高效液相色譜法測定呋芐西林鈉含量與有關物質

1、高效液相色譜法測定呋芐西林鈉含量與有關物質              作者：潘穎 項競佐 劉浩 仇仕林【摘要】  目的 建立呋芐西林鈉含量與有關物質的HPLC分析方法。方法 采用ODS柱，以磷酸鹽緩沖液(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調節(jié)pH值至3.5)乙腈(7525)為流動相A；以磷酸鹽緩沖液乙腈(2080)為流動相B，含量測定以流動相A進行等度洗脫，有關物質測定采用線性梯度洗脫，流速為1.0ml/min，檢測波長為254nm。結果 呋芐西林在0.096

2、419.29g的范圍內，進樣量與峰面積的線性關系良好(r=0.9999)，最低檢測限為1.2ng。結論 本方法可用于呋芐西林鈉的有關物質及含量測定，方法專屬性強，重現(xiàn)性好，操作簡便。 【關鍵詞】  呋芐西林鈉 有關物質 含量測定 高效液相色譜   Determination of furbenicillin sodium and its related substances by HPLC   ABSTRACT  Objective  To establish a new method for determination o

3、f furbenicillin sodium and its related substances.  Method  An ODS column was used. Mobile phase A: phosphate buffer (0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution, pH adjusted to 3.5 by phosphoric acid)acetontrile (7525), mobile phase B: phosphate bufferacetontrile (2080), isocratical

4、 elution was used for content determination and linear gradient elution for related substances. The flow rate was 1.0ml/min. The detection wavelength was 254nm. Results  The relationship between sample sizes (a range from 0.0964g to 19.29g) and peak areas had showed a good linearity (correlatio

5、n coefficient r=0.9999). The detection limit is 1.2ng.  Conclusion The method can be used to analyze furbenicillin sodium qualatively and quantitively. The method is easy, highly specific, efficient and reproducible.   KEY WORDS  Furbenicillin sodium;  Related substances;

6、60; Content determination;  HPLC   呋芐西林鈉(furbenicillin sodium)為氨基青霉素的脲基衍生物，有較強的抗菌活性。對不產青霉素酶金葡菌、肺炎球菌、A組溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌屬的抗菌作用與哌拉西林相仿1。   呋芐西林鈉(呋脲芐青霉素鈉)為衛(wèi)生部藥品標準抗生素藥品(第一冊)1989年版所收載(標準編號為WS1C2002189)，其含量測定方法采用酸堿法和碘量法之綜合容量法，不但專屬性差，且操作方法和計算過程均很繁瑣復雜。本文建立了反相高效液相色譜法測定呋芐西林鈉的含量及有關物質，其

7、專屬性強，重現(xiàn)性好，操作簡便。   1  儀器和試藥   1.1  儀器   Agilent 1100高效液相色譜儀系列，包括四元泵、可變波長檢測器、自動進樣器和ChemStation工作站。   1.2  試藥   乙腈為色譜純試劑，磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純。呋芐西林對照品為本所標定的工作對照品，純度為97.3%。呋芐西林鈉共6批，分別來源于兩個不同的生產單位。2  實驗方法與結果   2.1  色譜條件 

8、60; 色譜柱：Merck Lichrosper 100 RP18e(250mm×4.0mm，5m)；流動相A：磷酸鹽緩沖液(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調節(jié)pH值至3.5)乙腈(7525)；流動相B：磷酸鹽緩沖液乙腈(2080)；含量測定以流動相A進行等度洗脫；有關物質進行線性梯度洗脫，015min：A為100%，B為0；45min：A為0，B為100%；55min：A為100%，B為0。流速1.0ml/min，檢測波長254nm；進樣體積10l。           

9、2.2  測定法   (1)有關物質  取本品約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。兩個生產企業(yè)產品的有關物質色譜圖分別見圖1、圖2。   (2)含量測定  取本品及對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋成每1ml中含0.2mg的溶液，分別作為供試品溶液和對照品溶液。兩個生產企業(yè)的供試品溶液色譜圖分別見圖3、圖4。   2.3  方法學考察  

10、(1)線性范圍  精密稱定呋芐西林對照品適量，用流動相分別稀釋成0.0964、0.1929、0.964、1.929、9.64、19.29g/ml的溶液，記錄色譜峰面積，將所得呋芐西林峰峰面積與進樣量作線性回歸，得回歸方程為   A=1523.9C+79.045  r=0.9999   圖1   甲企業(yè)有關物質色譜圖(呋芐西林保留時間為13.651min)   圖2   乙企業(yè)有關物質色譜圖(呋芐西林保留時間為13.661min)   圖3 

11、60; 甲企業(yè)含量測定的供試品溶液色譜圖圖4   乙企業(yè)含量測定的供試品溶液色譜圖(下轉第767頁)(上接第  頁)提示在0.0964g19.29g的范圍內，進樣量與峰面積的線性關系良好。   (2)方法精密度  取某一批供試品共6份，分別進樣，所得峰面積的相對標準偏差為0.03%。   (3)最低檢測限  以信噪比為3，所得最低檢出限為1.2ng。   (4)耐用性考察  采用三根不同品牌的色譜柱，(a)大連依利特公司Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm，5m)；(b)TSK公司TSKGel ODS100S(4.6mm×150mm，5m)；(c)Merck公司Lichrosper 100 RP18e(4.0mm×250mm，5m)，三根色譜柱均可將呋芐