青梅莖中巖白菜素的提取工藝研究

1、青梅莖中巖白菜素的提取工藝研究                   作者：莫崢嶸 蔡仁文 李玖慧 陳光英 韓長(zhǎng)日【摘要】  目的研究青梅莖中提取巖白菜素的最佳工藝。方法以巖白菜素含量為指標(biāo)，比較冷浸提取、超聲提取、回流提取3種方法提取物中巖白菜素含量。并以正交實(shí)驗(yàn)確定回流提取的最佳工藝。結(jié)果3種提取方法中回流提取的提取物中巖白菜素含量最高，正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件為：料液比為1：15，提取時(shí)間為1.5 h，提取次數(shù)

2、1次。結(jié)論在此最佳參數(shù)組合下，巖白菜素的含量為0.23%。 【關(guān)鍵詞】  青梅； 巖白菜素； 提取工藝Abstract：ObjectiveTo study the best extraction technology of bergenin from the stem of Vatica Mangachpoi Blanco growing in Hainan.MethodsThe cold-soaked extracting,ultrasonic extraction and heat reflux extraction technologies were respectively

3、used for extraction of bergenin. According to the orthogonal design,the optimum reflux extraction was sought through experimental investigation.ResultsThe optimum parameters of extracting bergenin were as follows:extracting for 1.5 hours,one time,and 1:15 of the ratio of material and solvent.Conclus

4、ionThe yielding content of bergenin was 0.23% at the condition of optimum parameters.Key words： Vatica mangachpoi Blanco;   Bergenin;   Extraction technology   青梅Vatica mangachpoi Blanco系龍腦香科(Diptercocarpaceae)青梅屬(Vatica genus)植物，主要分布于海南保亭、三亞、東方、白沙、樂(lè)東、萬(wàn)寧和瓊中等地1。在民間，海南青梅葉

5、長(zhǎng)期用作殺菌消毒、治療肝炎及提取中藥龍腦香。   通過(guò)對(duì)青梅莖的有效成分的提取、分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定，確定青梅中含有巖白菜素(bergenin ) 2。巖白菜素主要作用是止咳祛痰，但近年的藥理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)巖白菜素還具有抗炎、護(hù)肝、抗?jié)儭⑻岣呙庖叩茸饔?。陳光英等4用高效液相色譜法測(cè)定青梅莖皮中巖白菜素的含量，其含量為0.8%。   由于青梅莖中含有大量的巖白菜素，而青梅莖中巖白菜素的提取工藝研究還未見(jiàn)報(bào)道，因此，為了充分利用青梅藥用植物，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)青梅莖巖白菜素的提取工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和比較，以期優(yōu)化、篩選出理想的提取工藝。1  器材 

6、60; 大連依利特公司UV230紫外檢測(cè)器，P230高壓恒流泵（雙泵），EC2000工作站；日本SHIMADZU十萬(wàn)分之一天平；甲醇為色譜純, 水為重蒸水, 其余試劑為分析純；巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)自蕪湖爾塔醫(yī)藥科技有限公司）；青梅藥材采自海南萬(wàn)寧，經(jīng)海南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鐘瓊芯副教授鑒定為龍腦香科青梅屬植物Vatica mangachpoi Blanco，樣本保存在海南師范大學(xué)熱帶藥用植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。2  方法2.1  色譜條件4色譜柱：Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 m)；流動(dòng)相：A：0.5% 冰乙酸水溶液（V/V），B：甲醇。

7、梯度洗脫，洗脫條件0 min(A:80,B:20 V/V)；10 min(A:65,B:35 V/V)；25 min(A:64,B:36 V/V)；30 min(A:0,B:100 V/V)；42 min(A:20, B:80 V/V)；流速：0. 4 ml· min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm；柱溫：30 ；進(jìn)樣量：10 l。在此色譜條件下，青梅莖中巖白菜素樣品與巖白菜素對(duì)照品相比較，保留時(shí)間基本一致，在274 nm波長(zhǎng)處其它色譜峰干擾小，青梅莖巖白菜素得到較好的分離而且含量較高，見(jiàn)圖1和圖2。圖1  巖白菜素對(duì)照品的HPLC圖譜（略）2.2  標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制精密

