昆蟲源代謝物抗菌活性篩選

1、昆蟲源代謝物抗菌活性篩選摘 要關(guān) 鍵 詞：THE DIFFERENT EXTRACTION CONDITIONS ON THE COUGH AND ASTHMA MEDICINE IN CHILDREN INFLUENCE OF THE CONTENT OF Ca2+朗讀顯示對應(yīng)的拉丁字符的拼音ABSTRACT This paper through the design of a single fried at different times of gypsum, plaster of different single-solvent volume when fried, fried gyps

2、um used alone in different solvents, and compatibility of prescriptions, medicines and other extraction conditions of different particle size were prepared pediatric cough spiritual preparations, And its Suohan calcium were identified, and then by EDTA complexometric titration Ca2+ content preparati

3、on, formulation and process selection Spirit cough in children to determine the optimal extraction process, to ensure that the content of Ca2 +meet quality standards.Preliminary results show that a single fried gypsum, the boiling time was 60min, with 300mL distilled water as solvent, the obtained s

4、olution the highest concentration of calcium ions. With plaster and other Liuwei decoction, respectively, when the gypsum and licorice decoction when one of the highest concentration of calcium ions. 字典Finally, the conclusions based on the above and taking into account calcium sulfate does not

5、dissolve in the nature of alcohol, so will cast a single fry, fry the remaining ingredients together, gypsum boiled liquid without alcohol precipitation, and the remaining ingredients by alcohol precipitation, then the system of pediatric cough and asthma Spirit, and this process as the best process

6、.KEY WORDS：cough and asthma medicine in chiLdren, extraction，identification of caLcium，determination of Ca2+.目 錄第1章前 言1§1.1 小兒咳喘靈總述1§1.2小兒咳喘靈口服液的藥效試驗、藥理作用及用法用量1§1.3 小兒咳喘靈口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究2§1.4 鈣離子在人體中的作用3§1.5鈣鹽的鑒別方法3§1.6 鈣含量的測定方法4§1.7 影響鈣離子含量的因素5§1.8 小兒咳喘靈的處方及原制備工藝5&#

7、167;1.9選題目的、方向和意義5第2章 實驗部分7§2.1 主要實驗設(shè)備儀器藥品一覽表7設(shè)備一覽表（表2-1）7試劑一覽表（表2-2）7§2.1.3 儀器一覽表（表2-3）8§2.2實驗所用試劑的配制8§2.3不同時間單煎石膏9§2.4用不同體積溶劑的單煎石膏9§2.5用不同的溶劑單煎石膏10§2.6兩味藥材合煎10§2.7三味藥材合煎10§2.7所有藥材合煎11第3章 結(jié)果與討論13§3.1 制備石膏單煎溶液中鈣離子濃度的影響因素13不同煎煮時間對其溶液中鈣離子的影響13§3.1

8、.2 不同體積溶劑對其溶液中鈣離子的影響14§3.1.3 不同溶劑對其溶液中鈣離子的影響15§3.2 兩味藥材合煎的結(jié)果記錄18§3.3三味藥材合煎的結(jié)果記錄19§3.4所有藥材采用不同配伍合煎19第4章 結(jié)論21參考文獻22致謝25 第1章 前 言§1.1 研究的目的與意義當(dāng)今人類與動物的病毒性疾病日漸增多，且日趨嚴(yán)重。由于缺乏有效的抗病毒藥物，給人類健康和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了巨大的危害和經(jīng)濟損失。因此尋找一種有效的抗病毒物質(zhì)已成為迫在眉睫的問題。其次，抗菌素的發(fā)現(xiàn)，使人類雖然征服了傳染病，但由于抗菌求濫用等諸多原因，抗藥性日趨嚴(yán)重，水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗菌

9、素的過量使用，造成水產(chǎn)品質(zhì)低下。凡此種種，使科學(xué)家致力于研究動物本身存在的大然抗菌抗病毒因子，近年來在昆蟲、魚、哺乳動物等的防御系統(tǒng)中先后發(fā)現(xiàn)一些小肽起重要作用，分子在1540肽之間，大小各異。大部分有細胞毒和抗菌活性，有的還具有抗病毒作用。經(jīng)過分子改造后可以大大降低細胞毒性，提高抗病毒活性，家蠅中分離出的抗菌抗病毒肽，具有一定的抗菌與抗病毒作用。昆蟲抗菌肽對大腸桿菌、傷寒桿菌、硝酸鹽桿菌等致病菌有抗菌作用，而且部分抗菌肽對一些臨床耐藥致病菌也有良好的抗菌作用，這意味著昆蟲抗菌肽在醫(yī)學(xué)中有廣闊的應(yīng)用前景。此外，昆蟲抗菌肽對一些癌細胞也有殺傷作用。B4轉(zhuǎn)化細胞，K562細胞，U937細胞，白血病

