甘肅省部分地區(qū)土壤微生物資源調(diào)查

1、甘肅省部分地區(qū)土壤微生物資源調(diào)查及蔬菜、中藥材無公害栽培用生防菌的篩選束弋蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2000級(jí)摘要 甘肅省微生物資源豐富,本實(shí)驗(yàn)即是通過對(duì)從甘肅省部分地區(qū)采集的土壤樣品進(jìn)行大規(guī)模的菌株分離，共得到172株菌株。針對(duì)一些在蔬菜及中藥材栽培過程中由真菌引起的病害，進(jìn)一步從部分分離結(jié)果中篩選出16株對(duì)真菌生長有抑制作用的拮抗菌，同時(shí)選取了一部分拮抗菌進(jìn)行了抑菌率的測定。但根據(jù)生防菌篩選的原則，真正具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的菌株只有D-14，F(xiàn)-3，F(xiàn)-15，F(xiàn)-23，F(xiàn)-24，F(xiàn)-26，G-1七株，其作用機(jī)理和田間推廣需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。關(guān)鍵詞：微生物資源 生防菌 蔬菜 中藥材Investiga

2、te Microoganism Resourses and Screen of Biocontrol Bacteria that are Beneficial for Uncontaminated Planting of Vegetables and Chinese Traditional Medicine in soil samples from parts of Gansu ProvinceShu YiSchool of Life Sciences, Lanzhou University Abstract Some diseases, caused by pathogenic fungi

3、during the planting of vegetables and Chinese traditional medicine, can be controlled by antagonistic bacteria. In this experiment, 172 strains of bacteria were separated from large amounts of soil samples, which were taken from parts of Gansu province. Among these strains, 16 inhibited the growth o

4、f the pathogenic fungi. And at the same time, we measured the bacteria inhibition rate. However, according to the principle of screening biocontrol bacteria, only 7 strains (D-14，F(xiàn)-3，F(xiàn)-15，F(xiàn)-23，F(xiàn)-24，F(xiàn)-26，G-1) of them had practical value, and the functional mechanism needs deep research to spread thei

5、r application into fields. Key words: microoganism resources biocontrol bacteria Chinese traditional medicine vegetables前言 自20世紀(jì)中葉以來，隨著化學(xué)工業(yè)的高速發(fā)展，人們通過化學(xué)合成的方法大量研制、生產(chǎn)農(nóng)藥，并在農(nóng)業(yè)上廣泛使用，對(duì)農(nóng)業(yè)的發(fā)展做出了巨大的貢獻(xiàn)，使得農(nóng)作物病蟲害得到了有效的控制，農(nóng)作物的產(chǎn)量也隨之大幅度增長。然而半個(gè)多世紀(jì)過去了，由于無節(jié)制地使用化學(xué)農(nóng)藥，嚴(yán)重的制約了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，并危害到人類的健康和生存，同時(shí)，也造成自然生境的破壞。因此，人們正在努力

6、尋求一種能有效控制有害生物的同時(shí)又具有無公害優(yōu)點(diǎn)的生物防治辦法，即利用微生物及其基因產(chǎn)生或表達(dá)的各種生物活性成分，制備出防治植物病蟲草害以及調(diào)節(jié)植物生長的微生物農(nóng)藥。微生物農(nóng)藥具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)對(duì)病蟲害防治效果好，對(duì)人畜安全無毒，不污染環(huán)境，無殘留；(2)對(duì)病蟲的殺傷特異性強(qiáng)，不傷害天敵和有益生物能保持生態(tài)自然平衡；(3)生產(chǎn)原料和有效成分屬天然產(chǎn)物，它可回歸自然，保證可持續(xù)發(fā)展；(4)可用生物技術(shù)和基因工程的方法對(duì)微生物進(jìn)行改造，不斷提高其性能和質(zhì)量；(5)多種因素和成分發(fā)揮作用，害蟲和病原菌難以產(chǎn)生抗藥性1，2。所以，對(duì)于微生物農(nóng)藥的開發(fā)研究受到國內(nèi)外各研究機(jī)構(gòu)的廣泛關(guān)注3，4，5。而微

7、生物農(nóng)藥生產(chǎn)的第一步即是要針對(duì)具體的病害，通過一定的方法分離篩選出具有顯著防治效果的拮抗菌。然后應(yīng)用拮抗菌本身或其代謝產(chǎn)物，進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，以生物農(nóng)藥的新形式應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)6，7，8，經(jīng)濟(jì)作物栽培9等多個(gè)方面。 本實(shí)驗(yàn)是針對(duì)土壤中的微生物進(jìn)行的篩選生防菌的工作，采樣地選擇在甘肅省部分地區(qū)的農(nóng)田和自然環(huán)境地，因?yàn)楦拭C省地處中國的西部，生態(tài)環(huán)境具有明顯的地方特點(diǎn)，是一個(gè)尚未開發(fā)的微生物資源寶庫。因此，我們從該地區(qū)采樣并進(jìn)行資源調(diào)查，通過實(shí)驗(yàn)，希望能分離篩選到對(duì)蔬菜和中藥材栽培過程中，由真菌引起的病害有良好防治效果的生防菌，以備此后的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和田間推廣應(yīng)用。材料與方法1材料1.1土壤樣品：A組土樣

