活細(xì)胞提取和HPLC - MS分析預(yù)測中藥生物活性成分

1、活細(xì)胞提取和HPLC - MS分析預(yù)測中藥生物活性成分 李松林 一 ，李平， 一 ，良閎奢嗯 一 ，瑞燕麗 一 ，連聞柒 一 和陸雍喳嗯 一一 藥科大學(xué)重點實驗室中國近代中國藥品，藥學(xué)教育教育部中華人民共和國和系，南京210039，中國收到2005年9月3日; 修訂了30件2005年12月 接受06年1月5日。 可在線2006年2月20號。 摘要一個新的戰(zhàn)略，提出了在傳統(tǒng)的生物活性成分，用于預(yù)測中藥（中醫(yī)）利用活細(xì)胞提取和高效液相色譜二極管陣列檢測質(zhì)譜法（HPLC - DAD的- MS）分析。 這個假設(shè)是，當(dāng)細(xì)胞一起孵育減少中藥提取物，成分中的潛在活性中醫(yī)應(yīng)該有選擇的細(xì)胞結(jié)合，在懸架和細(xì)胞組分

2、的相對濃度相結(jié)合的培養(yǎng)基應(yīng)，而細(xì)胞結(jié)合部分將提取物中檢出變性細(xì)胞。 結(jié)合部分的細(xì)胞的身份，可確定的HPLC - DAD的質(zhì)譜分析。 使用該方法，所用的中藥活性成分的潛在當(dāng)歸補血，常用湯 貧血 ，它的成分，黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸和黃芪的 內(nèi)皮細(xì)胞 ，進(jìn)行了調(diào)查。 六化合物的提取物湯當(dāng)歸補血檢測元件的結(jié)合選擇性 內(nèi)皮細(xì)胞 ，其中兩個是由藥材貢獻(xiàn) 當(dāng)歸 當(dāng)歸，黃芪及四個基數(shù)。 生物活性化合物的潛在身份的四個六分別鑒定為ononoside， 毛蕊異黃酮 ，三丁基苯酞和 藁本內(nèi)酯 的HPLC - DAD的質(zhì)譜分析。 結(jié)果表明，該方法可用于預(yù)測候選人中醫(yī)藥的生物活性。關(guān)鍵詞： 活細(xì)胞萃取高效液相色譜法，二極管陣

3、列質(zhì)譜;預(yù)測生物活性成分;當(dāng)歸補血湯，黃芪，黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸文章概要1。 簡介2。 實驗2.1。 中藥材和化學(xué)品 2.2。 樣品制備 2.3。 細(xì)胞培養(yǎng) 2.4。 內(nèi)皮細(xì)胞提取 2.5。 高效液相色譜分析3。 結(jié)果與討論3.1。 生物活性當(dāng)歸補血湯候選人和血管內(nèi)皮細(xì)胞中的成分為 3.2。 當(dāng)歸補血湯鑒定候選人的生物活性和血管內(nèi)皮細(xì)胞的成分為4。 結(jié)論致謝參考文獻(xiàn)1。 簡介傳統(tǒng)中藥）中藥（是中國傳統(tǒng)的天然治療的醫(yī)療理念的指導(dǎo)下使用的補救措施，并已訂明中醫(yī)界在中國及全球華人對幾千年的歷史。 中醫(yī)主要是結(jié)合使用，其中復(fù)合公式將產(chǎn)生協(xié)同作用或拮抗作用 1 。 在大多數(shù)情況下，中藥活性成分沒有或只是部分

4、而聞名。 因此，篩選和分析中藥成分的生物活性是非常重要的，不僅為闡明其治療原則，而且為他們的質(zhì)量控制。為尋找中藥活性成分的提取與傳統(tǒng)的程序是從中藥成分精制在體外或體內(nèi)藥理篩選，純化后的化合物。 雖然可能的化合物數(shù)量有限的中藥藥效負(fù)責(zé)，在生物活性化合物通常含有高達(dá)數(shù)百甚至不同的組件，這使得純化和生物活性成分的篩選非常困難的數(shù)千復(fù)雜混合物?；谶@一假設(shè)的活性成分應(yīng)該會出現(xiàn)在 血液 和 尿液中 適當(dāng)?shù)?血 濃度，Homma等人尿排泄，利率后，中醫(yī)藥管理局。 介紹了生物活性成分的中藥藥代動力學(xué)的概念把他們的研究發(fā)現(xiàn) 2 。 這的確是一個概率的策略與可吸收生物活性更高的發(fā)現(xiàn)候選人。 但不保證可吸收生物活

