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文檔簡介

1、1 基因工程菌發(fā)醉操作流程.檢查發(fā)酵車間是否達到發(fā)酵要求(所以設備處于待用狀態(tài))。2 .通知蒸汽車間按時送符合要求蒸汽。3 .種子罐基礎培養(yǎng)基的領料及定容配制。4 .種子罐的PH、DO電極的校正安裝和補料口堵頭更換。5 .種子罐進料,調PH。6 .種子罐基礎培養(yǎng)基在位滅菌,同時滅移種管道上段。7 .種子罐冷卻后可連接酸、堿、消泡劑補料瓶。8 .種子罐培養(yǎng)基溫度、PH(需進一步校準卜罐壓、消泡達到發(fā)酵條件。通知菌種室準備菌種轉接。9 .無菌操作將種子罐所需MgSO4、Amp轉入菌種轉換罐。10 .種子罐擴增培養(yǎng)發(fā)酵階段需平穩(wěn)控制罐壓、PH、DO、溫度、消泡。11 .大罐基礎培養(yǎng)基領料及配制。12

2、 .大罐PH、DO電極校正安裝及補料口堵頭的更換。13 .大罐進料、定容、調PH;堿罐堿液的配制。14 .大罐基礎培養(yǎng)基在位滅菌,同時對移種管道、進料管道、補料管道、堿罐及堿管道上段的滅菌。15 .大罐基礎培養(yǎng)基溫度降至發(fā)酵溫度后再次校準PH、DO。連接補料瓶調節(jié)至發(fā)酵條件。16 .無菌操作將大罐所需MgSO4、Amp轉入菌種轉換罐并轉入種子罐。17 .利用壓力差將種子罐里的種子液移接到大罐。18 .補堿時,將管道上閥門打開。程序設為自動,控制流量。19 .補料罐補料培養(yǎng)基的領料定容配制。20 .補料罐補料培養(yǎng)基在位滅菌,同時對管道上段滅菌。21 .補料時,將管道上閥門打開。程序設為自動,設置

3、流量。22 .誘導劑領料,在配料罐中加水配制定容。23 羽誘導劑打入種子罐,滅菌后保持罐壓。24 .利用壓力差將種子罐里的誘導劑移接到大罐。25 .一段時間后,大罐的PH、DO呈上升形態(tài)即為發(fā)酵結束,可放罐離01 芽抱桿菌發(fā)酵操作流程.檢查發(fā)酵車間是否達到發(fā)酵要求(所以設備處于待用狀態(tài))。2 .通知蒸汽車間按時送符合要求蒸汽。3 .種子罐基礎培養(yǎng)基的領料及定容配制。4 .種子罐的PH、DO電極的校正安裝和補料口堵頭更換。5 .種子罐進料,調PH。6 .種子罐基礎培養(yǎng)基在位滅菌,同時滅移種管道上段。7 .種子罐冷卻后可連接酸、堿、消泡劑補料瓶。8 .種子罐培養(yǎng)基溫度、PH(需進一步校準卜罐壓、消

4、泡達到發(fā)酵條件。通知菌種室準備菌種轉接。9 .無菌操作將種子罐所需MgSO4、Amp轉入菌種轉換罐。10 .種子罐擴增培養(yǎng)發(fā)酵階段需平穩(wěn)控制罐壓、PH、DO、溫度、消泡。11 .大罐基礎培養(yǎng)基領料及配制。12 .大罐PH、DO電極校正安裝及補料口堵頭的更換。13 .大罐進料、定容、調PH;堿罐堿液的配制。14 .大罐基礎培養(yǎng)基在位滅菌,同時對移種管道、進料管道、堿罐及堿管道上段的滅菌。15 .大罐基礎培養(yǎng)基溫度降至發(fā)酵溫度后再次校準PH、DO。連接酸、消泡劑補料瓶調節(jié)至發(fā)酵條件。16 .無菌操作將大罐所需MgSO4、Amp轉入菌種轉換罐并轉入種子.利用壓力差將種子罐里的種子液移接到大罐。17