8、：玉米地中（1） 榆中縣大營村 2003.7.24玉米地中（2） 榆中縣大營村 2003.7.24大麥地中 榆中縣大營村 2003.7.24胡麻地中（1） 榆中縣大營村 2003.7.24胡麻地中（2） 榆中縣大營村 2003.7.24小麥田中（未收）（1） 榆中縣大營村 2003.7.24小麥田中（未收）（2） 榆中縣大營村 2003.7.24土豆地中（1） 榆中縣大營村 2003.7.24土豆地中（2） 榆中縣大營村 2003.7.24小麥田（已收） 榆中縣大營村 2003.7.24B組土樣：荒地中 榆中縣大營村 2003.7.24土豆地中（1） 榆中縣 2003.7.24土豆地中（2）

9、榆中縣 2003.7.24 興隆山河邊泥地 榆中縣 2003.7.24 荒地中 榆中縣 2003.7.24 大麥地中 榆中縣大營村 2003.7.24 胡麻地中 榆中縣大營村 2003.7.24 興隆山河邊 榆中縣 2003.7.24 土豆地中（尾部作種子） 榆中縣大營村 2003.7.24 蘿卜地中 榆中縣大營村 2003.7.24C組土樣：桐家溝 隴南 2003.7.24 興隆山東山山腳 榆中縣 2003.7.24 興隆山山腳草地（1） 榆中縣 2003.7.24 興隆山山腳草地（2） 榆中縣 2003.7.24 興隆山西山山腳（1） 榆中縣 2003.7.24 興隆山西山山腳（2） 榆中

10、縣 2003.7.24 興隆山西山下河谷地 榆中縣 2003.7.24 興隆山河中泥 榆中縣 2003.7.24 興隆山西山腳樹蔭下 榆中縣 2003.7.24 興隆山山腳 榆中縣 2003.7.24D組土樣：側(cè)柏田中 定西 李家堡 2003.7.24 甘草田地邊 定西 李家堡 2003.7.24 土豆地中（1） 定西 李家堡 2003.7.24 土豆地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24 玉麥地邊（1） 定西 李家堡 2003.7.24 玉麥地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24 麥田中 定西 李家堡 2003.7.24 胡麻地中 定西 李家堡 2003.7.24 板藍(lán)根地邊 定

11、西 李家堡 2003.7.24 草藥田邊 定西 李家堡 2003.7.24E組土樣：徐家山公園自然環(huán)境地 蘭州市 2003.7.22 豇豆地中央 蘭州市 徐家山 2003.7.22 生菜地 雁灘鄉(xiāng) 馬教泥灣 2003.7.22 排洪溝底 蘭州市 徐家山 2003.7.22 麥田中 定西 李家堡 2003.7.24側(cè)柏地邊 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中的黃芪植株下 定西 李家堡 2003.7.24云杉林地中 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中（1） 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24F組土樣：苦瓜地邊（有病情） 安寧 吳家灣 200

12、3.7.22茴香地 雁灘鄉(xiāng) 黃教泥灣 2003.7.22玉米地邊（有病情） 安寧 吳家灣 2003.7.22辣椒地邊（正常） 安寧 吳家灣 2003.7.22辣椒地邊（立枯病發(fā)病區(qū)） 安寧 吳家灣 2003.7.22高粱地邊 安寧 吳家灣 2003.7.22辣椒地邊（有病情） 安寧 2003.7.22蔥地 雁灘鄉(xiāng) 馬教泥灣 2003.7.22甘藍(lán)菜地中央 蘭州市 徐家山 2003.7.22茄子地邊（有病情） 安寧 2003.7.22G組土樣：韭菜地（由于病情嚴(yán)重，韭菜已拔除） 馬灘 2003.7.22茄子地（有茄早疫發(fā)生） 馬灘 2003.7.22茄子地（有病情） 馬灘 2003.7.22桃林

13、邊的水溝底 安寧 2003.7.22菊科花田 安寧 紅意村 2003.7.22葡萄地邊 安寧 2003.7.22葡萄田植株下（有病毒感染） 安寧 2003.7.22豇豆地邊（有病情） 安寧 2003.7.22韭菜地 馬灘 2003.7.22韭菜地（有病情） 馬灘 2003.7.22H組土樣：七米溝（1） 隴南 2003.7.24 七米溝（2） 隴南 2003.7.24許家店前公路旁小坡 隴南 2003.7.23牛墨山南坡半山處（1） 隴南 2003.7.24牛墨山南坡半山處（2） 隴南 2003.7.24甘溝金礦北山 隴南 2003.7.23二郎鄉(xiāng)店子北坡 隴南 2003.7.24偏溝 隴南

