6苛養(yǎng)菌分離鑒定與藥敏周庭銀

1、第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院 周庭銀周庭銀 乏氧菌屬乏氧菌屬顆粒鏈菌屬顆粒鏈菌屬心桿菌屬心桿菌屬放線桿菌屬放線桿菌屬弗朗菌屬弗朗菌屬二氧化碳嗜纖維菌二氧化碳嗜纖維菌嗜血桿菌屬嗜血桿菌屬布魯菌屬布魯菌屬 什么叫苛養(yǎng)菌？ 營養(yǎng)要求高、生長緩慢（數(shù)日甚至數(shù)周） 苛養(yǎng)菌包括哪些？ “HACEK”細(xì)菌群及其它 “H”嗜血桿菌屬 （Haemophilus）、“A”凝聚桿菌屬（Aggregatibacter）、“C”心桿菌屬（Cardiobacterium）、“E”艾肯菌屬（Eikenella）、“K”金氏桿菌屬（Kimgella） 其它：布魯菌屬 、巴斯德菌屬 、西絲菌屬 、阿菲波菌屬 、鮑特

2、菌屬 、加特納菌屬 、軍團(tuán)菌屬 、巴爾通體屬 、鏈桿菌屬、薩頓菌屬等。一 如何發(fā)現(xiàn)血培養(yǎng)中的苛養(yǎng)菌株如何發(fā)現(xiàn)血培養(yǎng)中的苛養(yǎng)菌株（一）儀器報(bào)警：（一）儀器報(bào)警：1.涂片查見細(xì)菌，平板不生長。2.革蘭染色涂片未查見細(xì)菌，轉(zhuǎn)種平板，24h不生長,認(rèn)為是假陽性？3.涂片查見細(xì)菌，平板生長，常規(guī)法不能鑒定。1. 1. 血培養(yǎng)瓶涂片查見細(xì)菌，平板不生長。血培養(yǎng)瓶涂片查見細(xì)菌，平板不生長。2. 2. 為為什么什么？ 怎么辦怎么辦？ 添加營養(yǎng)成分和特殊生長因子 血培養(yǎng)瓶內(nèi)？多種成分血培養(yǎng)瓶內(nèi)？多種成分 血平板只有？種成分血平板只有？種成分 某些細(xì)菌生長需要的高營養(yǎng)和特殊生長因子某些細(xì)菌生長需要的高營養(yǎng)和特殊生

3、長因子 因此？因此？需要特殊生長因子 革蘭陽性球菌 維生素B6、半胱氨酸及營養(yǎng)成分 衛(wèi)星試驗(yàn) （一）儀器報(bào)警（一）儀器報(bào)警（一）儀器報(bào)警（一）儀器報(bào)警營養(yǎng)要求高營養(yǎng)要求高以上方法還不能培養(yǎng)出細(xì)菌以上方法還不能培養(yǎng)出細(xì)菌革蘭陽性球菌、陰性桿菌未使用過血培養(yǎng)瓶肉湯XXml,瓊脂粉， 加入1ml羊血或人血 ？ 制成平板 血流感染實(shí)驗(yàn)診斷與臨床診治第三版2014.5P173(三)血培養(yǎng)瓶陽性報(bào)警革蘭染色涂片找不到細(xì)菌，為什么？血培養(yǎng)瓶陽性報(bào)警革蘭染色涂片找不到細(xì)菌，為什么？怎么辦？怎么辦？ 陽性報(bào)警，涂片陽性報(bào)警，涂片革蘭染色？革蘭染色？未查見細(xì)菌，轉(zhuǎn)種未查見細(xì)菌，轉(zhuǎn)種平板（平板（2424、4848、

4、72h72h不生長），是否不生長），是否假陽性假陽性（一）儀器報(bào)警（一）儀器報(bào)警 因?yàn)槟承┘?xì)菌與細(xì)胞殘?jiān)驗(yàn)槟承┘?xì)菌與細(xì)胞殘?jiān)?？混在一起，不易辨別，混在一起，不易辨別， 如果血培養(yǎng)陽性報(bào)警（如果血培養(yǎng)陽性報(bào)警（兩張兩張）革蘭染色未查見細(xì)菌，）革蘭染色未查見細(xì)菌，用瑞氏染色用瑞氏染色？血流感染實(shí)驗(yàn)診斷與臨床診治第三血流感染實(shí)驗(yàn)診斷與臨床診治第三版版2014.52014.5P117P117（一）儀器報(bào)警（一）儀器報(bào)警二、幾種苛養(yǎng)菌的鑒定二、幾種苛養(yǎng)菌的鑒定 涂片革蘭染色，鏡下可見革蘭陽性球菌第一種菌第一種菌接種在血瓊脂平板和巧克力平板上5%CO2，1824h不生長 48h仍不生長怎么辦再用無菌注射