5、.補堿時,將管道上閥門打開。程序設為自動,控制流量。18 .發(fā)酵一定時間后,程序中PH設為手動,停止對PH、DO控制.一段時間后,大罐里抱子大量生長后即為發(fā)酵結束,可放罐離心,設備操作規(guī)程1 .種子罐滅菌.首先排夾套水,關閉所有閥門。然后先后打開夾套排污閥、夾套進蒸汽閥。夾套開始進蒸汽對罐體進行預熱。2 .微開取樣排蒸汽閥、取樣進蒸汽閥,對取樣管路進行滅菌。滅菌時間一股10分鐘。取樣管路滅菌結束后,先后關閉排蒸汽閥、進蒸汽閥。3 .全開過濾器后端隔離閥,微開過濾器蒸汽排放閥、過濾器進蒸汽閥,對過濾器及管路進行滅菌,每隔一段時間需打開過濾器下端排污閥排放過濾器殼內冷凝水,通過調節(jié)進出蒸汽流量的大

6、小將過濾器殼內壓力維持在0.11MPa左右。滅菌時間一般10分鐘。過濾器滅菌結束后,同時關閉過濾器后端隔離閥、過濾器進蒸汽閥,關閉閥門時過濾器殼內壓力不允許跌到0,然后開啟過濾器前端隔離閥通入空氣,過濾器殼內壓力在0.10MPa左右后,關閉過濾器前端隔離閥,將過濾器段保壓。需注意,因過濾器殼與管路降溫時,內部壓力也會損失,因此在壓力損失后通入空氣以便維持其保壓壓力。4 .在種子罐溫度上升期間,要打開啟尾氣調節(jié)閥排放罐內冷空氣然后關閉。當罐內溫度升到90c時,打開取樣進蒸汽閥和取樣閥,使蒸汽從取樣閥進入罐內,并打開進氣路進蒸汽閥,先將進氣路進蒸汽閥到過濾器蒸汽排放閥問那段管路滅透后,關閉過濾器蒸

7、汽排放閥,打開進氣隔膜閥,使蒸汽從空氣管路進入罐內。5 .當溫度達到設定滅菌溫度121c后,通過調節(jié)取樣進蒸汽閥、進氣路進蒸汽閥、尾氣調節(jié)閥的開度,使罐壓保持在0.11MPa及滅菌溫度121C。夾套進蒸汽閥可以根據(jù)蒸汽情況微開或關閉,夾套排污閥一定要開著。注意:尾氣調節(jié)閥不能全部關閉,以保證蒸汽流通,達到有效滅菌。6 .當罐溫達到121c后,滅菌倒計時開始。此時可對種子罐接種管、移種補料管(3000L罐)進行滅菌操作。對于種子罐接種管可全開罐體端隔離閥,微開排放閥對管路進彳T滅菌,滅菌時間30分鐘。7 .當?shù)褂嫊r為0時,程序自動將滅菌開關關閉,滅菌結束。先關閉取樣閥、取樣進蒸汽閥,再關閉進氣路

8、進蒸汽閥,全開過濾器前后端隔離閥,將空氣通入罐內。(注意:此操作時需保持過濾器處壓力高于罐體壓力)調節(jié)尾氣調節(jié)閥,使罐壓始終高于大氣壓。檢查所有進蒸汽閥是否關閉。注意:實罐滅菌過程保證罐壓始終處于正壓狀態(tài),否則會染菌。8.關閉夾套排污閥,打開夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,進冷水對罐體進行降溫。彳f罐溫低于100c后,關閉夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,打開自控進水隔離閥、回水閥。系統(tǒng)進入發(fā)酵控制狀態(tài):按工藝要求設置控制參數(shù),打開發(fā)酵開關,各單項控制開關,如溫度控制開關、轉速控制開關等進入發(fā)酵正常運行。1 .首先排夾套水,關閉所有閥門。然后先后打開夾套排污閥、夾套進蒸汽閥夾套開始進蒸汽對罐體進行預

9、熱。2 .微開取樣排蒸汽閥、取樣進蒸汽閥,對取樣管路進行滅菌。滅菌時間一般3 10分鐘。取樣管路滅菌結束后,先后關閉排蒸汽閥、進蒸汽閥.全開過濾器后端隔離閥,微開過濾器蒸汽排放閥、過濾器進蒸汽閥,對過濾器及管路進行滅菌,每隔一段時間需打開過濾器下端排污閥排放過濾器殼內冷凝水,通過調節(jié)進出蒸汽流量的大小將過濾器殼內壓力維持在0.11MP*右。滅菌時間一般10分鐘。過濾器滅菌結束后,同時關閉過濾器后端隔離閥、過濾器進蒸汽閥,關閉閥門時過濾器殼內壓力不允許跌到0,然后開啟過濾器前端隔離閥通入空氣,過濾器殼內壓力在0.10MPa左右后,關閉過濾器前端隔離閥,將過濾器段保壓。需注意,因過濾器殼與管路降溫