14、2003.7.24桐家溝 隴南 2003.7.24成縣北10公里處 陳院 隴南 2003.7.241.2病原真菌實(shí)驗(yàn)選用的16種病原真菌為實(shí)驗(yàn)室保存的菌種，其中2，3，4，5，6，7，9和12真菌是從發(fā)病獼猴桃中分離得到的，尚未鑒定；另外8種真菌為：13：脫頂鐮刀菌（Fusarium acuminatum），14：尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum），15：半裸鐮刀菌（Fusarium semiteetum），16：辣椒黑腐病菌（Alternaria solani），17：尖孢鐮刀菌（黃瓜枯萎病菌）（Fusarium oxysporum），18：番茄早疫病菌（Alternaria

15、 solani），19：茄子早疫病菌（Alternaria solani），20：立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）1.3培養(yǎng)基·細(xì)菌培養(yǎng)使用NA培養(yǎng)基：牛肉浸膏0.3%(w/v)，酵母浸膏0.1%，蛋白胨0.5%，葡萄糖1%，瓊脂1.5% PH=6.87.0·真菌培養(yǎng)使用PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯20%(w/v)，葡萄糖1%2%，瓊脂1.7%2%，其中，若PDA培養(yǎng)基單純的使用于培養(yǎng)真菌，則無需調(diào)節(jié)PH值；而做篩選時(shí)使用的PDA培養(yǎng)基需調(diào)PH=6.87.02方法：2.1土壤樣品中微生物的分離：將在甘肅省部分地區(qū)采集的土壤樣品分為AH 8組，每組10份土樣。分離時(shí)

16、每份樣品稱取10g，加入到裝有100mL無菌水的錐形瓶中，置于搖床上振蕩30min后，靜置1h，待分層后，取上清液依次稀釋10，102，103，104，105，106，107，1088個(gè)濃度梯度，加入NA培養(yǎng)基，于30培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。菌落長出后，選出單菌落，記錄菌落顏色，形態(tài)，大小等性狀。然后將單菌落挑入NA液體培養(yǎng)基中，搖瓶富集培養(yǎng)。2.2從土樣分離結(jié)果中篩選生防菌：隨機(jī)選取分離所得菌種，以10個(gè)為一組，共三組，涂NA平板；同時(shí)于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)16種病原真菌，待兩者長出后，打菌餅。在PDA（PH=6.87.0）平板上按照中間放置一個(gè)待篩選菌種，圍繞其周圍對(duì)稱放置4個(gè)不同病原真菌的原則擺

17、放菌餅，于30培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，5d6d后觀察統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.3篩選結(jié)果進(jìn)一步進(jìn)行抑菌作用測定：·實(shí)驗(yàn)組：從篩選結(jié)果中選出抑菌作用明顯并具有廣譜性的四株菌株F-3，F(xiàn)-26，F(xiàn)-23與F-24以及D-14，E-40兩株作用效果明顯，但不具有廣譜性的菌株和作用效果不明顯但具有廣譜性的F-1菌株進(jìn)行抑菌圈實(shí)驗(yàn)。將活化的菌體原液1mL與PDA培養(yǎng)基（PH=6.87.0）混合，待凝固后，將5，15，18，19真菌接于培養(yǎng)基中央，30培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，測量3d，4d，5d的真菌菌落直徑，與對(duì)照組比較并計(jì)算抑菌率。·對(duì)照組：取1mL無菌的NA液體培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基（PH=6.87.

18、0）混合，其余操作同實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1 甘肅部分地區(qū)微生物資源調(diào)查結(jié)果：從80份土壤樣品中共分離得到172株菌株。具體特征和性狀見下表。 表-1 分離所得菌株的特征和性狀菌株編號(hào)菌株顏色形狀菌落質(zhì)地采集地A-1乳白色圓錐形菌落，表面有光澤稀，粘稠榆中縣A-2乳白色圓形菌落，有放射形菌皺清稀榆中縣A-3乳白色圓形菌落中間有一凹陷稀榆中縣A-5乳白色圓形菌落中間有突起，表面光澤稀榆中縣A-6乳白色菌落較小，圓形中部突起，有光澤較稀榆中縣A-11乳白色菌落圓形，中有環(huán)形圈，邊緣不齊較干榆中縣A-22米黃色圓形菌落，中部凹陷，無光澤，邊緣有光澤稀榆中縣B-3白色，較淡圓形菌落，較透明，長于培養(yǎng)基

19、中榆中縣A-14乳白色菌落不規(guī)則，其面積較大，有分枝很稀榆中縣A-4乳白色圓形菌落，中間突起，菌落較大較稀榆中縣A-17米黃色菌落小，圓形干榆中縣B-1乳黃色圓形菌落，菌落突起，不光滑，有放射形菌皺稀榆中縣B-2米黃色圓形菌落，中間有突起較清稀榆中縣B-23米黃色圓形菌落，較大，邊緣略有不齊，有菌皺稀榆中縣B-33黃色圓形菌落，有放射形菌皺，中部突起較干榆中縣B-30米黃色圓形菌落，中部突起硬榆中縣B-32黃色圓形菌落，中部較厚，邊緣較透明較稀榆中縣B-28白色透明圓形菌落，中間有一白點(diǎn)，長于培養(yǎng)基中榆中縣B-12白色透明圓形菌落，有放射形菌皺，長于培養(yǎng)基中榆中縣B-21乳白色菌落形狀不規(guī)則，

