非發(fā)酵菌的鑒定

1、非發(fā)酵菌的鑒定定義：非發(fā)酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厭氧、不發(fā)酵糖類，能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的革蘭陰性桿菌。主要存在外界環(huán)境中，種類繁多，多為條件致病菌或醫(yī)院內(nèi)感染菌。關(guān)于臨床標(biāo)本中NFB的意義，在混合培養(yǎng)物中見到時(shí)，必須考慮到患者的情況和標(biāo)本來(lái)源。一般來(lái)說(shuō)，以純培養(yǎng)方式分離自正常無(wú)菌部位的NFB，一定要鑒定到種并進(jìn)行抗生素敏感性試驗(yàn)。 目前CLSI中，K-B法除了假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、嗜麥芽窄食單胞菌和洋蔥伯克霍爾德菌有抗生素敏感性實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)外，其他非發(fā)酵菌沒有K-B法的標(biāo)準(zhǔn)。一、鑒定原則：1 血、無(wú)菌部位（腦脊液、胸水等），特殊病人，少見菌可用API-20NE或V

2、IKET TWO-GN 卡鑒定。2 其它部位如呼吸道標(biāo)本、臨床常見的非發(fā)酵，根據(jù)菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、抗生素耐藥譜等綜合分析手工法鑒定即可。二、非發(fā)酵性菌基本分類：假單胞菌屬 Pseudomonas spp.（20多個(gè)臨床上重要菌種中，銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌等最常見。）不動(dòng)桿菌屬 Acinetoacter spp.（最常分離的種鮑曼不動(dòng)桿菌、魯氏不動(dòng)桿菌、溶血不動(dòng)桿菌等）窄食單胞菌 Stenotrophomonas spp.（嗜麥芽窄食單胞菌、非洲嗜麥芽窄食單胞菌）伯克霍爾德菌 Burkholderia spp.（洋蔥伯克霍爾德菌、唐菖蒲伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌等）鞘氨

3、醇單胞菌屬 Sphingomonas spp.（少動(dòng)鞘氨醇桿菌）無(wú)色桿菌屬 Achromobacter spp.（木糖氧化無(wú)色桿菌）希瓦氏菌屬 Shewanella spp. （腐敗希瓦氏菌 海藻希瓦氏菌）產(chǎn)鹼菌屬 Alcaligenes spp.黃桿菌屬 Flavoacterium spp.莫拉菌屬 Moraxella spp.羅爾斯通菌屬 Ralstonia spp.食酸菌屬 Acidovorax spp.叢毛單胞菌屬 Comamonas spp.甲基桿菌屬 Methylobacterium spp.等還有一些未定名的菌群三、辨認(rèn)非發(fā)酵菌的基本要點(diǎn) 1. 分離培養(yǎng)基上的菌落有以下情況初步考

4、慮非發(fā)酵菌的存在 a.培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較差或中國(guó)藍(lán)上不生長(zhǎng)的陰性菌。（如艾肯菌屬、心桿菌屬、金氏桿菌屬）b.中國(guó)藍(lán)平板上為不發(fā)酵乳糖的菌落，氧化酶陽(yáng)性的高度懷疑非發(fā)酵菌。但并非所有的氧化酶陽(yáng)性的均為非發(fā)酵菌。如弧菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬、巴斯德菌屬等。c.革蘭陰性菌在三糖管上培養(yǎng)，底層和斜面均不變色，疑為非發(fā)酵菌。但容易受影響。2. 葡萄糖的利用 大部分非發(fā)酵菌生長(zhǎng)緩慢產(chǎn)生弱酸，而蛋白胨形成的產(chǎn)物即可升高培養(yǎng)基的PH值，中和非發(fā)酵菌產(chǎn)生的弱酸性產(chǎn)物。根據(jù)他的代謝特點(diǎn)，用氧化-發(fā)酵培養(yǎng)基鑒別分類該類菌。附：氧化-發(fā)酵葡萄糖培養(yǎng)基（O-F培養(yǎng)基）配方成分: 蛋白胨 0.8g 氯化鈉 2.0g 三水