5、性的化合物。 現(xiàn)代藥理研究表明，藥物作用的一個重要步驟，是具有約束力的一些受體和（或）通道（或）酶， 細(xì)胞膜 和（或）細(xì)胞內(nèi)。 因此，有能力與細(xì)胞相互作用的藥物是非常重要的活動是為生物。 基于這一原則，一些方法稱為 細(xì)胞膜 色譜（CMC）的 3 和額親和層析（剛果） 4 ， 其中，固定化細(xì)胞包埋膜受體或抗體作為液體色譜固定相，分別混合開發(fā)的在線或化學(xué)藥物的研究和生物的迅速屏幕的候選人從復(fù)雜的分離和鑒定鉛藥物 3 ， 5 ， 6 ， 7 ， 8 和 9 。 最近，這些方法被聘用為有前途的方法從天然中藥有效篩選的先導(dǎo)化合物或候選藥物資源，包括 3 ， 5 ， 10 ， 11 和 12 。 然而，固

6、定化包埋生活受體或 細(xì)胞膜 等，很短（1天到1周） 3 ， 以及包封或固定程序必須適應(yīng)該種材料要分析和所用種凝膠基質(zhì) 13 。 此外，親和組件的交互或生物膜中西醫(yī)之間的兼容受體是很少的色譜分離。 此外，管委會不能直接連接到質(zhì)譜在洗脫溶劑，因為目前存在的鹽在高濃度的無機(jī)，中央軍委以致于難以保留一個重要組成部分的網(wǎng)上身份與闡發(fā)。最近，董等人。 14 提出了一種新的方法使用中藥活性成分的篩選和分析 細(xì)胞膜 萃取和高效液相色譜質(zhì)譜法（HPLC - MS）分析，這是成功地應(yīng)用于預(yù)測潛在的生物活性在多個化合物 當(dāng)歸 冬蟲夏草 同時進(jìn)行。 令人興奮的結(jié)果表明，該方法具有優(yōu)勢，中醫(yī)對常規(guī)方法進(jìn)行調(diào)查潛在的生物

7、活性成分：這種方法首先，通過篩選，化合物感興趣的數(shù)字相比減少將是極其中藥，在復(fù)雜的混合物的原，這將使進(jìn)一步調(diào)查更具成本效益;第二，高效液相色譜，質(zhì)譜分析，不僅化合物的分離高分辨率，但也有興趣的能力組件的身份鑒定的;第三，這種方法避免或固定程序的包封 細(xì)胞膜 ，其中專業(yè)，耗時而艱巨的工作。 又是如何的結(jié)果，如果裂解 細(xì)胞膜 是活細(xì)胞所替代，作為活細(xì)胞的情況下，都是該生物體細(xì)胞更多類似高于裂解 細(xì)胞膜 ，使細(xì)胞復(fù)合互動更加類似于在生物體，導(dǎo)致生物活性的概率很高的候選人。因此，在本研究中，提出了新的戰(zhàn)略生物活性成分的篩選和分析中藥使用活細(xì)胞提取和高效液相色譜二極管陣列檢測質(zhì)譜法（HPLC - DAD

8、的- MS）分析。 這個假設(shè)是，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞連同中藥提取物，化合物在生物活性的潛力中醫(yī)應(yīng)該有選擇結(jié)合起來，懸浮介質(zhì)的細(xì)胞結(jié)合成分的相對含量應(yīng)減少，細(xì)胞成分結(jié)合將提取物中檢出變性細(xì)胞。 結(jié)合部分的細(xì)胞的身份，可確定的HPLC - DAD的質(zhì)譜分析。 使用該方法，處方藥材的生物活性成分的當(dāng)歸補血湯，用結(jié)合了常用 當(dāng)歸 和黃芪當(dāng)歸（5:1，瓦特/瓦特）為 貧血 ，進(jìn)行了調(diào)查。2。 實驗2.1。 中藥材及化學(xué)品黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸和黃芪分別為采自中國岷縣縣和甘肅省，山西省渾源縣，并驗證李平教授。 阿魏酸 的產(chǎn)品獲得了中國在控制研究所生物制藥和（北京，中國）。 藁本內(nèi)酯 和 毛蕊異黃酮 的分離純化和黃芪

