臨床分子生物學檢驗復習提綱

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上臨床分子生物學檢驗1. DVA的一級結構是由哪種化學鍵連接？兩條單鏈間：堿基氫鍵；相鄰堿基間：范德華力；脫氧核苷酸間：3-5磷酸二酯鍵2. 可以出現在人體循環(huán)系統(tǒng)中的游離核苷酸是？脫氧核苷酸，核糖核酸3. 原核生物DNA的復制方式是？型半保留復制4. 核小體結構中的組蛋白是哪些蛋白？各自的作用有？H2A、H2B、H3、H4：核心顆粒，形成核小體。H1：連接線上，鎖定核小體、參與包裝5. PCR體系中抑制Taq酶活性的物質有哪些？過量加入什么會減少Mg2+濃度導致Taq酶活性降低？游離的Mg2+濃度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基團，螯合劑如EDTA均可與鎂離子

2、結合減少Mg2+濃度。6. PCR擴增時，鏈的延伸從什么地方開始？對于引物是哪一端？模板鏈呢？從引物的3端開始，方向5到3；模板DNA序列的3端；3端7. 在波長260nm的紫外線下，A值=1時雙鏈DNA的濃度大約相當于？50ug/ml的雙鏈DNA。（40ug/ml的單鏈DNA或單鏈RNA ，33ug/ml的單鏈寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸濃度的鑒定）計算公式：雙鏈DNA 50A260樣本稀釋倍數 1000（ug/ul）單鏈DNARNA 40A260樣本 稀釋倍數 1000（ug/ul）單鏈寡聚核苷酸DNA 33A260樣本 稀釋倍數1000（ug/ul）8. 關于基因的定義正確的是？能

3、編碼有功能的蛋白質多肽鏈或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能單位。是遺傳的結構和功能單位。一個基因大都包括編碼蛋白質多肽鏈或RNA的編碼序列，保證轉錄和加工所必須的調控序列（啟動子，增強子），5端、3端非編碼序列。9. 地中海貧血患者的基因缺陷主要是？基因突變中的點突變10.Taq酶的特性有？有很高的耐熱穩(wěn)定性酶量增加使反應特異性下降，酶量過少影響反應產量；Taq DNA聚合酶無3 5外切酶活性，因而無校正功能，在復制新鏈的過程中會發(fā)生堿基錯配 ；Taq DNA聚合酶在每次循環(huán)中產生的移碼突變率為1/30000，堿基替換率為1/8000，因此擴增的片段越長，錯配的機率越高。 11

4、. 實時熒光定量PCR技術中非特異性熒光染色技術？SYBR Green I12.人類基因組DNA多態(tài)性的形式？限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）；短序列重復序列（STR）;單核苷酸多態(tài)性（SNP）13.常用于菌種鑒定的分子標志物是？16sRNA14.真核生物染色體的DNA三級結構不是閉環(huán)雙鏈超螺旋結構的是？15.原核生物RNA聚合酶的特性有？原核生物細胞中只有1種RNA聚合酶，可參與合成mRNA、tRNA和rRNA。RNA聚合酶催化聚合反應時需要Mg2+或Mn2+。該酶無校正功能。16. PCR反應的特異性取決于？引物17. DNA的變性是指？在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程

5、。變性后其它理化性質變化：增色效應 粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸堿滴定曲線改變生物活性喪失18.參與DNA復制的酶有哪些？（1）DNA聚合酶（2）拓撲異構酶：:兼具內切酶和連接酶活力，能迅速將DNA超螺旋或雙螺旋緊張狀態(tài)變成松馳狀態(tài)，便于解鏈。 (3）DNA解鏈酶（4）單鏈結合蛋白(SSB)：結合在解開的DNA單鏈上，防止重新形成雙螺旋。 (5）引物酶和引發(fā)體 ：啟動RNA引物鏈的合成。 (6）DNA連接酶19. 第一個分離到的抑癌基因是？視網膜母細胞瘤基因 （Rb基因）20.1978年簡悅威采用Southen分子雜交技術檢測出了什么疾??？鐮狀細胞貧血癥21. 核酸的分離和純化中，沉淀DN

