果蠅唾液腺染色體的觀察

1、果蠅唾液腺染色體的觀察一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?)練習(xí)剖取果蠅三齡幼蟲(chóng)唾液腺的方法。2)掌握制作果蠅唾液腺染色體標(biāo)本的技術(shù)3)觀察果蠅唾液腺染色體的形態(tài)特征。 二、實(shí)驗(yàn)原理1） 果蠅三齡幼蟲(chóng)的唾液腺細(xì)胞處于永久早期，染色體解旋呈伸展?fàn)顟B(tài)在幼蟲(chóng)發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞核中的DNA多次復(fù)制，但細(xì)胞、細(xì)胞核不分裂。復(fù)制后的染色單體DNA不分開(kāi)，這種現(xiàn)象叫做核內(nèi)有絲分裂，從而形成了多線染色體。加之唾液腺細(xì)胞中同源染色體互相靠攏在一起呈現(xiàn)一種聯(lián)會(huì)狀態(tài)，而使其比一般體細(xì)胞中的染色體粗10002000倍，長(zhǎng)100200倍。2） 唾腺位于幼蟲(chóng)體前1/3-1/4處，所以左手持解剖針按壓住蟲(chóng)體前端三分之一的部位，固定幼蟲(chóng)，右手持解剖

2、針扎住幼蟲(chóng)頭部口器部位，適當(dāng)用力向右拉唾腺腺體隨之而出。如圖。3）由于在唾液腺細(xì)胞中8條染色體之間以著絲粒互相連結(jié)在一起形成染色盤(pán)或異染中心和同源染色體之間的假聯(lián)會(huì)，經(jīng)堿性染料染色后，可以觀察到一個(gè)染色較深的染色盤(pán)和以染色盤(pán)為中心向外輻射出的5條染色體臂。在這些染色體臂上可以看到染色深淺不同，被稱(chēng)做明帶、暗帶的橫紋，這些橫紋的位置，寬窄、數(shù)目都具有物種的特異性。不同物種，不同染色體的不同部位形態(tài)位置是固定的。因此根據(jù)染色體各條臂帶紋特征和各條臂端部帶紋特征能準(zhǔn)確識(shí)別各條染色體。在染色體臂上還可看到某些帶紋通過(guò)染色體的解旋、膨大形成的疏松區(qū)和巴爾比尼氏環(huán)，其富含轉(zhuǎn)錄出來(lái)的RNA，因此不著色，是基

3、因活動(dòng)的區(qū)域。在個(gè)體發(fā)育的不同階段，疏松區(qū)或巴爾比尼氏環(huán)在染色體上出現(xiàn)的部位不同，據(jù)此研究基因的表達(dá)，開(kāi)展各種染色體變異的研究等等。三、 器具和生物實(shí)驗(yàn)生物：果蠅的三齡幼蟲(chóng)；器具：雙筒解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針，載玻片、蓋玻片實(shí)驗(yàn)試劑： 醋酸洋紅染液、蒸餾水、lNHCI。四、 實(shí)驗(yàn)步驟1） 準(zhǔn)備發(fā)育充足、肥大的三齡幼蟲(chóng)（選擇在低溫下（16°C-18°C培養(yǎng)下，充分發(fā)育但尚未化蛹但活動(dòng)十分活躍的幼蟲(chóng)）；2） 剝離唾腺：在一干凈的載玻片上滴一滴蒸餾水，選擇行動(dòng)遲緩、肥大、爬在瓶壁上即將化蛹的三齡幼蟲(chóng)，置于載玻片上。每只手各持一個(gè)解剖針在解剖鏡下進(jìn)行操作。由于果蠅的唾腺位于幼蟲(chóng)

4、體前1/3-1/4處，所以左手持解剖針按壓住蟲(chóng)體前端三分之一的部位，固定幼蟲(chóng)，右手持解剖針扎住幼蟲(chóng)頭部口器部位，適當(dāng)用力向右拉唾腺腺體隨之而出；3） 解離：在唾腺組織上滴一滴1NHCl，解離1-2min ，以松軟組織；4） 吸去HCl，用水沖洗2-3次，滴加醋酸洋紅染液染色10min，染色時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，否則背景也著色。之后蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。將片子放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用大拇指用力壓住。（注意不要使蓋片移動(dòng)）；5） 鏡檢：先用低倍鏡進(jìn)行觀察，找到分散好的染色體再轉(zhuǎn)用高倍鏡進(jìn)行觀察；6） 整理實(shí)驗(yàn)器材，處理廢物； 五：實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 多線染色體六：實(shí)驗(yàn)問(wèn)題1：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意什么？。答：1)取果蠅

5、幼蟲(chóng)時(shí)一定要取粗大的；2）一定要加蒸餾水，否則唾液腺容易干，影響其正常形態(tài)，進(jìn)而影響觀察。但水不可加太多，否則幼蟲(chóng)會(huì)漂浮而且活躍。如水多了，請(qǐng)?jiān)賱冸x唾腺前吸走些，唾腺剝離后請(qǐng)勿吸水，以防將唾腺一起吸走。3)清除脂肪組織時(shí)要量力而行；在實(shí)驗(yàn)中，我發(fā)現(xiàn)如果嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟所寫(xiě)剝離唾液腺，撕裂后唾液腺將與脂肪分離，得到較干凈的唾液腺，很少脂肪干擾。4）盡可能的保留完整的唾液腺5)染色液勿過(guò)多，否則壓片時(shí)唾腺易隨染色液漂走。如染色時(shí)間到后，染色液已干，應(yīng)再少加些染色液，再蓋上蓋波片，避免氣泡產(chǎn)生。6)染色時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則背景會(huì)著色，影響觀察效果。7)用吸水紙吸取液體時(shí)，一定要注意不要將唾液腺吸走。2：本次實(shí)驗(yàn)為什么沒(méi)有成功？ 答：1）沒(méi)有找到足夠大的