20、中部有突起，突起處無光澤很稀榆中縣B-9白色菌落大，形態(tài)不規(guī)則較稀榆中縣B-13乳白色圓形菌落，表面光滑較稀榆中縣B-16白色透明薄，略圓形菌落，長于培養(yǎng)基中榆中縣B-35乳白色圓形突起菌落硬榆中縣B-29米黃色圓形菌落，有花邊狀邊緣，中部有突起，不透明硬榆中縣B-22白色菌落形狀不規(guī)則，有菌翼，長于培養(yǎng)基中榆中縣B-18黃色圓形菌落，表面光滑較稀榆中縣B-36乳白色菌落大，扁平略圓，邊緣不規(guī)則稀榆中縣B-17米黃色圓形菌落，表面光滑凝乳狀榆中縣A-32乳白色圓形菌落，中部較厚，表面光澤稀榆中縣A-41白色微透明，略圓，邊緣不規(guī)則菌落較稀榆中縣A-38米黃色圓形菌落，中間有突起較稀榆中縣A-3

21、9米黃色略圓，不規(guī)則菌落，中部較厚膠狀榆中縣A-40黃色圓形菌落，微透明干濕適中榆中縣A-34乳白色圓形菌落，較大較稀榆中縣B-60黃色圓形菌落，邊緣不規(guī)則，正面有放射形菌皺干濕適中榆中縣B-68米黃色圓形菌落，薄暈狀，長于培養(yǎng)基中榆中縣A-46乳白色大的近圓形菌落，中間有突起，光滑較稀粘榆中縣B-64白色不規(guī)則菌落，表面中部有光澤較稀榆中縣B-48白色較透明，菌落大，邊緣有放射形菌翼較稀榆中縣B-55米黃色圓形菌落，較小，表面光滑干硬榆中縣B-67米黃色圓形菌落，邊緣不規(guī)則，呈放射狀，表面光滑較稀榆中縣A-39米黃色略圓，不規(guī)則菌落，中部較厚粘，膠狀榆中縣B-66米黃色圓形，邊緣不規(guī)則菌落，

22、水狀可流動(dòng)很稀榆中縣B-44白色圓形菌落，表面有不規(guī)則菌皺稀榆中縣D-3米黃色小菌落，邊緣不規(guī)則，有凹陷，表面無光澤干濕適中定西地區(qū)C-7乳白色圓形菌落，表面光滑稀榆中縣B-25米黃色圓形菌落，表面光滑稀榆中縣D-1乳白色略圓形菌落，表面不平稀定西地區(qū)D-2米黃色圓形扁平菌落，有光澤較稀定西地區(qū)C-10乳白色圓形菌落稀榆中縣B-52米黃色圓形菌落，較大，邊緣不規(guī)則，有太陽狀花紋較稀榆中縣B-42白色近圓形，薄而透明的菌落，有放射形菌皺較干榆中縣B-63白色透明近圓形菌落，邊緣不規(guī)則，中部有放射狀花紋較稀榆中縣C-6乳白色圓形菌落稀榆中縣D-20白色圓形極小的菌落稀定西地區(qū)D-7乳白色較大的扁平

23、圓形菌落，表面光滑粘，稀定西地區(qū)D-36米黃色大型圓形菌落，扁平，中部有菌皺較稀定西地區(qū)D-28米黃色圓形菌落，中間有突起，有菌皺粘稠定西地區(qū)D-9乳白色圓形菌落，中間有突起較粘稠定西地區(qū)D-37白色透明近圓形菌落，中間突起，外有圓環(huán)狀花紋，最外為毛刷狀邊緣定西地區(qū)D-27米黃色圓形菌落，中間突起，表面光滑稀定西地區(qū)D-10米黃色圓形菌落，表面光滑較稀定西地區(qū)D-11白色透明不規(guī)則大型菌落，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)D-14灰白色圓形中間突起的菌落，周圍有黑色物質(zhì)釋放，表面略有光澤硬定西地區(qū)D-25米黃色圓形扁平大菌落，表面無光澤粘稠定西地區(qū)D-34米黃色圓形菌落，菌落清亮，中部略突稀定西地區(qū)D-1

