新的制品重點(diǎn)

1、1、名詞解釋：生物制品:指采用現(xiàn)代生物技術(shù)手段來人為的創(chuàng)造一些條件，借用某些微生物、植物或動(dòng)物體或利用生物體的某一組成部分,來生產(chǎn)某些初級(jí)或次級(jí)代謝產(chǎn)物，制成作診斷、治療、預(yù)防疾病或用于某種特殊醫(yī)學(xué)目的的醫(yī)藥用品。親和層析：大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，如酶與底物（或抑制劑）、抗原與抗體、激素與受體等，它們之間有特異的親合作用，利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱為親和層析?；蚬こ倘笔Щ钜呙纾菏侵笐?yīng)用基因操作技術(shù)，將病原微生物中與致病性有關(guān)的毒力基因序列除去或失活，使之成為無毒株或弱毒株，但仍保持有良好的免疫原性，從而制成的安全有效的疫苗。單克隆抗體：識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生

2、的均一性抗體，稱之為單克隆抗體。單域抗體：抗體結(jié)合抗原主要由V區(qū)決定，只含有V區(qū)基因片段表達(dá)的小分子抗體，即只有VH或VL一個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，也能保持原單克隆抗體的特異性。這種小分子就稱為單域抗體（single domain antibody）。雙特異性抗體：天然的抗體分子為雙價(jià)單特異性，如果對(duì)天然的抗體分子進(jìn)行改造，把其他的效應(yīng)物質(zhì)如毒素、酶、細(xì)胞因子、受體分子通過一定方法與兩種雜交抗體Fab片段或V區(qū)（VH與VL）連接起來，使之即可與靶細(xì)胞結(jié)合，又可介導(dǎo)其他一些效應(yīng)功能，從而最大限度地殺傷靶細(xì)胞。這種具有雙特異性的抗體分子就稱為雙特異性抗體或雙功能抗體。蛋白工程疫苗：蛋白工程疫苗是指將抗原基因

3、加以改造，使之發(fā)生點(diǎn)突變、插入、缺失、構(gòu)型改變，甚至進(jìn)行不同基因或部分結(jié)構(gòu)域的人工組合，以期達(dá)到增強(qiáng)其產(chǎn)物的免疫原性，擴(kuò)大反應(yīng)譜，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗。多糖蛋白結(jié)合疫苗：將多糖與載體蛋白共價(jià)連接，通過載體蛋白提供適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞表位，有T細(xì)胞協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生多糖特異性抗體，使T細(xì)胞非依賴性抗原轉(zhuǎn)變?yōu)門細(xì)胞依賴性抗原，這類菌苗稱為多糖蛋白結(jié)合苗。治療性疫苗：廣義治療性疫苗是指在已感染病原生物或患某些疾病的機(jī)體中，通過誘生機(jī)體的特異性或非特異性免疫應(yīng)答，以達(dá)到治療或防止疾病惡化的生物制品。腫瘤導(dǎo)向治療：2、生物制品行業(yè)重點(diǎn)發(fā)展方向？1）抗體與靶向治療藥物 創(chuàng)新藥物所占比例最大的也是現(xiàn)代生物藥，

4、而其中抗體藥物則獨(dú)占鰲頭，占了1/3的比例。在美國(guó)FDA批準(zhǔn)的抗體藥物中有四種超過40億美元，在G蛋白偶聯(lián)受體靶向藥物中，年銷售額超過2030億美元的就有20多種。目前這類藥物的研發(fā)重點(diǎn)是各類單抗藥，雙功能抗體藥、G蛋白偶聯(lián)受體的靶向藥物（即生物導(dǎo)彈）、小分子抗體或基因工程抗體等。2）疫苗類 疫苗從傳統(tǒng)的傳染病預(yù)防已擴(kuò)展到了關(guān)節(jié)炎、癌癥、心血管疾病、糖尿病、胃腸道疾病、高血壓、腎病、肥胖癥、氣管炎和哮喘等各領(lǐng)域疾病的預(yù)防和治療性疫苗。目前全球疫苗市場(chǎng)規(guī)模已超過220多億美元，僅我國(guó)就達(dá)16億美元，占7%。而且發(fā)展?jié)摿艽螅?）各種重組細(xì)胞因子、重組激素、血液制品4）診斷試劑與試劑盒5）氨基酸、