9、當(dāng)歸 當(dāng)歸和黃芪，分別在我們的實驗室。 參考化合物的身份所有這些均經(jīng)紅外光譜，質(zhì)譜， 1 H和 13 的C -核磁共振。 緩沖液A（pH值7.4）為5毫米 磷酸鈉 緩沖。 甲醇 的LC是購自江蘇科技Hanbon。 及技術(shù)。 有限公司（江蘇，中國）。 去離子水制備微孔毫秒使用的Q - Plus系統(tǒng)（純水，貝德福德，馬）。 所有其他試劑均為分析純。 所有溶劑和樣品用0.45微米的過濾，然后用尼龍膜。2.2。 樣品制備提取A ：30克黃芪混合粉末的：黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸（5:1，瓦特/瓦特）浸泡在240毫升75乙醇回流1小時，并為1小時，然后在去除溶劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空下40，殘渣溶解在30毫升緩沖液A和膜

10、過濾通過0.22微米，濾液作為提取樣品的HPLC - DAD的質(zhì)譜分析和活細(xì)胞。提取B ：二十五克黃芪粉末被視為藥材提取物A的程序為提取物C ：五克粉的藥材 當(dāng)歸 當(dāng)歸被視為程序提取答2.3。 細(xì)胞培養(yǎng)人 臍靜脈 內(nèi)皮細(xì)胞的 收獲，從 人 臍靜脈 用0.05 胰蛋白酶 ，0.02 EDTA的 和鍍了0.1，明膠涂層Dulbecco的改良Eagle的菜（流式細(xì)胞- Dickinson公司）在培養(yǎng)基（DMEM培養(yǎng)基）含20 胎牛血清 （ FBS的 ） 10微克L -1 堿性成纖維細(xì)胞生長因子 （ bFGF的 ），100區(qū)L -1 青霉素 （Sigma公司），100毫克升 -1 硫酸鏈霉素（Sigm

11、a公司）。 然后，5二氧化碳飽和濕度的細(xì)胞生長在一個 2 95的空氣在37 C的分離與0.125 胰蛋白酶 - EDTA的 和）繼代明膠涂層的聚酯片（250毫升，塑料供應(yīng)商在播種密度為2.0 10 6 3.0 10 6 每張。 這些細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，直到他們達(dá)到匯合（播種后2-3天），然后消化0.125 胰蛋白酶 。 離心后，在1000 克 2分鐘，沉積懸浮細(xì)胞與細(xì)胞提取緩沖液A的生活。2.4。 內(nèi)皮細(xì)胞 提取以上獲得 內(nèi)皮細(xì)胞 與1毫升混合提取物A分別置于37 C的6小時 受當(dāng)時離心1000 克 5分鐘，所得上清液質(zhì)譜分析，用0.45微米過濾膜進(jìn)行HPLC - DAD的-。 沉積的細(xì)胞洗滌毫升四

12、次2 PBS的 每個離心時間與隨后在1000克 5分鐘以去除可能非選擇性地結(jié)合組成部分。 被丟棄的洗脫液除了最后一個是MS為對比分析收集到的高效液相色譜。 沉積的 內(nèi)皮細(xì)胞 ，然后變性乙醇提取752毫升。 離心后，在1000 克 5分鐘，上清液用0.45m的過濾膜進(jìn)行HPLC - DAD的質(zhì)譜分析。 該細(xì)胞含緩沖液A是一個緩沖區(qū)替換為空白對照樣品準(zhǔn)備使用上述程序相同。 通過比較樣品與色譜提取收治了來自 內(nèi)皮細(xì)胞 與對照樣本，并分析物的峰面積有明顯下降（或）檢測提取物中細(xì)胞變性沉積被認(rèn)為是潛在的候選人當(dāng)歸活性補血湯對 內(nèi)皮細(xì)胞 。 同樣的程序進(jìn)行的提取物B和C，分別確定了當(dāng)歸補血湯峰有關(guān)的捐款。

13、2.5。 高效液相色譜法分析色譜分析，色譜儀在Agilent 1100系列液（安捷倫科技，帕洛阿爾托，加利福尼亞，美國），配備了雙泵，一個這樣的父親探測器Rheodyne7125i噴射閥用20L樣品回路，數(shù)據(jù)獲取和處理惠普化學(xué)工作站。 采用Zorbax ODS C18色譜柱（4.6毫米 250毫米的ID，5m）和以ZORBAX ODS C18柱保護(hù)柱（4.6毫米 12.5毫米的ID，5m）的聘用，柱溫為25 C時定 流動相：（一）0.5水溶液 醋酸 及（B） 甲醇 。 梯度洗脫條件為：0-10分鐘，2040B級; 10-40分鐘，40-65B級; 40-55分鐘，B的65-85，流速為1毫升/