10、時,內部壓力也會損失,因此在壓力損失后通入空氣以便維持其保壓壓力。4 .在發(fā)酵罐罐溫度上升期間,要打開啟尾氣調節(jié)閥排放罐內冷空氣然后關閉。當罐內溫度升到90c時,打開放料進蒸汽閥和放料閥,使蒸汽從放料閥進入罐內,并打開進氣路進蒸汽閥,先將進氣路進蒸汽閥到過濾器蒸汽排放閥間那段管路滅透后,關閉過濾器蒸汽排放閥,打開進氣隔膜閥,使蒸汽從空氣管路進入罐內。5 .當溫度達到設定滅菌溫度121c后,通過調節(jié)放料進蒸汽閥、進氣路進蒸汽閥、尾氣調節(jié)閥的開度,使罐壓保持在0.11MPa及滅菌溫度121C。夾套進蒸汽閥可以根據(jù)蒸汽情況微開或關閉,夾套排污閥一定要開著。注意:尾氣調節(jié)閥不能全部關閉,以保證蒸汽流通

11、,達到有效滅菌。6 .當罐溫達到121c后,滅菌倒計時開始。此時可對發(fā)酵罐移種補料管及補堿管道(3000L罐)進行滅菌操作。打全開移種管道、補料管道及補堿管道閥門,微開移種管道、補料管道及補堿管道的排蒸汽閥門,滅菌30分鐘。7 .當?shù)褂嫊r為0時,程序自動將滅菌開關關閉,滅菌結束。先關閉放料閥、放料進蒸汽閥,再關閉進氣路進蒸汽閥,全開過濾器前后端隔離閥,將空氣通入罐內。(注意:此操作時需保持過濾器處壓力高于罐體壓力)調節(jié)尾氣調節(jié)閥,使罐壓始終高于大氣壓。檢查所有進蒸汽閥是否關閉。注意:實罐滅菌過程保證罐壓始終處于正壓狀態(tài),否則會染菌。8 .關閉夾套排污閥,打開夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,進冷水

12、對罐體進行降溫。待罐溫低于100c后,關閉夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,打開自控進水隔離閥、回水閥。系統(tǒng)進入發(fā)酵控制狀態(tài):按工藝要求設置控制參數(shù),打開發(fā)酵開關,各單項控制開關,如溫度控制開關、轉速控制開關等進入發(fā)酵正常運行。1 三.補料罐滅菌.首先排夾套水,關閉所有閥門。然后先后打開夾套排污閥、夾套進蒸汽閥。夾套開始進蒸汽對罐體進行預熱。2 .微開取樣排蒸汽閥、取樣進蒸汽閥,對取樣管路進行滅菌。滅菌時間一般10分鐘。取樣管路滅菌結束后,先后關閉排蒸汽閥、進蒸汽閥。3 .全開過濾器后端隔離閥,微開過濾器蒸汽排放閥、過濾器進蒸汽閥,對過濾器及管路進行滅菌,每隔一段時間需打開過濾器下端排污閥排放過濾

13、器殼內冷凝水,通過調節(jié)進出蒸汽流量的大小將過濾器殼內壓力維持在0.11MP*右。滅菌時間一般10分鐘。過濾器滅菌結束后,同時關閉過濾器后端隔離閥、過濾器進蒸汽閥,關閉閥門時過濾器殼內壓力不允許跌到0,然后開啟過濾器前端隔離閥通入空氣,過濾器殼內壓力在0.10MPa左右后,關閉過濾器前端隔離閥,將過濾器段保壓。需注意,因過濾器殼與管路降溫時,內部壓力也會損失,因此在壓力損失后通入空氣以便維持其保壓壓力。4 .在補料罐溫度上升期間,要打開啟尾氣調節(jié)閥排放罐內冷空氣然后關閉。當罐內溫度升到90c時,打開取樣進蒸汽閥和取樣閥,使蒸汽從取樣閥進入罐內,并打開進氣路進蒸汽閥,先將進氣路進蒸汽閥到過濾器蒸汽