5、抗生素、藥物制劑6）特殊新型生物制品 如RNAi、Stem、基因治療、組織工程、生物芯片、生物信息等，正在興起，已經(jīng)進(jìn)入研究的熱點(diǎn)，相信，在不遠(yuǎn)的將來可能會(huì)有較好的開發(fā)應(yīng)用前景。3、傳統(tǒng)疫苗技術(shù)不能解決的問題？ 第一，用傳統(tǒng)方法很難獲得大量高純度的抗原供研究和生產(chǎn)，然而重組DNA工程可以提供無窮無盡的材料供試驗(yàn)，而且可以對(duì)大量的候選疫苗進(jìn)行反復(fù)的篩選。 第二，重組DNA技術(shù)使得對(duì)病原微生物的研究變得更加安全，因?yàn)檠芯康膶?duì)象是基因和它們的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，而不是能引起傳染病的致病微生物。 對(duì)于免疫保護(hù)機(jī)制不明確，有潛在致癌性或免疫病理作用，以及病原不能或難于培養(yǎng)的疫苗，使用傳統(tǒng)疫苗技術(shù)就很難研制成功。

6、 主要針對(duì)免疫效果差，副反應(yīng)大，成本較高和使用不方便的傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行改造。4、基因工程缺失活疫苗的優(yōu)點(diǎn)？有突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復(fù)；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。5、流感病毒的亞型分類（表面蛋白抗性）？ 根據(jù)流感病毒表面結(jié)構(gòu)蛋白血凝素（hemagglutinin，HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase，NA）兩抗原性的不同，將A型流感病毒分為不同的血清亞型。6、生物制品分離純化過程中技術(shù)的選擇優(yōu)先性。 應(yīng)選擇不同機(jī)制的分離單元來組成一套分離純化工藝，盡早采用高效的分離手段，先將含量最多的雜質(zhì)分離去除，將費(fèi)用最高、最費(fèi)時(shí)的分離單元放在最后階段。 即通常：先選用非特異、低

7、分辨的操作單元（如沉淀、超濾和吸附等），以盡快縮小樣品體積，提高產(chǎn)物濃度，去除最主要的雜質(zhì)（包括非蛋白類雜質(zhì)）；采用高分辨率的操作單元（如具有高選擇性的離子交換色譜和親和色譜）；凝膠排阻色譜這類分離規(guī)模小、分離速度慢的操作單元放在最后。7、乙型肝炎治療性疫苗策略，消除機(jī)理 策略： 在主動(dòng)免疫與被動(dòng)免疫中進(jìn)行了選擇。 主動(dòng)免疫的優(yōu)點(diǎn)為：注入有效的免疫原方法簡(jiǎn)單，安全性較高，通過調(diào)動(dòng)機(jī)體本身的免疫應(yīng)答，故有效持續(xù)的時(shí)間可較長(zhǎng)。其缺點(diǎn)為，如患者的免疫應(yīng)答普遍低下，則效果會(huì)較差。被動(dòng)免疫包括輸入經(jīng)細(xì)胞因子激活或改造的自身免疫細(xì)胞或輸入具有對(duì)HBsAg強(qiáng)免疫應(yīng)答的他人免疫細(xì)胞等。由于已證實(shí)被動(dòng)輸入抗HB

8、s僅能短暫使血清中的HBsAg滴度下降，并無治療作用，故不再考慮。 被動(dòng)免疫的操作復(fù)雜，選擇對(duì)象嚴(yán)格，需特別防止污染，醫(yī)療環(huán)境的要求高。鑒于慢性乙肝感染者不同于HIV感染者或腫瘤患者，一般具有對(duì)抗原刺激的正常應(yīng)答，僅為對(duì)HBsAg有免疫耐受，因此可定位于主動(dòng)免疫。 主動(dòng)免疫策略為：改變抗原組分，使機(jī)體從免疫耐受轉(zhuǎn)為識(shí)別抗原而產(chǎn)生免疫應(yīng)答；調(diào)節(jié)抗原提呈的方式或途徑，使機(jī)體對(duì)經(jīng)調(diào)節(jié)后提呈的HBsAg產(chǎn)生免疫應(yīng)答。消除機(jī)理（作用機(jī)制）：1）通過復(fù)合物中抗體的Fc段，與抗原提呈細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合，促進(jìn)了細(xì)胞攝取抗原。當(dāng)用酶消化去除抗HBs的Fc段，雖可形成抗原-抗體Fab段的復(fù)合物，但不能增強(qiáng)被巨

