DNA損傷遺傳毒性SCGE彗星試驗檢測服務(wù)()

1、DNA損傷/遺傳毒性/SCGE/彗星試驗檢測服務(wù)()1嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范和完善配套的儀器設(shè)備，為更好地完成彗星試驗提供了軟硬件保障。2.批量電泳：一次最多可對數(shù)十個樣品同時進行電泳，保證了樣品電泳條件的一致性。排除了電泳條件對不同樣品的影響，有利于陰性對照和/或陽性對照與研究的試驗對象進行比較?？梢詫€體的遺傳物質(zhì)損傷情況提供充分信息。3.本公司擁有彗星試驗的兩項專利：單細胞凝膠試驗專用電泳槽和彗星圖象全自動分析軟件。4.經(jīng)驗豐富的研究員為您提供免費技術(shù)咨詢。結(jié)果：提供彗星試驗電泳載玻片，所有已經(jīng)分析的圖像，數(shù)據(jù)分析結(jié)果及統(tǒng)計結(jié)果。結(jié)果參數(shù)包括：彗星長；彗星光密度；彗星重心；尾長；尾光密度；尾

2、重心；Olive 尾矩；尾%DNA；頭長；頭%DNA；頭光密度；頭重心；頭慣量；頭分布矩；尾/頭(長) 收費標(biāo)準(zhǔn)：全程服務(wù)（為保證結(jié)果客觀、科學(xué)、經(jīng)得起驗證，不提供單項服務(wù)）鋪片-裂解-解旋-電泳-干片-染色-熒光顯微鏡熒光激發(fā)-ccd成像-專用分析軟件分析-數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果 十個樣品以內(nèi)：2000元；十個樣品以上的部分，按每增加一個樣品，加收100元。2. 圖像分析：溴化乙啶染色-熒光顯微鏡熒光激發(fā)-ccd成像-專用分析軟件分析-數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果 十個樣品以下：500元；10個樣品以上，每增加一個樣品，加收20元 彗星試驗的應(yīng)用 1遺傳毒性試驗 彗星試驗是一系列評定新藥和其它化學(xué)物安全性的標(biāo)

3、準(zhǔn)試驗。被廣泛用于體外實驗；組織和白細胞可以被分解為單細胞懸液，提供了實驗材料。通常我們用形式簡單的彗星試驗來檢測DNA斷裂，增高的敏感性以及作用機制的附加信息由于用內(nèi)切酶來測定特定類型的損害而增加。同樣也可在細胞培養(yǎng)系統(tǒng)評價遺傳毒性，可單純用這一系統(tǒng)或者與可為化學(xué)物代謝為活性形式提供酶類的肝微粒體S9片段的結(jié)合來檢測。另一方面是其化學(xué)保護作用的研究：例如彗星試驗特別適合于植物化學(xué)物保護細胞免受遺傳毒性刺激的研究。2生態(tài)學(xué)監(jiān)測 合適的生物可以和彗星試驗聯(lián)合，作為有遺傳毒物污染環(huán)境的生物傳感器。這項工作還處于初級階段，但已有海生物如貽貝、甚至蚯蚓和鼠的相關(guān)報道。3人類研究 彗星試驗完美地適合人類

4、研究，因它不需要放射性標(biāo)記，或其它有害的操作，并可被用于易獲得的細胞（正常白細胞）。3.1 生物監(jiān)測 應(yīng)用包括遺傳毒性物質(zhì)或射線職業(yè)暴露的監(jiān)測；與各種人類疾病有關(guān)的氧化應(yīng)激的評定；和吸煙有關(guān)的DNA損傷的檢測。一般情況下，盡管可在暴露組和對照組發(fā)現(xiàn)顯著差異，但每組的損傷水平都有大的個體差異，如同飲食、應(yīng)激和感染引起的個體差異，所以，試圖用彗星試驗結(jié)果來分析某些疾病如癌癥的個體危險度是不成熟的，也是不合理的。3.2 營養(yǎng)研究 彗星試驗是在人類DNA損傷水平研究營養(yǎng)素/微營養(yǎng)素效用的完美方法。飲食中脂類含量的不同導(dǎo)致淋巴細胞中DNA氧化損傷的改變多不飽和脂肪酸能使其增加。另一方面，體內(nèi)供應(yīng)抗氧化物