14、排放閥間那段管路滅透后,關閉過濾器蒸汽排放閥,打開進氣隔膜閥,使蒸汽從空氣管路進入罐內。5 .當溫度達到設定滅菌溫度121c后,通過調節(jié)取樣進蒸汽閥、進氣路進蒸汽閥、尾氣調節(jié)閥的開度,使罐壓保持在0.11MPa及滅菌溫度121C。夾套進蒸汽閥可以根據(jù)蒸汽情況微開或關閉,夾套排污閥一定要開著。注意:尾氣調節(jié)閥不能全部關閉,以保證蒸汽流通,達到有效滅菌。6 .當罐溫達到121c后,滅菌倒計時開始。滅菌時間30分鐘。當?shù)褂嫊r為0時,程序自動將滅菌開關關閉,滅菌結束。先關閉取樣閥、取樣進蒸汽閥,再關閉進氣路進蒸汽閥,全開過濾器前后端隔離閥,將空氣通入罐內。(注意:此操作時需保持過濾器處壓力高于罐體壓力

15、)調節(jié)尾氣調節(jié)閥,使罐壓始終高于大氣壓。檢查所有進蒸汽閥是否關閉。注意:實罐滅菌過程保證罐壓始終處于正壓狀態(tài),否則會染菌。7 .關閉夾套排污閥,打開夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,進冷水對罐體進行降溫。降至一定溫度后為發(fā)酵罐的補料做準備。1 .首先排夾套水,關閉所有閥門。然后先后打開夾套排污閥、夾套進蒸汽閥。夾套開始進蒸汽對罐體進行預熱。2 .微開取樣排蒸汽閥、取樣進蒸汽閥,對取樣管路進行滅菌。滅菌時間一般10分鐘。取樣管路滅菌結束后,先后關閉排蒸汽閥、進蒸汽閥。3 .全開過濾器后端隔離閥,微開過濾器蒸汽排放閥、過濾器進蒸汽閥,對過濾器及管路進行滅菌,每隔一段時間需打開過濾器下端排污閥排放過濾器

16、殼內冷凝水,通過調節(jié)進出蒸汽流量的大小將過濾器殼內壓力維持在0.11MP*右。滅菌時間一般10分鐘。過濾器滅菌結束后,同時關閉過濾器后端隔離閥、過濾器進蒸汽閥,關閉閥門時過濾器殼內壓力不允許跌到0,然后開啟過濾器前端隔離閥通入空氣,過濾器殼內壓力在0.10MPa左右后,關閉過濾器前端隔離閥,將過濾器段保壓。需注意,因過濾器殼與管路降溫時,內部壓力也會損失,因此在壓力損失后通入空氣以便維持其保壓壓力。4 .在堿罐溫度上升期間,要打開啟尾氣調節(jié)閥排放罐內冷空氣然后關閉。當罐內溫度升到90c時,打開取樣進蒸汽閥和取樣閥,使蒸汽從取樣閥進入罐內,并打開進氣路進蒸汽閥,先將進氣路進蒸汽閥到過濾器蒸汽排放

17、閥問那段管路滅透后,關閉過濾器蒸汽排放閥,打開進氣隔膜閥,使蒸汽從空氣管路進入罐內。5 .當溫度達到設定滅菌溫度121c后,通過調節(jié)取樣進蒸汽閥、進氣路進蒸汽閥、尾氣調節(jié)閥的開度,使罐壓保持在0.11MPa及滅菌溫度121C。夾套進蒸汽閥可以根據(jù)蒸汽情況微開或關閉,夾套排污閥一定要開著。注意:尾氣調節(jié)閥不能全部關閉,以保證蒸汽流通,達到有效滅菌。6 .關閉夾套排污閥,打開夾套排水閥、夾套手動進冷水閥,進冷水對罐體進行降溫。降至一定溫度后為發(fā)酵罐的補堿做準備。五.配料罐操作規(guī)程1 .在配料之前應確保配料罐里面干凈,并關閉配料罐底閥和排污閥門。2 .加料進配料罐后,打開罐頂?shù)乃y進水溶料,然后定容