8、稱(chēng)取干燥至恒重的巖白菜素對(duì)照品10 mg , 置于25 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成濃度為0.4 mg·ml-1 的儲(chǔ)備液。以此為母液配制濃度為0.2 mg·ml-1溶液；再以0.2 mg·ml-1為母液，配制濃度為0.1 mg·ml-1的溶液；依次類(lèi)推，配制成濃度分別為0.05 ，0.02 5，0.012 5 mg·ml-1的標(biāo)液4。精密吸取不同濃度的對(duì)照品溶液各10l，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，則回歸方程為Y3961.7X-103.4，R2=0.999 1，結(jié)果表明，在0.1

9、254 g之間，峰面積與進(jìn)樣量之間的線(xiàn)性關(guān)系良好。該定量分析方法可用于青梅莖提取液中巖白菜素含量的檢測(cè)分析。圖2  青梅莖巖白菜素樣品的HPLC圖譜（略）2.3  不同提取方法提取物中巖白菜素的含量比較5稱(chēng)取青梅莖粗粉1.0 g 3份，分別加15倍量95的乙醇，用冷浸提取法冷浸兩次，1天/次；超聲提取法提取兩次，20 min/次；回流提取法提取兩次，1.5 h/次。分別合并兩次提取液，過(guò)濾，濃縮定容置10 ml容量瓶,備用。按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定巖白菜素含量，結(jié)果表明，用回流提取法得到的提取物巖白菜素含量最高。所以以下實(shí)驗(yàn)選擇回流提取法進(jìn)行提取條件優(yōu)化篩選。2.4

10、60; 回流提取法提取條件優(yōu)化篩選68         表1  回流提取法多因素正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（略）表2  L9(34) 回流提取法多因素正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（略）以正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選了乙醇回流提取青梅莖中巖白菜素的提取工藝，結(jié)果表明，各因素對(duì)提取效果的影響主次關(guān)系為提取料液比(A) 提取次數(shù)（B）提取時(shí)間（C），確定最佳提取工藝為：提取料液比1:15， 提取次數(shù)1，提取時(shí)間1.5 h。2.5  最佳工藝驗(yàn)證稱(chēng)取青梅莖粗粉1.0 g，平行3份。按上述正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選的最佳工藝條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表

11、3。表3  最佳工藝條件驗(yàn)證（略）3次重復(fù)最佳工藝驗(yàn)證表明，本工藝設(shè)計(jì)合理，穩(wěn)定可行。3  結(jié)論   本實(shí)驗(yàn)確定了回流提取法提取青梅莖巖白菜素的工藝條件。單因素實(shí)驗(yàn)最佳條件為：60%乙醇為提取溶劑、提取料液比為1:15，提取次數(shù)為1，提取時(shí)間為1h。正交實(shí)驗(yàn)最佳工藝為：提取料液比1:15，提取次數(shù)1，提取時(shí)間1.5 h。在優(yōu)化條件篩選時(shí)，以正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。   青梅莖中巖白菜素的含量為0.23%，而青梅莖皮中巖白菜素的含量為0.8%，主要是由于青梅莖比青梅莖皮含有較多的纖維素所致。【參考文獻(xiàn)】  1 吳德鄰. 海南及廣東沿海島嶼植物名錄M.北京：科學(xué)出版社,1994 ,58.2 莫崢嶸，陳光英，韓長(zhǎng)日，等.青梅莖的化學(xué)成分研究（）J.中山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007， 46(2)：126.3 孫 敏，師 冰，徐榕雪.巖白菜素提取工藝制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究綜述J.云南中醫(yī)中藥雜志， 2005，26(5)：56.4 陳光英，蔡寶華，吳曉鵬，等.HPLC法測(cè)定青梅莖皮中巖白菜素J.中草藥，2008，39(5):776.5 張師愚，王永平，張 晨，等.