5、器從培養(yǎng)瓶取培養(yǎng)物23滴在血瓊脂平板上四區(qū)劃線，然后用金葡菌點(diǎn)種，5%CO2，35孵育1824h 上機(jī)鑒定上機(jī)鑒定？菌？菌MALDI-TOF MALDI-TOF 毗鄰顆粒鏈菌毗鄰顆粒鏈菌金葡菌周圍細(xì)菌傳代后，24h24h不需金葡點(diǎn)種，生長良好上機(jī)鑒定上機(jī)鑒定 毗鄰顆粒鏈菌毗鄰顆粒鏈菌 毗鄰顆粒鏈菌屬毗鄰顆粒鏈菌屬 毗鄰顆粒鏈菌細(xì)長顆粒鏈菌副毗鄰顆粒鏈菌豹鯨顆粒鏈菌1.與流感嗜血桿菌的鑒別 兩者都有衛(wèi)星現(xiàn)象”，可區(qū)別于其他觸酶陰性、革蘭陽性球菌。流感是革蘭陰性球桿菌2.血培養(yǎng)瓶陽性報(bào)警后涂片見到革蘭陽性球菌，？但轉(zhuǎn)種血瓊脂平板和巧克力平板未見細(xì)菌生長，應(yīng)首先考慮乏養(yǎng)菌屬和顆粒鏈菌屬的感染。3.與

6、其他鏈球菌的鑒別某些毗鄰顆粒鏈菌在未添加吡哆醛的普通血瓊脂平板上仍然生長或不出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象，很容易被鑒定為其他鏈球菌,應(yīng)引起注意毗鄰顆粒鏈菌毗鄰顆粒鏈菌小結(jié)毗鄰顆粒鏈菌毗鄰顆粒鏈菌 需要衛(wèi)星試驗(yàn)不需要衛(wèi)星試驗(yàn) 金葡菌周圍的菌落24h傳代后不需要金葡點(diǎn)種也生長良好第二種菌第二種菌血平板上的菌落特征： 5 CO2環(huán)境35培養(yǎng)1824h，菌落呈細(xì)小，甚至看不見24日后逐漸長大，可嵌入瓊脂，有較弱的溶血環(huán)。有的菌落黏附于瓊脂培養(yǎng)基(咬瓊脂現(xiàn)象)。血瓊脂平板上的菌落通常為灰白色、粉紅色或黃色。麥康凱瓊脂上不生長。48小時(shí)菌落革蘭陰性、細(xì)長的桿菌？ 生化特性氧化酶試驗(yàn)陰性，分解葡萄糖和蔗糖，分解乳糖不定，不

7、分解木糖和蜜二糖；水解淀粉，ONPG、七葉苷陽性；硝酸鹽、觸酶、吲哚、賴氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶試驗(yàn)均為陰性 上機(jī)鑒定 二氧化碳嗜纖維菌屬？ MALDI-TOF： 生痰二氧化碳嗜纖維菌 測(cè)序： 生痰二氧化碳嗜纖維菌 二氧化碳嗜纖維菌屬二氧化碳嗜纖維菌屬黃褐二氧化碳嗜纖維菌 生痰二氧化碳嗜纖維菌 牙齦二氧化碳嗜纖維菌顆粒二氧化碳嗜纖維菌溶血二氧化碳嗜纖維菌狗咬二氧化碳嗜纖維菌犬咬二氧化碳嗜纖維菌小結(jié)小結(jié)革蘭陰性桿菌細(xì)長，與梭桿菌十分相似？厭氧瓶？陽性瓶涂片革蘭染色不太容易找到細(xì)菌，瑞氏 在血平板上1824小時(shí)培養(yǎng)見不到菌落？48h屬于革蘭陰性苛養(yǎng)菌？，血平板生長，麥康凱上不生長氧化酶試驗(yàn)陰性，

8、分解葡萄糖，乳糖不定病例討論：病例討論： 楊某，女，45歲，2011.11中旬發(fā)熱，體溫40.5 C。11.22就診于上海某大醫(yī)院，以“發(fā)熱待查”收入感染科。 血常規(guī)血常規(guī)WBCWBC：3.903.90* *109/L E109/L E：0.0% Hb:101g/L;；ESR：24mm/h；CRPCRP：22.2mg/L 22.2mg/L ； 多次血培養(yǎng)：未見細(xì)菌生長。脾臟明顯增大脾臟明顯增大,診斷為“傷寒”，靜脈滴注左氧氟沙星（可樂必妥）500mg qd，1周后體溫降至正常。于12月6日出院后繼續(xù)口服左氧氟沙星（可樂必妥）500mg qd數(shù)日停藥。討論：討論：1.多次血培養(yǎng)：未見細(xì)菌生長。