14、分鐘，進(jìn)樣量為20L。 峰進(jìn)行了監(jiān)測，在254，280和320 nm處，分別為。高分辨率的質(zhì)譜分析，在Agilent G1969的LC / MSD的TOF系統(tǒng)（安捷倫科技）源配有噴霧。 數(shù)據(jù)分析被收購和Ver的LC - MS飛行時間軟件。 答：01.00（Agilent技術(shù)）和PE Sciex公司分析師qs的1.1。 的ESI源的操作條件為：毛細(xì)管溫度300，毛細(xì)管電壓3500伏;干燥氣體（不適用 2 ）流，9升/分;霧化器（不適用 2 ）的壓力，35督察。 全掃描數(shù)據(jù)進(jìn)行采集，從 米 / 50到MS 3000掃描模式。3。 結(jié)果與討論3.1。 生物活性當(dāng)歸補血湯的候選人，并組成其 內(nèi)皮細(xì)胞當(dāng)

15、歸補血decocotion，發(fā)現(xiàn)中國歷史上的東苑李靖遠(yuǎn)王朝的，是一個綜合處方配伍黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸（5:1，瓦特/瓦特），并已被用來治療 貧血 的數(shù)千名中醫(yī)在實踐中年。 體外藥理研究表明，結(jié)合本方提取物能抑制增強 內(nèi)皮細(xì)胞 通透性組胺誘導(dǎo)的 15 ， 促進(jìn)細(xì)胞增殖 人 臍靜脈 內(nèi)皮細(xì)胞 的表達(dá)，增加 細(xì)胞間粘附分子-1 在 人 臍靜脈 內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞 16 ， 但有關(guān)的生物活性成分仍然不得而知。補血nm的色譜圖320湯當(dāng)歸在都顯示在監(jiān)控 圖。 1 。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超過30峰，當(dāng)歸補血湯中檢測到目前的色譜條件下（ 圖1。 一個），其中五（峰1-5）分別與測定峰面積減小后，提取培養(yǎng)的 血管內(nèi)皮細(xì)胞 （

16、圖1。 乙）。 另一方面，警方在現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)五座山峰提取物變性 內(nèi)皮細(xì)胞 （ 圖1。 四），與對照樣品相同保留1-5倍，高峰，分別為（即無治療 內(nèi)皮細(xì)胞 ）當(dāng)歸補血湯（ 圖1。 甲）。 同時，無峰警方在現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)的第四洗脫液 內(nèi)皮細(xì)胞 （ 圖1。 丙）。 圖。 2 顯示或不當(dāng)歸補血湯的色譜的 內(nèi)皮細(xì)胞 治療（在280 nm處監(jiān)測 圖。二 A和B）和254納米（ 圖2。 C和D）。 可以發(fā)現(xiàn)，除了峰1-5，峰面積的減少與其他峰沒有明顯進(jìn)行了測定。 這些結(jié)果表明，至少有五個組成部分補血湯中當(dāng)歸提取物有相互作用與 血管內(nèi)皮細(xì)胞 。 和相互作用可以推斷非物理吸附，但生物選擇性裝訂，或滲透到 血管內(nèi)皮細(xì)胞 。

17、 因此，這些細(xì)胞相互作用的化合物可以被看作是潛在的生物活性補血湯當(dāng)歸候選人的 內(nèi)皮細(xì)胞 。全尺寸圖片 （16K）的圖。 1。 當(dāng)歸補血湯色譜監(jiān)測在320納米。 （一）當(dāng)歸補血湯提取物治療空白的緩沖液A;（二）提取當(dāng)歸補血湯治療與 血管內(nèi)皮細(xì)胞 ;（三）交存第四洗脫液 內(nèi)皮細(xì)胞 ;（四）變性提取物沉積 血管內(nèi)皮細(xì)胞 。文章內(nèi)查看全尺寸圖片 （18K金）圖。 2。 當(dāng)歸補血湯色譜監(jiān)測在280和254納米。 （A和C）：當(dāng)歸補血湯提取物治療，一個空的緩沖區(qū);（B和D）與提取當(dāng)歸補血湯治療 血管內(nèi)皮細(xì)胞 ：（A和B）在280 nm的監(jiān)督：（C和D）監(jiān)測254納米。文章內(nèi)查看黃芪 當(dāng)歸 當(dāng)歸和黃芪，補血

