病毒e抗原試劑 7.2.1.試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。 7.2.2.試劑盒于28儲存，有效期12個月。 7.2.3.試劑盒應防止冷凍，避免強光照射。 7.2.4.試劑盒開啟使用后，28保存可使用1個月。 7.

34、2.5.試劑盒可適應1周內常溫運輸，運輸過程中應輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性 7.2.6.1.試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結合物）豎直向上存放， 在210°C環(huán)境下冷藏保存2小時后，才可上機使 用。首次使用后，機載或在2 10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期 為28天。 .要進行分裝，于-20凍存，但應避免反復凍融。八、檢驗方法 8.1.消耗品檢查： 8.1.1.根據儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。 8.1.2.參考相應的儀器系統操作說明。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型

35、肝炎病毒e抗原定量測定生效日期：20151008第15 頁 共62 頁 8.2.試劑包裝載： 8.2.1.試劑包首次上機前，輕輕地倒轉試劑包多次以混合新試劑包內的成 分，避免產生氣泡。不要倒轉已經打開的試劑包。 8.2.2.儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數。 8.2.3.如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。 8.2.4.參考相應的儀器系統操作說明。 8.3.測試： 8.3.1.將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為50µl。 8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。 8.3.3.選擇“運行”開始測試，系統自動進行試驗操作。 8.3.4

36、.參考相應的儀器系統操作說明。 8.4.定標： 8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數。 8.4.2.如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。 8.4.3.將校準品轉移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。 8.4.4.裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標信息。 8.4.5.選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。 8.4.6.定標曲線有效期為28天。 8.4.7.參考相應的儀器系統操作說明。 8.4.8.出現以下情況需要進行定標曲線的重新生成： 8.4.8.1.質控結果經重復測定后仍然超出范圍； 8.4.8.2.試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改； 8.4.8.3.超出定標曲線的

37、有效期限； 8.4.8.4.儀器重要部件更換或維修。 8.5.質控：徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒e抗原定量測定生效日期：20151008第16 頁 共62 頁 8.5.1.使用至少兩個分析物水平的質控品進行質控。 . 出現以下情況需要進行質控： 8.5.2.1.測試試劑盒使用超過24小時； 8.5.2.2. 更換新的試劑盒； 8.5.2.3.重新生成定標曲線； 8.5.2.4.停機。. 各實驗室需根據自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確 保合適的測試性能。 8.5.4.質控值應落在規(guī)定的范圍內，如出現

38、失控，應采取糾正措施。 8.6.稀釋 8.6.1.使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為 1:100。 8.6.2.手工稀釋使用系統通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結果 乘以稀釋倍數計算最終結果。 8.6.3.選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結果，參考相應的 儀器系統操作說明以及幫助系統。 8.7.結果計算： 選擇適當的曲線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數擬合方式，以校 準品濃度值為x軸，以校準品發(fā)光強度值的log值為y軸建立定標曲線。 根據待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統可通過 存儲的定標曲線以及樣本測試得到的信號值自動計算樣本測試結果。九

39、、參考范圍 檢測500例乙肝患者樣本和500例正常人樣本，用ROC曲線方法確定正 常參考值為<0.1PEI U/ml；建議各實驗室根據自己實際條件及接觸人群建立 正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒e抗原定量測定生效日期：20151008第17 頁 共62 頁十、檢驗結果的解釋10.1.用本試劑盒檢測結果為參考值附近等可疑樣本，建議重新測定，動態(tài)觀 察。10.2.由于方法學或免疫特異性等原因，使用不同生產商的試劑對同一份樣本 進行檢測可能會得到不同

40、的檢測結果，因此不同試劑檢測所得結果不應 直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋，建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生 的檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則 應進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結果進行平行比較以重新確定 基線值。 10.3.根據WHO文獻報道4，1PEI U/ ml1.05IU/ml。十一、檢驗方法的局限性 11.1.本產品檢測結果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據，對患 者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查、治療反 應及流行病學等信息綜合考慮。 11.2.樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結果，必須結合患者病 史，臨床檢查和其他臨床資料