5、或富抗氧化物食物的保護效應(yīng)，很容易在淋巴細胞中被記錄，表現(xiàn)為內(nèi)源性堿基氧化的減少或?qū)w外過氧化氫誘導(dǎo)損傷敏感性的降低。3.3 診斷 一些病例可以用彗星試驗作為輔助診斷方法。Nijmegen斷裂綜合征是和遺傳不穩(wěn)定性和腫瘤易患性有關(guān)的常染色體隱性疾病?？梢酝ㄟ^淋巴細胞彗星中異常高的斷鏈水平來識別其雜合子。3.4評定背景損傷水平 DNA堿基氧化損傷是癌癥的一個可能病因，然而我們并不能得知存在的損傷量的多少。人類DNA中8-羥基鳥嘌呤含量的測定相差3-4個數(shù)量級。GC-MS 和HPLC+電化學(xué)檢測提供的高數(shù)值受樣品準(zhǔn)備過程中鳥嘌呤氧化的一系列假象的影響：限制氧化的可能性使測定值下降。彗星試驗和FPG

6、用于定量結(jié)果表明每106鳥嘌呤出現(xiàn)8-羥基鳥嘌呤的頻率約為0.5，低于HPLC測定的最低水平幾倍。4DNA修復(fù)檢測 奇怪的是，我們對個體間DNA修復(fù)能力的差異知之甚少，盡管它是個體腫瘤易感性的重要決定因素。迄今為止，還沒有一個合適的，敏感的方法可被運用，但彗星試驗將填補這一空缺。1 細胞修復(fù) 理論上講，檢測修復(fù)能力的可靠方法是刺激細胞使DNA損傷，然后檢測其損傷消除的速度。因此，可用電離輻射或過氧化氫處理淋巴細胞，然后重接斷裂；或用堿基損傷劑處理后培養(yǎng)，在凝膠上用合適的核酸內(nèi)切酶可檢測存在的損傷。我們發(fā)現(xiàn)淋巴細胞用過氧化氫處理后斷裂重接的速度很慢。并且血液新鮮分離細胞急性暴露于大氣氧時會導(dǎo)致大

7、量的額外損傷，這將嚴(yán)重的影響分析結(jié)果。2 體外修復(fù)檢測 與傳統(tǒng)的酶聯(lián)彗星試驗相反，細胞提取物的修復(fù)活性作為一種替代方法，可用于體外檢測。細胞用任何一種合適的損傷劑處理以檢測損傷，例如，用UV輻射或光敏劑加可見光誘導(dǎo)堿基氧化，由細胞如淋巴細胞制備簡單的細胞提取物可通過以下步驟：冷凍、解凍、加Triton X-100以及離心去除細胞殘屑，以凝膠包埋類核的形式準(zhǔn)備損傷DNA底物，然后把底物與提取物混合，斷裂積聚的速度表明提取物切除損傷點的能力。 5 彗星試驗在人群研究和動物試驗中運用的使用性研究 彗星試驗非常適合于分子流行病學(xué)和動物試驗中的應(yīng)用，但必須考慮到它的可靠性,使其達到真正的定量。5.1 研

8、究設(shè)計 人群研究要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的流行病學(xué)研究來設(shè)計。為確定研究群體的大小要求進行計算。必須進行試驗性研究以估計個體間或個體內(nèi)所測損傷類型變異的范圍。5.2 彗星試驗的標(biāo)準(zhǔn)化 分析時應(yīng)包括標(biāo)準(zhǔn)，例如，從不同個體中收集的淋巴細胞可被集中、分份凍結(jié)，需要時再溶解。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)每次都給出相似的損傷測量值，有偏差則警示檢測的某些方面發(fā)生改變。 5.3 淋巴細胞的儲存 試驗所用的淋巴細胞樣品可在液氮中凍結(jié)保存數(shù)月。但是，細胞必須懸浮在介質(zhì)中以保持生存率（對人淋巴細胞，要求90%胎牛血清/10%DMSO），必須緩慢冷凍小于或等于1/分鐘；將裝有細胞懸液的小瓶放如泡沫聚苯乙烯盒，-80冰箱過夜，然后投入液氮長期保存。5

9、.4 細胞生存率檢測 不管是新鮮細胞還是復(fù)蘇細胞，細胞的完整性可通過臺盼藍染色來檢測，應(yīng)大于90%，過高的損傷背景和差的細胞質(zhì)量有關(guān)；但我們也見過，即使有50%的細胞出現(xiàn)膜損傷，也可發(fā)現(xiàn)可接受的低的損傷背景水平。5.5 電泳后凝膠的儲存 彗星試驗后馬上給玻片打分是做不到的，如果在普通玻璃而不是磨沙玻璃上準(zhǔn)備凝膠，它們就可被風(fēng)干并無限期保存。干的凝膠比新鮮凝膠容易打分，因為所有的彗星都在同一水平面，不需不停的重調(diào)焦距。5.6 統(tǒng)計分析 可在不同水平進行。例如，凝膠可根據(jù)不同彗星記錄的損傷水平進行分析，也可根據(jù)它們的分布方式進行分析。或者，我們可致力于對同一樣品重復(fù)測定的CV值的分析。但當(dāng)我們分析人類或動物實驗中組間差異或處理效應(yīng)的時候，我們感興趣的是每一個體的