6、A的常用試劑是？常用的有機溶劑有： 乙醇、異丙醇、聚乙二醇常用的鹽類有： 醋酸鈉、醋酸鉀、醋酸銨、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂等。22. 通過紫外分光光度法可對核酸純度進行鑒定，怎么鑒定？反過來是否成立？否通過A260與A280的比值來判斷有無蛋白質的污染。在TE緩沖液中： 純DNA的A260A280比值為1.8； 純RNA的A260A280比值為2.0 【注意事項：（1）蛋白質及酚的污染均可使比值下降，可通過蛋白質在280nm的高吸收峰與酚在270nm的高吸收峰來鑒別。（2）RNA污染可致DNA樣品的比值高于1.8。（3）比值為1.8的DNA溶液不一定是純DNA溶液，可能兼有蛋白質、酚、RNA的污

7、染。（4）2.0是高質量的RNA的標志，但由于RNA二級結構的不同，其讀數可能會在1.82.1之間波動。（5） RNA溶液的pH值會影響A260A280的讀數，在水溶液中A260A280的比值比在Tris緩沖液（pH7.5）的讀數低0.20.3。因此，精確測定RNA的濃度應使用水溶液，精確測定RNA的純度應使用Tris10mmol/L（pH7.5）溶液。】23.對于等位基因突變位點已被闡明的一些遺傳病，可以采用基因診斷的方法是？直接診斷：Southern 印跡技術多重PCR技術PCR-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）等位基因特異性寡核苷酸（ASO）DNA芯片技術（DNA chip）單鏈

8、構象多態(tài)性（SSCP）變性梯度凝膠電泳（DGGE）DNA序列分析（DNA sequencing） GGTACC 24.限制性內切酶的（通常指類）特點是？（類限制性核酸內切酶識別序列特點）回文結構 CCTAGG切口 ： 平端切口 - 平末端粘端切口 - 粘性末端【同功異源酶： 來源不同的限制酶，能識別和切割同一位點。 同尾酶： 有些限制性內切酶雖然識別序列不完全相同，但切割DNA后產生相同的粘性末端】例如: 淀粉液化芽胞桿菌 （Bacillus amyloliguefaciens）H株 第1種限制性內切酶，命名為Bam H25以mRNA為模板合成cDNA的酶是（RTPCR內容）？逆轉錄酶26.S

9、anger法DNA測序時ddNTP（雙脫氧核苷酸，少一個羥基）的作用是？ddNTPs 是反應終止劑，可以當作正常堿基參與復制，一旦鏈入DNA中，其后就不能再繼續(xù)連接。27Southern印跡法的步驟有？待測核酸樣品的制備?瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品電泳凝膠預處理轉膜探針標記預雜交Southern雜交洗膜放射性自顯影檢測28.DVA芯片技術的本質？核酸分子雜交技術29. 影響限制性內切酶活性的物質有？乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高濃度金屬離子,均會降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 30. 大腸桿菌（原核生物）基因組的特點？DNA較小；基因數目較少；通常為一條

10、環(huán)狀雙鏈DNA（dsDNA）；只有一個DNA復制起始點；GC含量差異很大；基因組DNA位于細胞中央的核區(qū)，無核膜，形成類核結構；結構基因中無內含子；多數為單拷貝基因，編碼rRNA、tRNA的基因為多拷貝；具有編碼同功酶的基因。31. 乙肝病毒（病毒）基因組特點？分子較小，基因數少；雙鏈DNA病毒（逆轉錄：是一類特殊類型的單鏈正鏈RNA病毒，含有RNA指導的DNA聚合酶，能使RNA反轉錄生成DNA。）【每種病毒只含一種核酸（RNA或DNA），可為雙鏈或單鏈、環(huán)狀或線性】基因組中有基因重疊現象；有操縱子結構和相關基因叢集；少或無重復序列；基因組中編碼序列占90%以上；含有不規(guī)則結構基因。32檢測目