24、3米黃色較大的扁平圓形菌落，光滑，有皺粘，稀定西地區(qū)D-12白色圓形菌落，較小定西地區(qū)D-16米黃色圓形菌落軟定西地區(qū)D-4乳白色圓形中部略有突起的菌落，表面光滑稀定西地區(qū)D-8白色透明菌落近圓形，邊緣波浪狀，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)E-24白色透明珊瑚狀邊緣，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)E-28白色半透明近圓形菌落，邊緣不規(guī)則，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊E-19乳白色扁平原形的大型菌落，中間突起，表面粗糙，邊緣清稀稀且較粘定西地區(qū)E-6乳白色圓形扁平大菌落，表面光滑稀定西地區(qū)E-31白色近圓形扁平菌落，中部有菌皺較干蘭州市近郊E-21白色圓形菌落，表面有菌皺，中央突起稀定西地區(qū)E-18乳白色扁平橢圓形菌落，

25、大，表面光滑稀定西地區(qū)E-26白色卵圓形菌落，表面光滑，似可流動(dòng)稀蘭州市近郊E-11米黃色圓形菌落，中間有突起較稀，膠狀定西地區(qū)D-42米黃色不規(guī)則珊瑚狀菌落，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)D-40肉紅色圓形菌落，中央有突起稀定西地區(qū)E-10米黃色圓形扁平菌落，表面光滑稀定西地區(qū)E-2乳白色圓形菌落，較小，扁平，光滑較稀蘭州市近郊E-9白色透明近圓形菌落，邊緣不規(guī)則，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)E-15米黃色扁平近圓形菌落干定西地區(qū)E-27白色透明近圓形菌落，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊E-13乳白色半透明菌落，近圓形，扁平較稀定西地區(qū)E-30米黃色圓形扁平大型菌落，中凸，光滑較稀蘭州市近郊E-20米黃色扁平大型菌落

26、，表面有菌皺干濕適中定西地區(qū)D-19乳白色圓形較大菌落，表面略有光澤稀定西地區(qū)E-25白色卵圓形菌落，中央有淡黃色突起稀蘭州市近郊E-29米黃色近圓形較小菌落，略透明，有菌皺較干蘭州市近郊E-4白色透明大面積菌落，邊緣有珊瑚狀分枝，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊E-5白色分枝狀菌落，半透明，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊D-45乳白色扁平圓形菌落，表面光滑較軟定西地區(qū)E-7乳白色圓形扁平大型菌落，表面光滑稀定西地區(qū)E-12乳白色圓形扁平大型菌落，中部顏色較深稀定西地區(qū)E-8乳白色圓形扁平菌落，表面粗糙稀定西地區(qū)D-44米黃色圓形扁平菌落，中部有光澤和菌皺軟定西地區(qū)E-1乳白色圓形扁平菌落，中部略厚較稀蘭州市近

27、郊E-3乳白色圓形菌落，邊緣不規(guī)則，有環(huán)紋較干蘭州市近郊D-48白色近圓形菌落，半透明，長于培養(yǎng)基中定西地區(qū)D-43米黃色圓形菌落較稀定西地區(qū)F-3白色扁平菌落，近圓形，較大，對(duì)平板上生長的另一菌有拮抗作用凝膠狀蘭州市近郊F-17米黃色圓形菌落，表面清亮很稀蘭州市近郊E-40乳白色大面積近圓形扁平菌落，表面光滑稀定西地區(qū)E-38乳白色扁平圓形大菌落，略透明很稀定西地區(qū)E-32乳白色扁平圓形大菌落，表面光滑凝膠狀定西地區(qū)E-33米黃色扁平圓形大菌落，表面光滑凝膠狀定西地區(qū)F-20灰黃色圓形突起菌落，非常清亮，可流動(dòng)很稀蘭州市近郊F-18乳白色近圓形扁平菌落，中凸，表面無光澤凝膠狀蘭州市近郊F-1

28、黃綠色扁平圓形菌落，表面粗糙，有菌皺，對(duì)平板上生長的另一菌有拮抗作用稀蘭州市近郊E-41米黃色大面積圓形菌落，邊緣有菌皺稀定西地區(qū)F-4米黃色絲網(wǎng)狀菌落，面積大，受F-3拮抗較稀蘭州市近郊D-50乳白色圓形扁平菌落，邊緣毛刷狀較稀定西地區(qū)D-49乳白色網(wǎng)狀大面積菌落稀定西地區(qū)E-42白色近圓形菌落，一側(cè)有凹陷凝膠狀定西地區(qū)D-31白色扁平近圓形菌落，中凸膠狀定西地區(qū)F-7乳白色近圓形扁平菌落，中部網(wǎng)狀，似雪花較稀蘭州市近郊D-51米黃色半透明菌落，中部略厚，有綠色環(huán)紋較稀定西地區(qū)E-43米黃色大面積圓形菌落，似可流動(dòng)稀定西地區(qū)F-14白色透明圓形菌落，中部有輻射狀紋路，清亮稀蘭州市近郊F-15