18、湯當(dāng)歸的成分，進(jìn)行了調(diào)查，當(dāng)歸補血湯相同的方式與上述當(dāng)歸補血湯峰，確認(rèn)捐款改變5面積。 所示 圖。 三 ，二峰（峰1和2）被確定為轉(zhuǎn)變峰地區(qū)藥材 當(dāng)歸 當(dāng)歸，其中有5個，同時保留時間分別為4和峰，當(dāng)歸補血湯（ 圖1。 甲）。 同樣，四峰（峰1-4）進(jìn)行分析的面積變化的黃芪藥材中峰（ 圖。4 ），其中有當(dāng)歸補血高峰在1-4，分別湯相同保留時間（ 圖1。 甲） 。 這些結(jié)果表明，當(dāng)歸補血湯3（峰1，2和 圖1。 甲）分別為（出資峰一，二，三，黃芪分別藥材 圖。4 ），而峰4當(dāng)歸補血湯（ 圖1。 A）的基數(shù)貢獻(xiàn)的高峰1 當(dāng)歸 當(dāng)歸（ 圖。3 ）和湯（當(dāng)歸補血峰值5 圖1。 A）的貢獻(xiàn)都藥材峰2 當(dāng)歸

19、 當(dāng)歸（ 圖。3 ）和峰值4對黃芪（基數(shù) 圖。4 ）。全尺寸圖片 （十四K）圖。 3。 藥材的色譜 當(dāng)歸 當(dāng)歸監(jiān)測在320納米。 （一）中藥提取物 當(dāng)歸 當(dāng)歸治療空白的緩沖液A，（乙）中藥提取物 當(dāng)歸 與當(dāng)歸治療 內(nèi)皮細(xì)胞 ;（三）交存第四洗脫液 內(nèi)皮細(xì)胞 ;（四）提取物變性沉積 內(nèi)皮細(xì)胞 。文章內(nèi)查看全尺寸圖片 （1.7萬）圖。 4。 黃芪藥材的色譜監(jiān)測在320納米。 （一）中藥黃芪提取物治療空白的緩沖液A;（二）提取物黃芪治療 內(nèi)皮細(xì)胞 ;（三）交存第四洗脫液 內(nèi)皮細(xì)胞 ;（四）提取物變性沉積 內(nèi)皮細(xì)胞 。文章內(nèi)查看3.2。 當(dāng)歸補血湯鑒定的生物活性成分的候選人和其 內(nèi)皮細(xì)胞直至目前為止，

20、至少有五個類型的化合物，即分別報告了其成分，主要成分為當(dāng)歸補血湯或 多糖 ，黃酮類化合物（如ononoside和 毛蕊異黃酮 ），苯酞（如 藁本 和三丁基苯酞），皂甙（如黃芪甲苷），酚類（如 阿魏酸 ）等 17 ， 18 ， 19 ， 20 ， 21 和 22 。 高效液相色譜二極管陣列質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是用來闡明當(dāng)歸補血湯對身份的生物活性候選人 內(nèi)皮細(xì)胞 。 改變峰的身份以地區(qū)為證實了該化合物的保留時間比較和MS數(shù)據(jù)的引用與可用，或文獻(xiàn)，在。在黃芪當(dāng)歸補血湯圖譜和中藥，以及可供參考化合物 阿魏酸 ， 藁本內(nèi)酯 和 毛蕊異黃酮 在320 nm的監(jiān)測都顯示在 圖。 5 和 圖。 6 。 總離子色譜當(dāng)歸

21、補血湯（議會）中顯示的是 圖。 7 。 轉(zhuǎn)變峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)的五個地區(qū)是總結(jié) 表1 。 中藥生物活性貢獻(xiàn)的候選人峰2（5 當(dāng)歸 湯（當(dāng)歸），當(dāng)歸補血 圖1。 A）的明確確定為 毛蕊異黃酮 和 藁 通過數(shù)據(jù)比較，保留時間和質(zhì)譜化合物的基準(zhǔn)，而1和峰四是初步文獻(xiàn)指派為ononoside和3 -丁基苯酞，通過比較它們與海量數(shù)據(jù) 18 ， 19 ， 20 和 21 （ 圖8。 ）， 但峰3，只有元素組成和分子量進(jìn)行了計算，其身份仍舊是個澄清。 不幸的是，信號不敏感5足夠的高峰鑒定藥材黃芪出資在目前的HPLC - DAD的質(zhì)譜條件。全尺寸圖片 （1.2萬）圖。 5。 化合物色譜當(dāng)歸補血湯及可供參考監(jiān)測在32

