注射用鹽酸克林霉素方法學研究原始記錄

1、方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱系統(tǒng)性適用性試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素對照品W對照 mg，置于10ml容量瓶中，用流動相定容至刻度，即得對照品溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗，取10

2、ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數(shù)按克林霉素峰計算，應不低于1300。試驗結果結果：方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱含量線性關系試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱： C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品W m

3、g，置于50ml容量瓶中，用流動相定溶至刻度，制成每1 ml含克林霉素4 mg的溶液，即得樣品溶液，精密稱取樣品溶液置于不同量瓶中，用流動相稀釋并分別制成濃度1.2mg/ml、1.6mg/ml、2.0mg/ml、2.4mg/ml、2.8mg/ml的樣品溶液，分別取10l注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標 x，以峰面積為縱坐標Y，得回歸方程和相關系數(shù)；見附圖。實驗結果濃度(mg/ml)峰面積1.21.62.02.42.8回歸方程R2方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱5%對照品線性關系試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫

4、1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品W樣 mg,置于50ml容量瓶中，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素2 mg的溶液，即得樣品溶液，精密稱取樣品溶液置于不同量瓶中，用流動相稀釋并分別制成濃度0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.25mg/ml、0.30mg/ml、0.35m

5、g/ml的樣品溶液，分別取10l注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標 x，以峰面積為縱坐標Y，得回歸方程和相關系數(shù)；見附圖。實驗結果濃度(mg/ml)峰面積0.150.200.250.300.35回歸方程R2方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱含量重復性試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品

6、來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品 mg置于10ml容量瓶中,加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素2 mg的溶液，A對主峰面積 。精密稱?。ㄅ枺?）樣 mg，樣 mg、樣 mg、樣 mg、樣 、樣 mg；分別置25ml的容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得作為含量樣品溶液。上述溶液取10ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算含量RSD%。實驗結果樣品主峰面積含量（%）RSD（%）A樣1A樣2A樣3A樣4A樣5A樣6方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱有關物質總雜重復性試驗

7、檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品 mg置于100ml容量瓶中,加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素0.25 mg的溶液。A對主峰面積 。精密稱取（批號： ）樣 mg，樣 mg樣 mg樣 樣 、樣 mg；

8、分別置50ml的容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得作為含量樣品溶液。上述溶液取10ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算總雜RSD(%)。實驗結果樣品總雜總雜(%)平均總雜(%)RSD(%)A樣1A樣2A樣3A樣4A樣5A樣6方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱進樣精密度試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測

9、波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品 mg置于10ml容量瓶中,加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素2 mg的溶液。上述溶液取10ul連續(xù)6次注入液相色譜儀，計算RSD(%)。實驗結果樣品峰面積RSD(%)A1A2A3A4A5A6方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱5%對照品進樣精密度試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二

10、氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取克林霉素標準品 mg置于100ml容量瓶中,加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素0.25 mg的溶液。上述溶液取10ul連續(xù)6次注入液相色譜儀，計算RSD(%)。實驗結果樣品峰面積RSD(%)A1A2A3A4A5A6方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱回收率試驗檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色

11、譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程對照品來源：中國藥品生物制品檢定所；含量：86.0%；批號：130422-200705精密稱取鹽酸克林霉素對照 mg分別置10ml量瓶中，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含克林霉素2 mg的溶液，搖勻，即得作為對照溶液。精密稱取（批號： ）樣品1 mg，樣品2 mg樣品3 mg分別置25ml的容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即

12、得三份濃度為 mg/ml， mg/ml， mg/ml的樣品溶液（作為含量120%樣品溶液）。精密稱?。ㄅ枺?）樣品1 mg，樣品2 mg樣品3 mg分別置25ml的容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得三份濃度為 mg/ml， mg/ml， mg/ml的樣品溶液（作為含量100%樣品溶液）。精密稱取（批號： ）樣品1 mg，樣品2 mg樣品3 mg分別置25ml的容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得三份濃度為 mg/ml， mg/ml， mg/ml的樣品溶液（作為含量80%樣品溶液）。分別量取10ul 80%、100%、120%的樣品溶液各三份注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算回

13、收率。實驗結果相對濃度W加入量(mg)W測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)80%100%120%方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱耐用性試驗流速檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg置于25ml容量瓶中，用流動相定容至刻度，分別

