植物組織培養(yǎng)

1、植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)Page 2植物組織培養(yǎng)的原理植物組織培養(yǎng)的原理n 植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以致單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無(wú)菌操作使其在人工條件，能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過(guò)程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來(lái)已經(jīng)分化停止生長(zhǎng)的細(xì)胞，又能重新分裂，形成沒有組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)，既愈傷組織。這一過(guò)程“脫分化作用”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸?shù)较到y(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過(guò)程“再分化作用”。n 植物細(xì)胞的全能性。Page 3植物組織培養(yǎng)的目的植物組織培養(yǎng)的目的n 培養(yǎng)條件可以人為控制 n 組織培養(yǎng)采用的植物材料完全是在人為提供的培養(yǎng)基質(zhì)和小氣候環(huán)境條件下進(jìn)行生長(zhǎng)， 擺

2、脫了大自然中四季、晝夜的變化、以及災(zāi)害性氣候的不利影響， 且條件均一，對(duì)植物生長(zhǎng)極為有利，便于穩(wěn)定地進(jìn)行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。n 生長(zhǎng)周期短，繁殖率高 n 植物組織培養(yǎng)由于可人為控制培養(yǎng)條件， 根據(jù)不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養(yǎng)條件，因此生長(zhǎng)快，往往個(gè)月左右為一個(gè)周期 。所以，雖然植物組織培養(yǎng)需一定設(shè)備及能源消耗， 但由于植物材料能按幾何級(jí)數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來(lái)說(shuō)成本低廉，且能及時(shí)提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。n 管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制n 植物組織培養(yǎng)是在一定的場(chǎng)所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營(yíng)養(yǎng)、激素等條件，極利于高度集約化的高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動(dòng)化

3、控制生產(chǎn)。 與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、 澆水施肥、防治病蟲等一系列繁雜勞動(dòng)，可以大大節(jié)省人力、物力及田間種植所需要的土地。Page 4組織培養(yǎng)的流程Page 5植物組織培養(yǎng)成功的因素n 一般來(lái)說(shuō)，主要有： 培養(yǎng)基的成分及pH值、n 供體植物的基因型n 外源激素的種類和濃度n 外植體的年齡和來(lái)源n 碳源的種類和濃度n 此外繼代次數(shù)、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)方式等也會(huì)影響培養(yǎng)成功率。Page 61。褐變現(xiàn)象及對(duì)策n現(xiàn)象：外植體在培養(yǎng)過(guò)程中切口產(chǎn)生的多分類物質(zhì)被氧化成褐色的醌類物質(zhì)。褐變現(xiàn)象主要發(fā)生在外植體的，外植體的部位不同，取材時(shí)期不同，褐變程度不同。n對(duì)策：在培養(yǎng)基中加入活性炭可以防止細(xì)胞褐

4、變的發(fā)生和發(fā)展。 ：外植體接種后1-2天既轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上，使細(xì)胞在褐化之前及時(shí)轉(zhuǎn)移可以大大減輕或避免褐化。Page 72.玻璃化現(xiàn)象及對(duì)策n現(xiàn)象：玻璃化指在組織培養(yǎng)過(guò)程中，有些植物的嫩莖葉片往往會(huì)呈現(xiàn)半透明狀，水浸裝的現(xiàn)象。n對(duì)策：選擇不易玻璃化的基因型及部位做外植體。：采取改善氧氣供應(yīng)狀況和通氣條件，控制溫度，適當(dāng)?shù)蜏靥幚?，降低容器?nèi)相對(duì)濕度。：適當(dāng)提高蔗糖含量降低培養(yǎng)基中的水勢(shì)，減少細(xì)胞分裂素及生長(zhǎng)素等方法均可減少玻璃苗的發(fā)生。Page 83.污染現(xiàn)象及對(duì)策n現(xiàn)象：在培養(yǎng)過(guò)程中，如果環(huán)境，培養(yǎng)基或外植體滅菌不徹底，操作不規(guī)范等。微生物則會(huì)在培養(yǎng)基中滋生，并使培養(yǎng)物的生長(zhǎng)受到影響甚至死亡

5、。n對(duì)策：嚴(yán)格的無(wú)菌操作是降低污染率的關(guān)鍵，選擇在植物生長(zhǎng)旺盛期采用外植體并進(jìn)行消毒，并在培養(yǎng)基中加入適量抗生素殺菌劑，實(shí)行開放式組織培養(yǎng)，簡(jiǎn)化了組織培，并將污染率控制在10一下，能有效的解決雜菌感染的問(wèn)題。一下，能有效的解決雜菌感染的問(wèn)題。Page 9食莢型豌豆組織培養(yǎng)和植株再生研究雜志：西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）雜志：西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 關(guān)鍵詞】關(guān)鍵詞】 豌豆；豌豆； 外植體篩選；外植體篩選； 植株再生；植株再生； 增殖系數(shù)增殖系數(shù)作者】作者】 蘇承剛；蘇承剛； 吳學(xué)科；吳學(xué)科； 鄭占偉；鄭占偉； 孫文??；孫文??； 肖波；肖波； 張興國(guó)張興國(guó)；Page 10 食莢豌豆的組織