22、0納米。 （一）提取當(dāng)歸補血湯;（二） 藁 ;（三） 阿魏酸 。文章內(nèi)查看全尺寸圖片 （1.3萬）圖。 6。 黃芪藥材及可供參考化合物在320 nm處的色譜監(jiān)測。 （一）提取的黃芪和（乙）calycosine。文章內(nèi)查看全尺寸圖片 （8K）的圖。 7。 總離子色譜（議會）在當(dāng)歸補血湯：（一）積極模式及（b）反模式。文章內(nèi)查看表1。 補血湯當(dāng)歸質(zhì)譜數(shù)據(jù)具有生物活性的五個候選人 內(nèi)皮細(xì)胞 山頂沒有。 離子（+噴霧） 離子（-噴霧） 元素組成 錯誤 一 （百萬分之一） DBE b 身份 一431.1338 M+ H條 +465.0957 M+氯 - 22 22 90.3268（+）12Ononosi

23、de2285.0764 M+ H條 +283.0631 M+氯 - 16 12 52.2795（+）11Calycosine三269.0842 M+ H條 +267.0687 M- H條 - 16 12 41.7367（+）11268.0766（兆瓦，大）4191.1068 M+ H條 +- 12 14 20.7519（+）6三丁基苯酞5191.1068 M+ H條 +- 12 14 20.7519（+）6藁全尺寸表一（+）計算由正離子。b雙鍵的等價性。 文章內(nèi)查看全尺寸圖片 （21K條）圖。 8。 潛在的生物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸補血湯。文章內(nèi)查看據(jù)報道， 升 - 3 -丁基苯酞既可以

24、增加NO產(chǎn)量 牛 腦 血管內(nèi)皮細(xì)胞 和 牛 主動脈 內(nèi)皮細(xì)胞 ，并選擇性地增加產(chǎn)量依前列醇 牛 主動脈 內(nèi)皮細(xì)胞 23 。 毛蕊異黃酮 可保護(hù) 血管內(nèi)皮細(xì)胞 由 缺氧 引起的障礙通過增加細(xì)胞內(nèi)的能量障礙，促進(jìn)再生資源的cAMP水平，以及改善 細(xì)胞骨架 重構(gòu) 24 。 這些結(jié)果表明，三丁基苯酞和 毛蕊異黃酮 確有療效的生物活性有關(guān)的當(dāng)歸補血湯治療 貧血的 治療，并以高概率這種結(jié)合的生物活性成分的處方，這意味著這一新的相應(yīng)建議的策略可能是一個有用的途徑快速篩選和分析潛在的候選人中醫(yī)藥生物活性。4。 結(jié)論在本研究中，質(zhì)譜分析新的戰(zhàn)略相結(jié)合的處方篩選及生物活性成分的確定中醫(yī)藥使用活細(xì)胞提取和HPLC

25、- DAD的，是提出并成功地應(yīng)用于中藥，調(diào)查潛在的生物活性候選人當(dāng)歸補血湯及其組成 當(dāng)歸 當(dāng)歸和黃芪的 內(nèi)皮細(xì)胞 。 結(jié)果表明，這一新提議的戰(zhàn)略可能是一個有用的方法概率高生物活性的候選人中醫(yī)藥與預(yù)測。致謝這項研究是由普通基金提供資金支持（第3047.216萬和90209045）和重點基金（3053.087萬）全國科學(xué)基金會的中國。參考文獻(xiàn)1 克 葉，YZ李YY里，赫茲和DA郭郭， j的 醫(yī)藥。 生物醫(yī)學(xué)。 。肛門 33 2003），頁521-527。（ 條 |PDF文件（221金） | 查看Scopus紀(jì)錄 | 萬方圖書館論壇（22）2 米 Homma，光岡，山田噸，噸Niitsuma，閣下Ihto和N.高橋， 肛門。 生物化學(xué)。 202 （1992），頁179-182。3 立法會他，資深大律師和XD王耿， Chromatographia 54 （2001），頁71-76。 全文 通過CrossRef | 圖書館論壇查看記錄 | 萬方圖書館論壇（43）4 直流Schrie