5、磷酸氫二鉀 0.15g 葡萄糖 4.0g 瓊脂 1.1g 蒸餾水 400.0ml方法: 熱溶, 調(diào)PH7.1, 加入1%溴麝香草酚蘭酒精溶液1.2ml分裝, 8磅15分鐘, 備用.*（O-F培養(yǎng)基）蛋白胨與糖類比為0.2：1實(shí)驗(yàn)室中根據(jù)氧化發(fā)酵葡萄糖的情況發(fā)酵葡萄糖 發(fā)酵菌 腸桿菌科 弧菌科非發(fā)酵菌 氧化型 非氧化型 3動(dòng)力：鑒別分類的依據(jù)動(dòng)力陽(yáng)性的非發(fā)酵菌主要有：假單胞菌屬、窄食單胞菌、伯克霍爾德菌、無(wú)色桿菌屬、希瓦氏菌屬、產(chǎn)鹼菌屬、鞘氨醇單胞菌屬（18-22）甲基桿菌屬等動(dòng)力陰性的非發(fā)酵菌主要有：不動(dòng)桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬等4氧化酶試驗(yàn)：細(xì)胞色素氧化酶的產(chǎn)生與否鑒別分類氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性的

6、非發(fā)酵菌主要有：假單胞菌屬、伯克霍爾德菌、無(wú)色桿菌屬、希瓦氏菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬等 氧化酶試驗(yàn)陰性的非發(fā)酵菌主要有：不動(dòng)桿菌屬 、窄食單胞菌等5在中國(guó)蘭上生長(zhǎng)能力：一般在3524小時(shí)生長(zhǎng)良好，但有些需要3524小時(shí)后在室溫或30繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。6.色素：（常見菌）產(chǎn)黃色素的有：洋蔥伯克霍爾德菌、唐菖蒲伯克霍爾德菌、嗜麥芽窄食單胞菌、金黃桿菌屬、少動(dòng)鞘氨醇單胞菌屬等；產(chǎn)藍(lán)綠色素的有：Pae產(chǎn)熒光色素的有：Pae、惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌；產(chǎn)紫色色素的有：紫色色桿菌產(chǎn)紅棕色或淡紫色的有：腐敗希瓦氏菌四、實(shí)驗(yàn)室鑒定臨床常見的非發(fā)酵菌根據(jù)菌落形態(tài)、生化反應(yīng)和抗生素耐藥譜鑒定臨床常見非發(fā)酵菌。（

7、一）銅綠假單胞菌目前臨床分離率最高的非發(fā)酵菌. 天然耐多種抗生素. 易在呼吸道定植 菌落特征有三種典型菌落,黏液性菌落,粗造型菌落，侏儒型菌落鑒定要點(diǎn)：葡萄糖氧化型菌、氧化酶陽(yáng)性、動(dòng)力陽(yáng)性，典型菌落為圓形、邊緣呈傘狀伸展、扁平濕潤(rùn)、有金屬光澤、有特殊味道的棕色或綠色的菌落。銅綠假單胞菌與產(chǎn)生熒光菌群的主要區(qū)別單鞭毛叢鞭毛水解明膠42生長(zhǎng)銅綠假單胞菌+-/+熒光假單胞菌-+-惡臭假單胞菌-+-（二）不動(dòng)桿菌不動(dòng)桿菌屬 ：（最常分離的種為鮑曼不動(dòng)桿菌、魯氏不動(dòng)桿菌、溶血不動(dòng)桿菌等）鑒定要點(diǎn)：葡萄糖氧化型菌、氧化酶陰性、無(wú)動(dòng)力，菌落為圓形、隆起、光滑邊緣整齊、在中國(guó)蘭上呈蘭色或粉白色，硝酸鹽陰性。