14、以0.8ml/min ,1.0 ml/min,1.2 ml/min的流速進樣，記錄保留時間，理論塔板數(shù)，分離度和對稱因子。試驗結果流速(ml/min)保留時間理論塔板數(shù)A（%）分離度對稱因子方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱耐用性試驗pH值檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至2.8；3.0；3.2)-甲醇(210:300)為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程

15、精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣1 mg，W樣2 mg, W樣3 mg置于25ml容量瓶中，用pH分別為2.8，3.0和3.2的流動相定容至刻度，分別取10ul 注入液相色譜儀，記錄主峰保留時間，理論塔板數(shù)，分離度和對稱因子。試驗結果pH值保留時間理論塔板數(shù)A（%）分離度對稱因子方法學研究測定原始記錄樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱耐用性試驗柱溫檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0

16、)-甲醇（210:300）流動相；檢測波長為214nm。試驗過程精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，置于25ml容量瓶中，定容至刻度，設柱溫為20，25，30，分別進樣10 ul，進樣測定，記錄記錄主峰保留時間，理論塔板數(shù)，分離度和對稱因子試驗結果柱溫保留時間理論塔板數(shù)A（%）分離度對稱因子方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱耐用性試驗流動相比例檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000m

17、l，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 20:31)；（21:30）；（22:29）；（24:27）為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣1 mg，W樣2 mg, W樣3 mg, W樣4 mg置于25ml容量瓶中，分別以磷酸二氫銨溶液-甲醇20:31；21:30；22:29；24:27為流動相，定容至刻度，進樣測定，記錄記錄主峰保留時間，理論塔板數(shù)，分離度和對稱因子試驗結果磷酸二氫銨溶液-甲醇保留時間理論塔板數(shù)A（%）分離度對稱因子方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱耐用性試驗結果與結論檢驗依據(jù)中國藥典2010

18、年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260試驗結果結論方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱專屬性試驗：強光檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程樣品測定：精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，50ml無色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置強光照射箱（光照強

19、度約4000Lx）中照射4小時，取出，作為供試品溶液。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。輔料空白：按處方量配比，精密稱取醋酸鈉三水合物 mg，混勻精密稱取5/6瓶量于25ml無色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置強光照射箱（光照強度約4000Lx）中照射4小時，加流動相稀釋至刻度，搖勻。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱專屬性試驗：高溫破壞檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以

20、磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程樣品測定：精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，置于50ml棕色容量瓶中，加流動相適量使溶解，置100的水浴中加熱30分鐘后，取出，放冷，搖勻。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。輔料空白：按處方量配比，精密稱取醋酸鈉三水合物 mg，混合后，置于25ml棕色容量瓶中，加流動相適量使溶解，置100的水浴中加熱30分鐘后，取出，放冷，搖勻。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果

21、方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱專屬性試驗：氧化破壞檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程樣品測定：精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，置50ml棕色量瓶中，加流動相適量使溶解，加濃度為3的過氧化氫溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘后，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品

22、溶液。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。輔料空白：按處方量配比，精密稱取醋酸鈉三水合物 mg，混合后，精密稱取5/6瓶量于25ml棕色容量瓶中，加流動相適量使溶解，加濃度為3的過氧化氫溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘后，用流動相稀釋至刻度，搖勻。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱專屬性試驗：強酸破壞檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水

23、溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程樣品測定：精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，置50ml棕色量瓶中，加流動相適量使溶解，加0.1mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。輔料空白：按處方量配比，精密稱取醋酸鈉三水合物 mg，混合后，精密稱取5/6瓶量于25ml棕色容量瓶中，加流動相適量使溶解，加0.1mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置30分

24、鐘后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻。量取10ul 的樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。 試驗結果方法學研究測定原始記錄第 頁 共 頁樣品名稱注射用鹽酸克林霉素試驗名稱專屬性試驗：強堿破壞檢驗依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄 D（高效液相色譜法）高效液相色譜儀安捷倫1260色譜條件色譜柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氫銨溶液(取磷酸二氫銨2.88g，加水溶解并稀釋成1000ml，用80磷酸溶液調節(jié)pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )為流動相；檢測波長為214nm。試驗過程樣品測定：精密稱取鹽酸克林霉素樣品（批號： ）W樣 mg，置50ml棕色量瓶中，加流動相適量使溶解使溶解，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘后，用0.1mol/L鹽酸溶液中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。量取10ul