11、標是RNA的雜交技術是？Northern印跡雜交32. 檢測目標是DNA的雜交技術是？Southern印跡雜交、反向點雜交（RDB）、原位雜交33. 細胞內壽命最短的RNA是？mRNA34. 細胞內含量最多的RNA是？rRNA35. 細胞內具有調控功能的RNA是？miRNA37. PCR結果電泳圖的閱讀，各個條帶分別代表的意義？哪些是marker, 哪些是有效條帶？38. 哪些是非特異擴增？哪些是引物二聚體？產生這些條帶的原因？1 DNA模板濃度過高 引物濃度過高，形成引物二聚體 Taq DNA聚合酶酶量過多 dNTP濃度過高 Mg2+濃度過高 退火溫度過低 延伸時間過長C+G堿基含量在引物中

12、比例過高2 【引物二聚體是在PCR反應中，兩條引物上的互補堿基相結合形成的聚合體，這種聚合體出現了，就相當于原本可以擴增的原料鏈減少了，即會導致擴增的效率降低?！縧 其中很重要的一個就是引物自身的原因，也就是設計的引物特異性不好，不能有效的和模板進行結合，而出現引物自身配對結合的情況l 其次還可能是PCR體系及反應條件的問題，如果PCR體系中引物、鎂離子以及酶濃度過高，模板量過低，退火時間過長等，都容易產生二聚體39.根據堿基互補原則計算DNA中ATGC各種的含量？40. 和人類線粒體基因組有關的疾病有哪些？（了解）耳聾，糖尿病41.RNA鏈的合成方向？5 342.抑癌基因的作用？（存在于正常

13、細胞內的一類可抑制細胞過度生長與增殖的基因，從而有潛在抑癌作用，當這類基因發(fā)生突變、缺失或失活時，可引起細胞惡性轉化而導致腫瘤的發(fā)生。）1 誘導終末分化2 維持基因穩(wěn)定3 觸發(fā)衰老，誘導細胞程序性死亡4 抑制蛋白酶活性或改變DNA甲基化酶活性5 調節(jié)血管形成6 促進細胞間聯系43. 參與原核生物轉錄終止的因子是？因子【原核生物轉錄的終止有兩種主要機制.一種機制是需要蛋白質因子（Rho）的參與,稱為依賴因子(factor)的轉錄終止機制,另一種機制是在離體系統(tǒng)中觀察到,純化的RNA聚合酶不需要其他蛋白質因子參與,可使轉錄終止,稱為不依賴因子的轉錄終止機制.】44. 原核生物DNA聚合酶具有的酶活

14、性有？主要用于修復DNA5 3聚合酶活性與延伸能力3 5外切酶活性與校對功能（保真性）5 3外切酶活性與切口平移45. 編碼血紅蛋白鏈第六位谷氨酸的密碼由GAG突變?yōu)镚TG所引起的血紅蛋白病為鐮刀狀紅細胞貧血46. PCR反應中的污染最主要的來自于？污染主要來自于：擴增產物的污染（為最主要的來源）、試劑及器材污染、標本間的交叉污染、實驗人員的污染等。【污染是導致PCR假陽性的主要原因?！?7. 翻譯的基本方式（基本過程/進位、轉鈦、移位）成為什么循環(huán)？核糖體循環(huán)48. 核酸的分離與純化的步驟有哪些？第一步是什么？1 核酸的釋放2 核酸的純化3 核酸的濃縮和沉淀4 核酸的鑒定與貯存49. 基因診

15、斷的方法對感染性疾病進行診斷的主要優(yōu)點是？?快速、靈敏、特異等優(yōu)點50. 原核生物DNA聚合酶具有的酶活性有？5 3聚合酶活性與延伸能力3 5外切酶活性與校對功能（保真性）5 3外切酶活性與切口平移51. 影響融解溫度（Tm值）的因素/影響DNA變性的因素有？1 Tm值取決于核酸分子的G-C含量2 溫度；溶液PH值；變性劑（如尿素、酰胺以及某些有機溶劑如乙醇、丙酮等）52. 基因診斷的間接診斷策略中的不確定性的原因是？l 遺傳標志所帶的信息有限l 新突變l 基因重組l 家系成員不夠完整53. 在基因組DNA的提取過程中為了保護DNA一級結構的完整性而應該采取的措施有？苯酚的使用：（1）使用還原酚：氧化酚可使DNA斷裂。重蒸酚并加入8-羥基