8、鮑曼不動(dòng)桿菌與其它常見不動(dòng)桿菌的主要區(qū)別生長(zhǎng)溶血CIT丙二酸鹽葡萄糖乳糖明膠444137鮑曼不動(dòng)桿菌+-+-溶血不動(dòng)桿菌-+-+/-+瓊氏不動(dòng)桿菌-+-+/-+-洛菲不動(dòng)桿菌-+-（三）嗜麥芽窄食單胞菌（曾用名嗜麥芽假單胞菌、嗜麥芽黃單胞菌）是重要的醫(yī)院獲得性感染病原體，臨床感染大部分都是醫(yī)院感染。鑒定要點(diǎn)：1菌落形態(tài)特點(diǎn)：呼吸道標(biāo)本為主，中國(guó)蘭上小、光滑濕潤(rùn)，血平板上有黃色色素。2生化反應(yīng)：革蘭陰性非發(fā)酵菌，氧化酶陰性，賴氨酸和DNA酶陽(yáng)性，有動(dòng)力，可快速氧化分解麥芽糖，。3耐藥表型：多重耐藥、天然耐亞胺培南，70-80%對(duì)復(fù)方新諾明有體外活性。（四）洋蔥伯克霍爾德菌鑒定要點(diǎn)：菌落形態(tài)特點(diǎn)：

9、最適生長(zhǎng)溫度30，有些菌株在35生長(zhǎng)較差、在含有鐵離子培養(yǎng)基（三糖鐵瓊脂）中黃色色素較明顯。生化反應(yīng)：革蘭陰性非發(fā)酵菌，氧化酶陽(yáng)性，賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性，有動(dòng)力，過氧化氫反應(yīng)遲緩。耐藥表型：多重耐藥、天然耐亞胺培南，對(duì)復(fù)方新諾明有體外活性。洋蔥伯克霍爾德菌與其他伯克霍爾德菌的主要區(qū)別氧化酶ONPG硝酸鹽精氨酸賴氨酸皺縮形菌落還原產(chǎn)氣類鼻疽伯克霍爾德菌+-+-+洋蔥伯克霍爾德菌+VV-+-唐菖蒲伯克霍爾德菌-+V-注意：類鼻疽伯克霍爾德菌有刺激性泥土味，可通過呼吸道傳播，實(shí)驗(yàn)室工作人員在鑒定時(shí)應(yīng)注意安全；它的生長(zhǎng)有特定的生態(tài)區(qū)域，存在于赤道南北緯20之間的土壤和不流動(dòng)的水中，主要在泰國(guó)和越南。實(shí)驗(yàn)室

10、報(bào)告時(shí)應(yīng)慎重。（五）希瓦氏菌屬希瓦氏菌屬包括腐敗希瓦氏菌、海藻希瓦氏菌兩種。鑒定要點(diǎn)：菌落形態(tài)特點(diǎn)：圓形、凸起光滑的菌落、偶爾為黏液性、產(chǎn)生黃褐色色素。生化反應(yīng)：革蘭陰性非發(fā)酵菌，氧化酶陽(yáng)性，在三糖鐵中產(chǎn)生H2S ，是非發(fā)酵菌中唯一產(chǎn)H2S的菌。腐敗希瓦氏菌和海藻希瓦氏菌的主要區(qū)別.蔗糖麥芽糖葡萄糖核糖6.5%NaCl42生長(zhǎng)來(lái)源腐敗希瓦氏菌+V-牛奶,魚海藻希瓦氏菌-V+人注意:臨床中從人類分離的該菌屬以海藻希瓦氏菌為主（77%），但臨床中分離到的腐敗希瓦氏菌多與感染有關(guān)。五、API 20 NE 介紹 非腸道革蘭陰性桿菌鑒定系統(tǒng)可鑒定假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、黃桿菌屬、無(wú)色桿菌屬、產(chǎn)鹼桿菌屬、土壤桿菌屬、色桿菌屬、窄食單胞