農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素分析

1、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素分析目前，對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中藥物殘留的檢測(cè)已經(jīng)成為監(jiān)控農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全狀況、保障人民身體健康的重要手段和必要措施。自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速聯(lián)合檢測(cè)使用的是酶抑制率法，具有檢測(cè)速度快、成本低、操作簡(jiǎn)單、對(duì)檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低等特點(diǎn)。但是，它對(duì)生化反應(yīng)條件要求嚴(yán)格，在檢測(cè)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)各種影響因素，致使檢測(cè)同一批次的蔬菜樣品重現(xiàn)性不好，直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。我們總結(jié)出部分影響因素，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。1農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法原理農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲的中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶(AchE)的活性，造成神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽

2、堿(Ach)的積累，影響正常傳導(dǎo)，致使昆蟲中毒死亡這一毒理學(xué)原理對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法只限于檢測(cè)蔬菜和水果中的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒。在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。2農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響因素2.1檢測(cè)試劑對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)要用到的試劑主要有：緩沖液(提取液)、酶(乙酰膽堿酯酶)

3、、底物、顯色劑。除緩沖液外，其他試劑在儲(chǔ)藏過(guò)程中必須在05溫度條件下，以確保酶的活性。配制緩沖液時(shí)，一定要用蒸餾水或去離子水，不可使用含有礦物質(zhì)的水，否則對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性干擾較大。乙酰膽堿酯酶對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響：溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)降低酶的活性，而酶活性的降低會(huì)影響測(cè)量的準(zhǔn)確性，最佳的測(cè)量溫度應(yīng)在2040。檢測(cè)室溫度在2030時(shí)，可以直接將乙酰膽堿酯酶在室溫下培養(yǎng)，如果室溫低于20，必須在2535的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.2樣品前處理對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響樣品前處理要求切成1cm見(jiàn)方的碎片，不能切的太小，否則有些蔬菜中大量的葉綠素溶到緩沖液中，干擾檢測(cè)結(jié)果。對(duì)一些葉綠素較高的蔬菜(如菠菜、結(jié)球甘藍(lán)等)可以采

4、用整株蔬菜浸提，減少色素干擾；對(duì)切開(kāi)后易氧化的蔬菜水果(如茄子、蘋果等)也可采取整體或大塊放人浸提，減少干擾；還有一些蔬菜會(huì)產(chǎn)生次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，對(duì)這類蔬菜(如蔥、韭菜、香菜等)可采取整株(體)浸提。2.3檢測(cè)儀器對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響檢測(cè)儀器調(diào)試的影響：分光度計(jì)要經(jīng)常進(jìn)行校正，如連續(xù)做幾個(gè)批次后，可能由于環(huán)境溫度等條件的不同，要重新進(jìn)行調(diào)100和做對(duì)照，也可以每個(gè)批次都進(jìn)行調(diào)100和做對(duì)照，以確保測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度。比色皿的影響：比色皿良好的透光度是減少檢測(cè)誤差的必要條件，因此，定期用乙醇清洗比色皿，在樣品檢測(cè)前用擦鏡紙對(duì)比色皿的兩個(gè)透光面進(jìn)行擦拭。使用比色皿時(shí)，兩個(gè)透光面要完全平行，并垂直

5、置于比色皿架中，以保證在測(cè)量時(shí)，入射光垂直于透光面，避免光的反射損失，保證光程固定。比色皿在使用后，立即用水沖洗干凈。沖洗后不宜立即使用，應(yīng)倒置在濾紙上晾干后再使用。微量移液器的影響：微量移液器要專用，貼上標(biāo)簽。避免交叉使用造成實(shí)際污染；試劑從試劑瓶中吸出后，不能再放回瓶中，防止試劑污染。2.4檢測(cè)員的操作對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響樣品在加入緩沖液(提取液)后，需要震蕩搖勻12分鐘，但是震蕩不能太劇烈，否則會(huì)使樣品搖爛，使緩沖液中的蔬菜色素增多，影響分光光度計(jì)的測(cè)量。檢測(cè)員在使用移液器，在吸取時(shí)輕按至第一停點(diǎn)，將吸頭沒(méi)人試劑液面下23mm，輕緩松開(kāi)按鈕回原點(diǎn)，慢慢提出吸頭并在容器壁上?？恳幌拢匀コ嘤?/p>

6、試劑，輕按按鈕至第一停點(diǎn)，排出液體，稍停片刻按至第二停點(diǎn)，排空吸頭，以確保液體準(zhǔn)確性。加試劑時(shí)，移液器要保持垂直；吸頭有試劑時(shí)，移液器不能平放或者倒置，避免污染移液器，進(jìn)而污染其他試劑和樣品。待測(cè)樣品加入底物后，應(yīng)該馬上搖勻，放入儀器檢測(cè)，否則影響結(jié)果準(zhǔn)確性。比如在白菜的測(cè)試中，立刻放入檢測(cè)的抑制率是18.6，在延遲1分鐘后放入檢測(cè)抑制率78.4，可見(jiàn)，加試劑后放入檢測(cè)的速度快慢對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性影響很大。同時(shí)，要確保同一組樣品放入時(shí)間和對(duì)照放入的時(shí)間一致，這個(gè)直接影響到檢測(cè)結(jié)果。2.5試驗(yàn)參數(shù)準(zhǔn)確性對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響空白對(duì)照吸光度變化A0值：樣品的檢測(cè)結(jié)果是通過(guò)抑制率來(lái)反應(yīng)，抑制率()=(A0A

7、x)A0100，通過(guò)公式可以看出，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和A0值準(zhǔn)確度有密切關(guān)系。吸光度變化A0值一般由于試劑廠商、環(huán)境溫度條件、測(cè)試儀器、酶的活性等條件的不同而有變化，一般認(rèn)為A0在0.30.9是正常的。當(dāng)A00.3時(shí)，說(shuō)明酶的活性不夠或者溫度太低，這種情況下在加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，或者提前把試劑盒放在室溫下或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，提高酶的活性。當(dāng)A0)0.9時(shí)，說(shuō)明乙酰膽堿酯酶對(duì)底物的水解反應(yīng)速度過(guò)快，這種情況可以把測(cè)試時(shí)間縮短為23分鐘，以確保對(duì)照的A0的準(zhǔn)確性。測(cè)試時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響：乙酰膽堿酯酶對(duì)底物的水解反應(yīng)是一個(gè)漸進(jìn)的過(guò)程，一般而言，只要時(shí)間足夠長(zhǎng)，酶就能將底物完全水解，從而使吸光度達(dá)到最大值。樣品的吸光度值隨著反應(yīng)時(shí)間逐漸增加，在初始階段吸光度值增加較快，反應(yīng)5分鐘時(shí)，吸光度就達(dá)到80左右。說(shuō)明這段水解反應(yīng)速度快，在后期，吸光度值變化緩慢，9分鐘后吸光度值基本不變，表明酶的水解反應(yīng)基本結(jié)束，吸光度達(dá)到了最大值。宜