18、。最后打開配料罐攪拌機充分攪拌培養(yǎng)基0.打開底閥,啟動料泵,然后根據(jù)要求打開大料管道閥門為發(fā)酵罐打基礎培養(yǎng)基?;A培養(yǎng)基打完后停料泵,關閉配料罐底閥和打料管道閥門。3 .清洗配料罐。六.儲罐操作規(guī)程1 .在打發(fā)酵液過來之前要保證儲罐干凈,關閉儲罐底閥和排污閥門。2 .打開發(fā)酵罐的放料閥門、打開發(fā)酵罐至儲罐管道閥門,利用發(fā)酵罐與儲罐的壓力差將發(fā)酵液輸送至儲罐。3 .打開儲罐至離心機之間閥門,利用儲罐與離心機間高度差將發(fā)酵液輸送至離心機離心。4 .發(fā)酵液離心完成后儲罐要清洗。七.PH電極校正、安裝與保養(yǎng)1. 在主菜單中點擊電極校正按鈕,選擇要校正的PH電極,點擊校正,則進入相應的校正界面。打開PH

19、校正開關。(總開關必須處于關閉狀態(tài))設置一號標準液和二號標準液的值,不必考慮大小順序。第一步:設置一號標準液和二號標準液的值,不必考慮大小順序。第二步:將PH電極放入一號標準液里,觀察屏幕右上角的反饋電壓的數(shù)據(jù),當數(shù)值基本穩(wěn)定后,點擊一號采集電壓后面的開關進行電壓采集。第三步:將PH電極取出,用蒸儲水洗凈擦干后放入二號標準液里,觀察屏幕右上角的反饋數(shù)據(jù),當數(shù)值基本穩(wěn)定后,點擊二號采集電壓后面的開關進行電壓采集。第四步:點擊計算后的開關,則PH電極離線校正完畢。2. PH電極的在線校正:待實罐滅菌完畢,各控制參數(shù)都控制到設定值,接種前后(一般大罐宜在接種后馬上進行),還需進行一次在線校正(直接在

20、發(fā)酵界面調出在線校正界面)。方法如下:第一步:對罐內培養(yǎng)液取樣;第二步:用臺式酸度計測定培養(yǎng)液的PH值;第三步:將臺式酸度計測得的PHffi輸入到實測PH值后,點擊確定按鈕。至此,PH電極校正完畢。PH電極平時不使用,可以浸泡在3mol/L的kcl溶液或飽和kcl溶液中,嚴格禁止將電極浸泡在蒸儲水,去離子水或自來水等離子含量極少的液體中。如果PH電極長期干放而暴露在空氣中,在重新使用之前,請先將電極浸泡在3mol/L的kcl溶液或飽和kcl溶液中2-3天,使電極恢復活性,如果有條件,請先將電極浸泡在9895電極再生液中1分鐘左右,再用蒸儲水洗干凈,然后浸泡在3mol/L的kcl或飽和kcl溶液

21、中至少1天才能使用。如果PH電極被無機物質污染可以用0.1mol/L的Hcl或NaOH清洗數(shù)分鐘,然后再用蒸儲水洗干凈。如果PH電極被有機物質污染,可以用酒精或丙酮清洗,然后再用蒸儲水洗干凈。PH電極上端和電纜線相連接處的接頭是高阻抗部件,禁止用水等液體浸泡或蒸汽等潮濕空氣侵蝕,可以用新電極所帶的紅色小螺帽蓋住,電極電纜的接頭也屬于高阻抗部件,嚴禁用水等液體浸泡或蒸汽等潮濕空氣侵蝕,一定要存放在干燥處1 八.DO電極校正、安裝與保養(yǎng).在主菜單中點擊電極校正按鈕,選擇要校正的DO電極,點擊校正,則進入相應的校正界面。打開DO校正開關。(總開關必須處于關閉狀態(tài))設置一號標準液和二號標準液的值,不必考慮大小順序。第一步:設置一號標準液和二號標準液的值,一個為0值,另一個為100。其中0值對應的是飽和亞硫酸鈉標定值,100值對應為DO電極在空氣中標定值。第二步:將DO電極放入一號標準液里,觀察屏幕右上角的反饋電壓的數(shù)據(jù),當數(shù)值基本穩(wěn)定后,點擊一號采集電壓后面的開關進行電壓采集。第三步:將DO電極取出,用蒸儲水洗凈擦干后放入二號標準液里,觀察屏幕右上角的反饋數(shù)據(jù),當數(shù)值基本穩(wěn)定后,點擊二號采集電壓后面的開關進行電壓采集。第四步:點擊計

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