29、白色透明圓形扁平菌落，無光澤長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊F-9米黃色圓形菌落，表面光滑，中部突起較稀蘭州市近郊E-22淡黃色圓形菌落，水清狀，有突起稀定西地區(qū)D-54灰綠色圓形菌落，中部突起為白色稀定西地區(qū)F-16乳白色圓形略突起菌落，有光澤稀蘭州市近郊F-10米黃色圓形菌落，表面有輪環(huán)狀突起凝膠狀蘭州市近郊F-8米黃色扁平大型菌落，圓形，無光澤凝膠狀蘭州市近郊D-55乳白色大面積的不規(guī)則菌落，可流動(dòng)稀定西地區(qū)G-3米黃色形狀不規(guī)則，表面濕潤，對(duì)周圍菌有拮抗作用較稀蘭州市近郊G-13米黃色近圓形菌落，無光澤，中間突起凝膠狀蘭州市近郊G-1淺黃色近圓形菌落，對(duì)周圍的網(wǎng)狀菌有拮抗作用，長于培養(yǎng)基中蘭州市

30、近郊F-22乳白色菌落形狀不規(guī)則，中濕外干，對(duì)周圍的網(wǎng)狀菌有拮抗作用凝乳狀蘭州市近郊G-12米黃色圓形大面積菌落，無光澤，但較濕潤粘稠蘭州市近郊F-23米黃色形狀不規(guī)則菌落，半透明，對(duì)周圍網(wǎng)狀菌有顯著的拮抗作用凝乳狀蘭州市近郊F-26米黃色不規(guī)則菌落，中有突起，周圍有菌皺，對(duì)周圍菌有拮抗作用凝乳狀蘭州市近郊G-7淺褐色橢圓形菌落，無光澤，對(duì)周圍的網(wǎng)狀菌有拮抗作用，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊G-11土黃色圓形菌落，無光澤硬蘭州市近郊G-2淺黃色不規(guī)則菌落，對(duì)周圍的網(wǎng)狀菌有拮抗作用，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊G-9米黃色圓形菌落，中間突起，有光澤稀蘭州市近郊F-25米黃色不規(guī)則菌落，中部有菌皺，對(duì)周圍菌有

31、拮抗作用較干蘭州市近郊F-24乳白色圓形菌落，對(duì)周圍菌有拮抗作用較干蘭州市近郊G-14米黃色不規(guī)則菌落，中間有突起很稀，粘性大蘭州市近郊F-21黑黃色圓形菌落，中間突起，對(duì)周圍菌有拮抗作用較干蘭州市近郊G-4淺黃色近圓形菌落，表面有光澤，對(duì)周圍菌有拮抗作用稀蘭州市近郊G-10乳白色不規(guī)則菌落，無光澤較稀蘭州市近郊G-28米黃色大面積圓形扁平菌落，中部有菌皺很稀蘭州市近郊G-29灰色扁平圓形菌落干硬，有彈性蘭州市近郊G-23白色扁平分枝狀菌落，無光澤，面積大稀蘭州市近郊F-28米黃色近橢圓形菌落，扁平，面積大無光澤較稀蘭州市近郊G-20白色透明近圓形扁平菌落，長于培養(yǎng)基中蘭州市近郊G-17白色近

32、圓形菌落，邊緣分枝狀，中部有一環(huán)形菌皺，無光澤較稀蘭州市近郊G-16灰黃色不規(guī)則菌落，表面有大量菌皺稀，粘性大蘭州市近郊G-26白色近圓形扁平分枝狀菌落，無光澤干濕適中蘭州市近郊F-29米黃色扁平大型菌落，中部近圓形，呈網(wǎng)格狀，邊緣分枝狀凝脂狀蘭州市近郊G-30米黃色扁平近圓形菌落，中部突起，粗糙凝脂狀蘭州市近郊G-19米黃色不規(guī)則菌落，中部有菌皺膠狀蘭州市近郊G-25白色扁平的分枝狀菌落，表面有菌皺凝脂狀蘭州市近郊F-27乳白色近橢圓形菌落，中部厚，邊緣薄較軟蘭州市近郊G-18米黃色近圓形菌落，中部略厚，表面清亮較干蘭州市近郊H-7乳白色圓形菌落稀隴南地區(qū)H-8乳白色邊緣不規(guī)則菌落較粘稠隴南

33、地區(qū)H-4中：米黃外周：淡綠近圓形菌落粘稠隴南地區(qū)F-32米黃色圓形扁平菌落，透明干蘭州市近郊H-11米黃色圓形菌落干濕適中隴南地區(qū)H-2黃色圓形菌落干濕適中隴南地區(qū)H-3米黃色圓形菌落，中央突起干濕適中隴南地區(qū)G-21橘黃色圓形菌落，有突起，表面光滑較粘蘭州市近郊H-1白色圓形菌落，水清狀稀隴南地區(qū)注：表格菌株的排列順序是依照菌種保存的順序 從各地的土壤采樣中分離得到的172株菌株, 性狀各異, 雖然僅是初步的分離結(jié)果, 但足以體現(xiàn)甘肅省微生物資源蘊(yùn)藏量之豐。同時(shí),由于甘肅省地處中國的西部, 所以具有有別于其他地區(qū)的生態(tài)環(huán)境; 而就本省而言, 各地的氣候條件, 地質(zhì)類型及環(huán)境因素亦有不同。

