色譜定量基礎(chǔ)

1、HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation數(shù)據(jù)處理參數(shù)峰處理參數(shù)：SLOPE，WIDTH，DRIFT， T.DBL峰積分標(biāo)記：E，S，T，V，L定性參數(shù)：時間窗，時間帶定量參數(shù)：METHOD，ID表顯示參數(shù)：ATTENHPLC Business DeptShimadzu Corporation判斷峰起點濾除低平噪聲（如蛇行等）SLOPE的確定：通過SLOPE TEST進(jìn)行，測定時間為 10倍WIDTH的時間。默認(rèn)值： 填充柱：200 毛細(xì)管柱：500峰處理參數(shù)SLOPE：10倍Widt

2、h的所有信號的總和，用于：HPLC Business DeptShimadzu Corporation峰處理參數(shù)去除高頻噪聲數(shù)據(jù)采集速度，WIDTH/10采一次數(shù)據(jù)控制S.TEST時間，斜率測試時間為10WIDTH 注：填充柱，峰寬：5 S 毛細(xì)柱，峰寬：23 SWIDTH：半高峰寬，用于：HPLC Business DeptShimadzu Corporation峰處理參數(shù)DRIFT：判斷相鄰峰的積分方式注：1）設(shè)定值為0時，積分儀將自動判斷 2）如DRIFT與基線至峰谷連線較接近時，積分將 不穩(wěn)定，導(dǎo)致面積值變化較大，需加以注意。HPLC Business DeptShimadzu Cor

3、poration峰處理參數(shù) 設(shè)定值為0時，積分儀自動判斷； 不使用時可設(shè)為1000。 T.DBL：峰展寬一倍所需要的時間舉例：T.DBL10min，則 Rt10min時，峰寬變?yōu)?WIDTH， 斜率變?yōu)镾LOPE/2 Rt20min時，峰寬變?yōu)?WIDTH， 斜率變?yōu)镾LOPE/4HPLC Business DeptShimadzu Corporation積分峰標(biāo)記（MK）E：超量程峰S：拖尾峰（一般指溶劑峰）T：尾上峰，作過拖尾處理的峰V：與前鄰峰垂直分割L：前沿峰 標(biāo)記：標(biāo)記：HPLC Business DeptShimadzu Corporation定性參數(shù)保留時間允許誤差：時間窗 ，相

4、對法 設(shè)定簡單，但所測組分保留時間跨度大時，不易設(shè)定時間帶，絕對法 設(shè)定較繁，需逐一設(shè)定HPLC Business DeptShimadzu Corporation定量參數(shù)校正級別單級校正多級校正HPLC Business DeptShimadzu Corporation對每一組分僅做一級校正（可以是多次分析同一濃度的標(biāo)樣，取其平均值）組分響應(yīng)值大小隨濃度變化而呈線性變化時才可使用單級校正單級校正曲線必須通過原點單級校正HPLC Business DeptShimadzu Corporation制備一個混合標(biāo)樣或各組分單獨標(biāo)樣，濃度應(yīng)盡可能接近實際樣品中各組分的濃度分析標(biāo)樣建立校正表（ID表）

5、分析待測樣品并使用校正表進(jìn)行校正計算，得到待測樣品中各組分的濃度需要時進(jìn)行再校正單級校正過程HPLC Business DeptShimadzu Corporation多級校正多級校正對每一組分至少作兩個不同濃度水平的校正當(dāng)組分響應(yīng)值隨濃度變化而呈非線性變化時須使用多級校正校正曲線可以不通過原點多級校正HPLC Business DeptShimadzu Corporation多級校正多級校正制備一系列不同濃度的混合標(biāo)樣，其濃度范圍應(yīng)包含實際樣品中各組分的濃度依次分析各級工作標(biāo)樣建立多級校正校正表（ID表）分析待測樣品并使用校正表進(jìn)行校正計算，得到樣品中各組分的濃度需要時進(jìn)行再校正多級校正過程

6、：HPLC Business DeptShimadzu Corporation定量參數(shù)面積歸一化法校正面積歸一化法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法校正方法HPLC Business DeptShimadzu Corporation面積歸一化法公式：%100%AiAiCi優(yōu)點：1）無需做校正，簡便，快速2）進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求缺點：1）所有組分都流出且被檢測到2）所有組分的檢測靈敏度都相同HPLC Business DeptShimadzu Corporation校正面積歸一化法公式：式中：Fi為校正因子， Fi濃度（含量）/面積%100)(%AiFiAiFiCi優(yōu)點： 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求缺點：1）所有組分都流出且被檢測

7、到2）所有組分都需作校正HPLC Business DeptShimadzu Corporation外標(biāo)法公式：iFiFAiCi21優(yōu)點：1）不需所有峰都流出或被檢測到2）只對所測組分作校正3）可以校正檢測器的非線性響應(yīng)（多級校正）缺點：1）進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確2）儀器必須有良好的穩(wěn)定性HPLC Business DeptShimadzu Corporation內(nèi)標(biāo)法公式：ISISCiFiFAAiCi)(21優(yōu)點：1）進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求2）只對所測組分作校正3）可以校正檢測器的非線性響應(yīng)（多級校正）缺點：1）必須在樣品中加一內(nèi)標(biāo)組分2）操作較為繁瑣HPLC Business DeptShimadzu Corporation內(nèi)標(biāo)法樣品中無該組分色譜性質(zhì)穩(wěn)定化學(xué)性質(zhì)與所測組分相似不會與樣品發(fā)生反應(yīng)內(nèi)標(biāo)物濃度應(yīng)適當(dāng)，峰面積比值在0.71.3范圍內(nèi)選擇內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)：HPLC Business DeptShimadzu CorporationNo Calculation： 只畫圖，不計算Normalization： 面積歸一化法Corrected Normalization：校正面積歸一化法Internal Standard： 內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)峰ID設(shè)為1號Extern