9、噬細(xì)胞所攝取。當(dāng)用異種動(dòng)物（如羊）的抗HBs組建復(fù)合物，因與鼠的巨噬細(xì)胞的Fc受體不相應(yīng)，也不能促進(jìn)抗原的攝入與提呈。2）抗原抗體復(fù)合物一旦與抗原呈細(xì)胞結(jié)合，可比單純抗原更有效地激活B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，激活T細(xì)胞增殖，釋放更多的-干擾素和IL-2，屬TH1類應(yīng)答。刺激B淋巴細(xì)胞成為抗體分泌細(xì)胞，復(fù)合物在正常小鼠中誘生的抗HBS較單純抗原誘生的抗體高10倍以上。從而引起強(qiáng)烈的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，能打破免疫耐受、重新喚起機(jī)體的免疫應(yīng)答，治療持續(xù)性慢性感染 。8、生物制品原料保存方法，重組蛋白類生物制品保存方法。 原料的保存方法主要有：冷凍法。該方法適用于所有生物原料。常用-40速凍。有

10、機(jī)溶劑脫水法。常用的有機(jī)溶劑是丙酮。該法適用于原料少而價(jià)值高、有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒有破壞作用的原料，如腦垂體等。防腐劑保鮮。常用乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液等。 重組蛋白質(zhì)：1）液態(tài)保存；A、低溫保存；B、超低溫保存；C、在穩(wěn)定PH條件下保存；D、高濃度保存；E、加保護(hù)劑保存；2）固態(tài)保存；9、基因工程活性肽藥物的應(yīng)用包括哪些方面？在體外和離體研究中作為細(xì)胞培養(yǎng)補(bǔ)充劑；作為基礎(chǔ)研究的對(duì)象；作為研究其他現(xiàn)象（如在免疫方面）的一種輔助劑；作為診斷劑；用于生物治療的研究與開發(fā)。10.蛋白質(zhì)類生物制品存在的非蛋白類雜質(zhì)包括哪些？ 病毒和細(xì)菌等微生物、熱原質(zhì)、內(nèi)毒素、致敏原及DNA

11、11.現(xiàn)代疫苗包括哪些？ 答：是一種利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)使用Ag通過誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)以予防和治療疾病或達(dá)到某種特定醫(yī)學(xué)目的的生物制劑。12.重組蛋白類生物制品鑒定方法酶聯(lián)免疫電泳方法：SDS-PAGE，等電點(diǎn)聚焦，免疫電泳免疫學(xué)分析方法：放免法（RIA），放射性免疫擴(kuò)散法（RID）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），免疫印漬（immunoblotting）受體結(jié)合試驗(yàn)（receptor binding）各種高效液相分析法（HPLC）肽圖分析法Edman N末端序列分析法圓二色譜（CD）核磁共振（NMR）13.院士首創(chuàng)的基因工程藥物是什么：-b型干擾素。14.新型疫苗的研究?jī)?nèi)容有哪些？15

12、、臨床上預(yù)防術(shù)后血管栓塞的生物制品 肝素 硫酸軟骨素16、艾滋病疫苗研制困難的原因？ HIV疫苗的研究進(jìn)展緩慢，主要原因是該病毒本身的生物學(xué)特點(diǎn)：1）基因變異率極高；2）抗HIV的保護(hù)性免疫機(jī)制尚未明確；3）缺乏研究HIV疫苗保護(hù)作用的適宜動(dòng)物模型；4）HIV常通過黏膜表面?zhèn)鞑?，需要建立黏膜免疫來預(yù)防病毒的性途徑傳播；5）病毒基因可整合至宿主細(xì)胞染色體中，造成潛伏感染；6）病毒可直接侵犯和破壞免疫系統(tǒng)。17、中和作用： 用于感染性疾病，使病原體或其產(chǎn)生的毒素喪失致病力。18、寄生蟲免疫逃避機(jī)制（記住這幾個(gè)字即可） 一些種群在進(jìn)化過程中獲得某些保護(hù)自己而不被宿主清除的功能，即所謂寄生蟲的免疫逃避

13、機(jī)制。19、特殊類型的基因工程的抗體雙特異性抗體；免疫黏連素；催化抗體。 20、小分子抗體Fab抗體：Fab抗體大小只有完整IgG的1/3單鏈抗體：其大小只為完整抗體的1/6單域抗體：其相對(duì)分子質(zhì)量?jī)H為完整抗體分子的1/12超變區(qū)多肽：只含有一個(gè)CDR多肽的抗體21、HAMA主要由抗體的 鼠單抗可變區(qū) 區(qū)域?qū)е隆?2、生物制品按分子大小的分離方法 按分子大小分離的方法：有離心、沉淀、超濾法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分離方法）、凝膠層析法（gel chromatography）、超速離心法（ultra centrifugation）等。其中膜分離法可用于