34、(如本實(shí)驗(yàn)采樣所選擇的幾個(gè)地區(qū): 定西地區(qū)氣候較為干燥而隴南地區(qū)卻相對(duì)濕潤, 在榆中縣境內(nèi), 除了興隆山以外的地區(qū)都以較干旱的環(huán)境為主, 而蘭州市近郊則受人為活動(dòng)影響較多。)所有這些, 共同造成了甘肅省生態(tài)環(huán)境的多樣性和有別于他處的獨(dú)特性。 生態(tài)環(huán)境的多樣性決定了微生物物種的多樣性, 而其獨(dú)特性則決定了特有微生物物種在省內(nèi)的分布。因此 , 我們所進(jìn)行的微生物資源調(diào)查采樣工作是有意義的: 一方面, 是為我們的篩選生防菌的工作做樣品準(zhǔn)備; 另一方面, 是對(duì)甘肅省部分地區(qū)的微生物蘊(yùn)含量有一個(gè)初步的認(rèn)識(shí)。使我們在篩選生防菌的過程中, 既可以有一個(gè)儲(chǔ)存量很大的菌種庫作保證: 又可以篩選獲得適于西部地區(qū)獨(dú)

35、特生境使用的針對(duì)性較強(qiáng)的生防菌。2 篩選結(jié)果： 圖-1 F-23菌株對(duì)7，9，12真菌 圖-2 G-1菌株對(duì)17，18，19，20 生長的抑制作用 真菌生長的抑制作用 圖-3 F-26菌株對(duì)2，3，4，5 圖-4 F-15菌株對(duì)17、，18，19，20真菌生長的抑制作用 真菌生長的抑制作用 表-2 待篩選菌株與病原真菌間的作用效果病原真菌拮抗菌2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)9號(hào)12號(hào)13號(hào)14號(hào)15號(hào)16號(hào)17號(hào)18號(hào)19號(hào)20號(hào)D-4+D-7D-8D-9D-10D-11D-13D-14+D-16D-20+E-32E-33E-38E-40+F-1+F-3+F-4+F-8F-15+F-17F-18F-

36、20F-22+F-23+F-24+F-25+F-26+G-1+G-3+G-7+空白：表示由于雜菌污染等原因沒有看到篩選結(jié)果； ：表示沒有抑制效果；+：表示有抑制效果，但不明顯； +：表示有較明顯的抑制效果； 表-3 部分篩選所得拮抗菌的抑菌效果 5號(hào) 15號(hào) 18號(hào) 19號(hào)3day4day5day3day4day5day3day4day5day3day4day5dayCK(d=mm)38.050.060.022.528.033.536.547.057.532.041.051.0F-1(d=mm)37.048.058.522.528.535.035.547.056.032.041.059.0抑菌

37、率(%)2.64.03.30.00.00.02.70.02.60.00.00.0F-3(d=mm)7.06.56.58.07.57.07.07.06.07.07.07.0抑菌率(%)81.687.089.264.473.279.180.885.089.678.182.986.3F-23(d=mm)8.58.08.08.08.08.511.513.514.07.88.08.0抑菌率(%)77.684.086.764.471.474.668.571.375.775.680.584.3F-24(d=mm)8.58.08.08.08.08.59.09.59.57.57.58.0抑菌率(%)77.684

38、.086.764.471.474.675.379.883.576.681.784.3F-26(d=mm)8.08.08.08.38.38.08.07.58.08.07.58.5抑菌率(%)78.984.086.763.170.476.178.184.086.175.081.783.3E-40(d=mm)8.510.010.57.57.58.5抑菌率(%)77.680.082.576.681.783.3D-14(d=mm)9.08.07.0抑菌率(%)60.071.479.1抑菌率=（對(duì)照真菌菌落直徑實(shí)驗(yàn)組真菌菌落直徑）/對(duì)照真菌菌落直徑 %空白：表示沒有拮抗作用由表-1可以看出，分離所得的30

39、株菌株（為隨機(jī)選取的，尚未進(jìn)行菌種鑒定）中共有16株菌株對(duì)病原真菌的生長有抑制作用，篩選率為53.3%，是在篩選實(shí)驗(yàn)中獲得的比較好的的篩選結(jié)果，在今后的研究中，可把篩選目標(biāo)重點(diǎn)定于該批菌株來源的土壤樣品上，重復(fù)篩選，以期得到更多的拮抗菌菌株。但是，并不是每一菌株都具有進(jìn)一步研究的價(jià)值，因?yàn)樵谧畛醯暮Y選結(jié)果中，有些菌株雖具有抑制作用，但抑菌率極低（表-2），如F-1，在平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)中，其表現(xiàn)出了對(duì)接于其四周的5，15，18，19病原真菌的抑制作用，但進(jìn)行抑菌圈實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)其抑菌率極?。?%），幾乎沒有作用，因此沒有必要進(jìn)行深入研究和應(yīng)用方面的嘗試。所以，我們根據(jù)以下兩點(diǎn)原則選擇有應(yīng)用價(jià)值的生防菌