41、來綜合評估檢測結果。 11.3.嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結果。 十二、產品性能特征 12.1.陰性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陰性參考品的要求； 12.2.陽性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陽性參考品的要求； 12.3.最低檢出量：符合中國食品藥品檢定研究院最低檢出量參考品的要求； 12.4.空白限：不大于0.05PEI U/ml； 12.5.線性：在0.1200PEI U/ml范圍內，線性相關系數r0.9900； 12.6.準確性：測定結果在規(guī)定范圍內； 12.7.分析特異性：與HIV抗體、HCV-IgG抗體、HAV-IgM抗體無交叉反應。徐州市

42、東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒e抗原定量測定生效日期：20151008第18 頁 共62頁 12.8.精密度：變異系數不高于15.0%； 12.9.干擾物質：40mg/dl膽紅素、2.5mg/ml血紅蛋白、500mg/dl甘油三酯對 檢測結果無顯著影響； 12.10.抗凝劑的影響：使用肝素抗凝的血漿對檢測結果無顯著影響； 12.11.HOOK效應：測定含量為1600PEI U/ml的樣本，不會出現HOOK效應； 12.12.方法學對比：與SFDA批準上市的試劑盒對比檢測1119份臨床樣本， 陰性符合率100%，陽性

43、符合率99.23%，總體符合率為99.73%。 十三、參考文獻 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, et al. Early serum HBsAg drop: a strong predictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a in HBeAg-negat

44、ive patients.Hepatology,2009,49:1151-1157. 3.干擾素治療慢性乙型肝炎專家討論組. 干擾素治療慢性乙型肝炎專家建議 J.中華傳染病雜志, 2007, 25(10): 577-583. 4.Annette, Reissinger, Peter, et al. Collaborative Study to Establish a WorldHealth Organization International Standard for Hepatitis B e Antigen (HBeAg)J. Expert Committee on Biological

45、Standardization, 2013, (2228): 1-37徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內容乙型肝炎病毒e抗體定量測定生效日期：20151008第19 頁 共62 頁1、 目的：規(guī)范乙型肝炎病毒e抗體測定的標準操作程序，確保乙型肝炎病毒e抗體 測定的結果準確有效。2、 適用范圍：在AutoLumo A2000化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的乙型肝炎病毒 e抗體。三、臨床意義 乙型肝炎病毒（HBV）屬嗜肝DNA病毒科, 具有明顯的種屬及嗜肝特性 （盡管其亦可感染肝以外的組織、器官或細胞，如脾、睪丸、人外周血單個

46、核細胞等），可致持續(xù)性病毒感染。HBV的感染導致血漿中出現特異性的乙 肝病毒e抗體及其它一系列特異性的血清學標志物。e抗體是乙型肝炎病毒 e抗體的簡稱（抗-HBe），它是由e抗原刺激人體免疫系統產生出來的特異 性抗體，這種特異的e抗體能夠和e抗原結合。四、方法原理 本產品采用競爭法原理進行檢測。用e抗體和e抗原包被磁微粒，用辣 根過氧化物酶標記e抗體制備酶結合物。通過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗 體復合物，該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與e抗體的含量成反 比。五、標本的采集與處理5.1.采用正確醫(yī)用技術收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣 本，離心前樣本應37孵育至少1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心 前樣本應37孵育至少0.5h，離心條件10000g/min，10min；對于使用 抗凝管采血的樣本，離心條件10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝 素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和EDTA抗凝劑。5.2.樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結果，應離心除去，并確定樣 本未變質方可使用。 5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過8小時；如果不在8小時內檢測需將樣徐州市東方人民醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導書文件編號：XZDF-3-MY-02版本/修訂號：A/0主題內