6、培養(yǎng)的原因食莢豌豆的組織培養(yǎng)的原因 l食莢豌豆（食莢豌豆（Pisum sativum LPisum sativum L）, ,因莢大翠綠，口因莢大翠綠，口感清香脆嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受人們喜愛。對(duì)豌豆品感清香脆嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受人們喜愛。對(duì)豌豆品種品行改良，利用常規(guī)育種方法周期長(zhǎng)，又達(dá)不到種品行改良，利用常規(guī)育種方法周期長(zhǎng)，又達(dá)不到預(yù)期效果，而利用轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)對(duì)作物進(jìn)行品種預(yù)期效果，而利用轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)對(duì)作物進(jìn)行品種 改良能快速有效，但必須建立高效的再生繁殖體系改良能快速有效，但必須建立高效的再生繁殖體系. .Page 11食莢豌豆組織培養(yǎng)的意義食莢豌豆組織培養(yǎng)的意義l 我們以食莢型豌豆子葉，莖

7、和真葉為材料我們以食莢型豌豆子葉，莖和真葉為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)及植株再生研究，為豌豆品種進(jìn)行組織培養(yǎng)及植株再生研究，為豌豆品種的遺傳轉(zhuǎn)化，資源試管保存以及優(yōu)良品種快的遺傳轉(zhuǎn)化，資源試管保存以及優(yōu)良品種快繁提供技術(shù)參考。繁提供技術(shù)參考。 Page 12豌豆組織培養(yǎng)的試驗(yàn)方法豌豆組織培養(yǎng)的試驗(yàn)方法l 1.1.材料與方法材料與方法 l l 1.11.1共試材料共試材料 試驗(yàn)材料為食莢型豌豆試驗(yàn)材料為食莢型豌豆1 1號(hào)號(hào) l l 1.21.2無(wú)菌苗獲得無(wú)菌苗獲得 將豌豆種子用洗衣粉溶液浸泡將豌豆種子用洗衣粉溶液浸泡1min1min，然后用，然后用自來(lái)水沖洗干凈，在超凈臺(tái)上用自來(lái)水沖洗干凈，在超凈臺(tái)上用7

8、575的乙醇金袍的乙醇金袍30s,30s,轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入0.10.1HgCL2HgCL2溶液浸泡溶液浸泡8-10min8-10min后，無(wú)菌水后，無(wú)菌水漂洗漂洗4-64-6次，接種于次，接種于1 12NS2NS培養(yǎng)基中培養(yǎng)生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中培養(yǎng)生長(zhǎng)，13d13d左右長(zhǎng)出幼苗供實(shí)驗(yàn)備用。左右長(zhǎng)出幼苗供實(shí)驗(yàn)備用。Page 13l 1.31.3外植體的篩選外植體的篩選 將無(wú)菌苗子葉和真葉切成將無(wú)菌苗子葉和真葉切成0.5cm0.5cm見方小塊，見方小塊，莖帶節(jié)或不莖帶節(jié)或不帶節(jié)切成0.5小段分別接MS+BA0.5mgL+NAA0.5 mgL培養(yǎng)基中進(jìn)行外植體篩選試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)外植體愈傷組織誘導(dǎo)率和芽分化率。l l

9、1.4愈傷組織誘導(dǎo) 根據(jù)1.3 篩選出的外植體為材料進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)試 驗(yàn)，篩選出最佳的誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基。基本培養(yǎng)基為MS，附加不同濃度配比的激素BA,NAA和2,4D。Page 14 l l 1.5 1.5芽分化芽分化 以MS為基本培養(yǎng)基，添加激素BA0.5-3mgL,KT0.5-3mgL,分別與NAA0-0.5mgL組合進(jìn)行芽分化試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分化率，芽長(zhǎng)，增殖系數(shù)等指標(biāo)。 l l 1.6 1.6 根誘導(dǎo)根誘導(dǎo) 在MS 培養(yǎng)基中分別附加激素NAA0.5,1,2,3mgL進(jìn)行根的誘導(dǎo)，統(tǒng)計(jì)生根的情況。 l l 1.7 1.7愈傷組織的誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo) 以上各項(xiàng)試驗(yàn)處理都為3次重復(fù)，培養(yǎng)基中附加3蔗糖和0.65瓊脂，PH5.8,在室溫25左右光照為40W日光燈14hd條件下培養(yǎng)，每30d觀察并記錄生長(zhǎng)情況。Page 15豌豆組織培養(yǎng)的結(jié)果豌豆組織培養(yǎng)的結(jié)果n n 以豌豆，子葉，莖，真葉為材料進(jìn)行