40、：（1）專一性強(qiáng)，具有明顯抑制效果的菌株。篩選出的符合此標(biāo)準(zhǔn)的菌株，適于針對(duì)專門的農(nóng)作物和經(jīng)濟(jì)作物病害進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化開發(fā)與應(yīng)用，同時(shí)也具有進(jìn)一步研究其作用機(jī)理的價(jià)值。（2）抑制病原菌的效果明顯并具有廣譜性的菌株。符合此標(biāo)準(zhǔn)的菌株，具有更高的開發(fā)利用價(jià)值，因?yàn)榫w本身的有效成分或其代謝產(chǎn)物一旦產(chǎn)業(yè)化的大規(guī)模生產(chǎn)，其應(yīng)用領(lǐng)域是相當(dāng)廣泛的，菌株廣譜抗菌的特點(diǎn)，使得由該菌研發(fā)的微生物農(nóng)藥可以應(yīng)用于防治由真菌引起的多種農(nóng)作物或經(jīng)濟(jì)作物中的病害。因此，本實(shí)驗(yàn)最終從篩選結(jié)果中只選取了7個(gè)菌株D-14，F(xiàn)-3，F(xiàn)-15，F(xiàn)-23，F(xiàn)-24，F(xiàn)-26，G-1作為有價(jià)值的生防菌，其中，D-1菌株屬專一性較強(qiáng)類，而其余

41、6株菌株屬于廣譜抗菌類。這些生防菌可應(yīng)用于蔬菜、中藥材的無公害栽培中，因?yàn)橛蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出它們對(duì)能引起蔬菜生長過程中一些病害的真菌，如半裸鐮刀菌，番茄早疫病病菌和茄子早疫病病菌等有較好的抑制作用，而在中藥材栽培過程中，有許多病害也是由同類真菌引起的，所以篩選到的幾種生防菌也可同時(shí)應(yīng)用于中藥材的栽培。追溯7株菌株的來源，D-14是從定西地區(qū)的土壤樣品中分離得到的；F-3，F(xiàn)-15，F(xiàn)-23，F(xiàn)-24，F(xiàn)-26，G-1是從蘭州市近郊的農(nóng)田中采集的土壤樣品中分離得到的。由土壤采樣記錄可以看出，這些地區(qū)有農(nóng)作物病害的發(fā)生，根據(jù)微生物間相互拮抗的原則10，在發(fā)病區(qū)的土壤中篩選到與致病菌有拮抗作用的菌株

42、的概率更大，本實(shí)驗(yàn)也給予了一定的驗(yàn)證。討論占我國國土面積近60%的西部地區(qū),由于干旱, 高寒和高海拔, 荒漠化十分嚴(yán)重。生長在那里的微生物長期受到干旱, 寒冷, 高紫外輻射和缺氧的巨大環(huán)境壓力, 在進(jìn)化過程中形成了西部特有的多種抗旱, 抗鹽, 抗寒,抗紫外輻射, 抗缺氧, 抗病蟲害, 抗沙塵暴的種質(zhì)資源, 它們的基因組中含有各種寶貴的基因資源, 而且由于環(huán)境的多樣性造成微生物體內(nèi)次生代謝途徑的多樣性, 為特殊藥物的產(chǎn)生奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。所以西部的微生物資源是一個(gè)有待開發(fā)的大寶庫。其間蘊(yùn)藏著無盡的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。利用這些種質(zhì)資源以及藥源開發(fā)適合在西部使用的生防菌制劑等, 對(duì)西部的經(jīng)濟(jì)發(fā)展, 生態(tài)建設(shè)和整

43、個(gè)西部社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展意義重大。再者, 由于西部地區(qū)氣候條件和生態(tài)環(huán)境與其他地區(qū)顯著不同, 所以目前適合其他地區(qū)應(yīng)用的生防菌不一定適合西部地區(qū), 西部地區(qū)需要的是能夠適合西部的氣候條件和生態(tài)環(huán)境, 能在西部應(yīng)用的生防菌。我們上面所做的一些工作，就是基于這一思想。但由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間的限制，本實(shí)驗(yàn)只是對(duì)與蔬菜和中藥材無公害栽培有關(guān)的生防菌的初步篩選，是為進(jìn)一步的作用機(jī)理研究和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)所做的菌種準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)中，菌種的分離是非常繁重的工作，因?yàn)橐诖罅康呐囵B(yǎng)物中選取單菌落，挑選的過程全憑主觀的人為判斷，這就難以避免重復(fù)挑取同一菌種的錯(cuò)誤，所以在挑單菌落的過程中，要仔細(xì)觀察菌落形態(tài)差異，盡量避免重復(fù)挑取。分離土樣時(shí)稀釋了8個(gè)濃度梯度，其目的是為了保證單菌落的產(chǎn)生，但是許多稀有的微生物在土壤中的種群數(shù)目非常小