9、靜滴左氧氟沙星一周后體溫正常,能否確診為”傷寒”?2.CRP:22.2mg/L,白細(xì)胞低,體溫升高至40.5 C,無感冒癥狀,脾臟明顯增大脾臟明顯增大，疑似何種疾病?需要進(jìn)一步做哪些檢查？第三種菌第三種菌病例續(xù)病例續(xù) ： 患者于2012.2上旬再次出現(xiàn)發(fā)熱再次出現(xiàn)發(fā)熱，體溫41.0 C，伴大汗浸濕衣被。2.11出現(xiàn)右側(cè)髖關(guān)節(jié)疼痛伴活動(dòng)障礙，2.15感右上臂疼痛，可觸及一包塊。 2012.2.21來長征醫(yī)院住院，體溫體溫39.239.2。WBC:5.7WBC:5.7* *109/L 109/L N：68.3% M：8.8% E：0.2%；ESR：73mm/h；CRPCRP：70.10mg/L70

10、.10mg/L。當(dāng)日上午行血培養(yǎng)。2.25血培養(yǎng)儀器報(bào)警（4 4日后）日后），涂片革蘭染色見圖： 外院 多次血培養(yǎng)：未見細(xì)菌生長同時(shí)轉(zhuǎn)種血平板，革蘭染色。24小時(shí)未見細(xì)菌生長該如何處理？是否排除感染？是假陽性？瑞氏染色：培養(yǎng)48h48h后針尖樣菌落，72h72h后漸增大VITEK 2 Compact微生物鑒定儀鑒定為布氏桿菌。2月27日抽血送上海市疾控中心查抗布氏桿菌抗體陽性(1:400)。給予利福平450mg+多西環(huán)素100mg 1/日，一星期后體溫正常。一周后體溫正常能否判斷治愈？據(jù)了解該病人是上海某公司女總經(jīng)理，為什么會(huì)患上布氏桿菌??？該病人最喜愛吃涮羊肉，且越嫩越生才過癮。第四種菌第四

11、種菌外院的標(biāo)本外院的標(biāo)本上機(jī)鑒定為甲基桿菌（t=0.996）接種血平板，麥康凱麥康凱不長血平板用GN板條上機(jī)鑒定為甲基桿菌（t=0.996）？這個(gè)鑒定結(jié)果可信度如何？涂片形態(tài)發(fā)現(xiàn)與甲基桿菌不符，加做巧克力平板，生長較快。，加做巧克力平板，生長較快。24h24h培養(yǎng)后培養(yǎng)后出現(xiàn)很像？補(bǔ)做衛(wèi)星現(xiàn)象出現(xiàn)很像？補(bǔ)做衛(wèi)星現(xiàn)象麥康凱不長血平板用NH板條:流感嗜血桿菌MALDI-TOF鑒定:流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌誤報(bào)為甲基桿菌，為什么？由于檢驗(yàn)人員缺乏經(jīng)驗(yàn)，在鏡下查見革蘭陰性小球桿菌，沒有懷疑流感嗜血桿菌、布魯菌等細(xì)菌，僅接種血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板。（板條？（板條？NHNH） 鑒定為甲基桿菌后，沒有及

12、時(shí)與臨床溝通（甲基桿菌引起血流感染十分罕見）。少見菌檢出后，一定要重復(fù)檢驗(yàn)，不能完全相信機(jī)器。流感嗜血桿菌也有在血平板生長（罕見）陽性報(bào)警 規(guī)范規(guī)范 血瓊脂平板、普通巧克力、麥康凱瓊脂平板徐元宏 教授主任 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院羅燕萍 教授主任 解放軍總醫(yī)院劉文恩 教授主任 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院吳文娟 教授主任 上海同濟(jì)大學(xué)東方醫(yī)院南院趙建宏 教授主任 河北醫(yī)科大學(xué)附屬二院，河北省臨檢中心主任魏蓮花 教授主任 甘肅省人民醫(yī)院張莉萍 教授主任 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院趙玲莉 教授主任 青海大學(xué)附屬醫(yī)院徐修禮 主任技師 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院周鐵麗 教授主任 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心侯鐵英 主任醫(yī)師 主任 廣東省人民醫(yī)院 劉小平 主任技師 副主任 北京大學(xué)深圳醫(yī)院趙旺勝 主任技師