14、生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和脫鹽。23、生物制品分離純化方法要滿足哪些要求？1、根據(jù)產(chǎn)物表達(dá)形式來選擇2、根據(jù)分離單元之間的銜接選擇3、根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇（1）工藝條件應(yīng)溫和，保持產(chǎn)品生物活性；具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性：不受或少受發(fā)酵工藝、條件及原材料來源的影響，在任何環(huán)境下使用都應(yīng)具有重復(fù)性，明確需嚴(yán)格控制的步驟和技術(shù)（2）盡可能減少組成工藝的步驟：步驟越多，產(chǎn)品的后處理收率越低，但必須保證產(chǎn)品的質(zhì)量（3）組成工藝的各技術(shù)或步驟之間要相互適應(yīng)和協(xié)調(diào)（4）在工藝過程中要盡可能少用試劑，以免增加步驟，或干擾產(chǎn)品質(zhì)量（5）時(shí)間要盡可能短，因穩(wěn)定性差的產(chǎn)物隨工藝時(shí)間增加，生物活性收率會(huì)降低

15、，產(chǎn)品質(zhì)量會(huì)下降（6）必須高效、收率高、易操作，對(duì)設(shè)備條件要求低，能耗低（7）具有較高的安全性：藥品必須保證安全、無菌、無熱原、無污染24、理想菌苗的條件（1）安全，遺傳性狀穩(wěn)定，無毒性，無致癌性，無致畸變或致流產(chǎn)性。（2）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單清楚，可生物降解，有生物相容性，與組織抗原無免疫學(xué)交叉反應(yīng)。（3）對(duì)各年齡組人群均有長(zhǎng)時(shí)間的免疫保護(hù)作用。（4）多價(jià)，有更大的覆蓋面，最好一次性免疫。（5）能口服，能有效誘導(dǎo)粘膜免疫。（6）易于生產(chǎn)，儲(chǔ)存及服務(wù)，不需冷藏。25、核酸疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：易于制備； 便于保存；可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價(jià)疫苗。缺點(diǎn)：外源核酸是否會(huì)整合到染色體中引起癌變；能否引起免疫病理

16、作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。26、傳統(tǒng)疫苗（減毒、滅活、亞單位苗）的區(qū)別27、基因工程亞單位苗優(yōu)缺點(diǎn)，如何克服缺點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn)：產(chǎn)量高；純度高；安全性高 ；用于病原體難于培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。免疫原性好。缺點(diǎn)： 與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比 ，其免疫效果一般較差。克服缺點(diǎn)：為了增強(qiáng)其免疫原性，一般方法是:調(diào)整基因組合使之表達(dá)成顆粒性結(jié)構(gòu) ；是在體外加以聚團(tuán)化，包入脂質(zhì)體或膠囊微球；加入有免疫增強(qiáng)作用的化合物作為佐劑（adjuvant）。28、為什么迄今為止沒有寄生蟲疫苗？（迄今仍無公認(rèn)的寄生蟲病疫苗）（1）多數(shù)寄生蟲為多細(xì)胞生物，寄生蟲抗原成分非常復(fù)雜，很難找準(zhǔn)特定保

17、護(hù)性抗原，保護(hù)性免疫應(yīng)答機(jī)制不清。（2）寄生蟲抗原免疫所誘導(dǎo)的大都為部分保護(hù)性免疫力（一般為30%70%）。（3）寄生蟲形成種種逃避宿主免疫應(yīng)答的辦法，其機(jī)制尚待闡明。（4）寄生蟲一般引起慢性長(zhǎng)期感染，病期因寄生蟲生活史中形態(tài)上不同，常存在數(shù)階段（期）。29、與裸DNA相比，用細(xì)菌釋放DNA的優(yōu)點(diǎn)有哪些？1）增加靶向性。用肌肉注射或基因槍注入DNA只能轉(zhuǎn)染有限的抗原提呈細(xì)胞（APCs）；而通過適當(dāng)?shù)募?xì)菌釋放DNA，能將質(zhì)粒DNA特異靶向相關(guān)免疫組織的APCs，且除APCs外，還可靶向樹突狀細(xì)胞（DCs），能更好地進(jìn)行抗原提呈。2）增加免疫原性。細(xì)菌的成份，如G-菌的LPS和G+菌的脂肽酸及細(xì)菌DNA中沒有甲基化的序列等，都有佐劑活性，可增加釋放DNA的免疫原性。3）增加免疫途徑。細(xì)菌載體還能進(jìn)行口服，轉(zhuǎn)染腸相關(guān)淋巴組織，促進(jìn)粘膜免疫效果。他們可停留在吞噬泡中，也可通過分泌溶質(zhì)