10、細胞K560以及肺癌細胞A549都能受到抗菌肽的攻擊。在不少病原菌對現(xiàn)有的抗生素逐漸產(chǎn)生抗藥性，而開發(fā)新的抗生素又極為困難的情況下，昆而抗病毒多膚作為一種極具有潛力的廣譜抗菌抗病毒物質(zhì)，尤其是具有抗艾滋病活性，其基因工程菌的構(gòu)建及生產(chǎn)將具有巨大的經(jīng)濟價值及應(yīng)用前景。昆蟲抗菌肽的發(fā)現(xiàn)及其一級結(jié)構(gòu)的闡明，為多肽類抗菌或抗癌藥物的研究及其應(yīng)用開辟了廣闊的前景。§1.2昆蟲抗菌活性成分研究概況經(jīng)體內(nèi)藥效學(xué)試驗研究表明，小兒咳喘靈口服液可明顯減少小鼠及豚鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期及哮喘潛伏期，顯著促進小鼠氣管酚紅排出量，抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹1。經(jīng)毒性試驗表明，小鼠對小兒咳喘靈口服液的最大

11、耐受量為310g/kg。以4 g/kg、2g/kg、1g/kg給大鼠連續(xù)兩個月灌服，無血象、肝功能等異常反應(yīng)，處死后各臟器在肉眼及鏡下觀察未見明顯異常改變。小兒咳喘靈口服液主要有鎮(zhèn)咳、平喘、抑菌抗炎、提高免疫力等作用。（1）鎮(zhèn)咳作用：小兒咳喘靈沖劑對電刺激引咳法所致貓的咳嗽有明顯抑制作用，起作用可維持240分鐘左右，小兒咳喘靈沖劑和口服液對14%的氨水霧化誘發(fā)之咳嗽，可使小鼠咳嗽潛伏期明顯延長，2分鐘內(nèi)咳嗽次數(shù)明顯減少。（2）平喘作用：小兒咳喘靈沖劑和口服液能降低組織胺、乙酰膽堿所致的離體氣管條收縮，口服液可使磷酸組織胺霧化所致豚鼠喘息潛伏期明顯延長。（3）抑菌抗炎作用：小兒咳喘靈沖劑對角叉菜

12、膠所致大鼠足趾腫脹有明顯的抑制作用。其MIC分別為：31.3mg/mL、62.5mg/mL、62.5 mg/mL、125 mg/mL、125 mg/mL。對傷寒桿菌、副傷寒桿菌乙、鼠傷寒桿菌、流感桿菌及白色念珠球菌的MIC為250mg/mL。（4）提高免疫力：咳喘靈能提高小鼠巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)，其中以后者更加明顯；而且能較強地對抗HPA所致的吞噬功能損失。對小鼠脾細胞總數(shù)無明顯影響。但對PFC數(shù)有所增高；咳喘靈對CTX所致PFC減少有明顯對抗，但對其所致脾細胞減少則無甚影響?？却`對正常小鼠淋轉(zhuǎn)無明顯影響，但可部分恢復(fù)CTX抑制的小鼠淋轉(zhuǎn)功能。（5）其他作用：小兒咳喘靈口服液對三聯(lián)菌苗所

13、致家兔發(fā)熱有良好的退熱作用，對溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、肺炎鏈球菌及綠膿桿菌有一定抑制作用，能明顯提高其免疫力?？诜昧浚?歲以內(nèi)一次5毫升；3-4歲一次7.5毫升；5-7歲一次10毫升，一日3-4次。§1.3 小兒咳喘靈口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究為確?？诜旱馁|(zhì)量，保證用藥安全有效。可采用薄層鑒別法對小兒咳喘靈口服液中的麻黃、板藍根、苦杏仁、金銀花進行定性鑒別2； 采用HPLC法測定金銀花中的綠原酸含量。結(jié)果：通過薄層鑒別法，分別鑒別出麻黃中的鹽酸麻黃堿，板藍根中的精氨酸，苦杏仁中的苦杏仁苷，金銀花中的綠原酸；通過HPLC法測得金銀花中綠原酸的含量穩(wěn)定，可靠；平均回收率為

14、98.80%，RSD為1.45%。結(jié)論：該方法能夠?qū)π嚎却`口服液進行準(zhǔn)確、快速地定性、定量分析，穩(wěn)定、可靠，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。其次對于用貝母花、甘草、桔梗、遠志、半夏5味中藥制備的其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用們用薄層層析法對甘草桔梗進行定性鑒別3，并用甘草次酸及桔梗皂苷作為對照品，以甘草次酸為定量測定指標(biāo)成分，應(yīng)用高效液相色譜法進行含量測定，以控制該口服液的質(zhì)量。本次實驗以麻黃、板藍根、苦杏仁、金銀花、石膏、瓜蔞、甘草七味中藥為處方制備小兒咳喘靈口服液。§1.4 鈣離子在人體中的作用鈣是一種生命必需元素，也是人體中含量最豐富的宏量金屬元素，含量僅次于C、H、O、N。正常成人體內(nèi)總

15、鈣可達L0001200g，約占人體體重的2左右。其中99以上的鈣存在于骨骼、牙齒中，余下的不足1的鈣分布在體液及其它組織中。在體內(nèi)鈣離子主要以游離和結(jié)合兩種形式存在，兩者之間處于動態(tài)平衡。在生命活動中起主要作用的是細胞內(nèi)外游離鈣離子濃度。鈣離子對神經(jīng)傳導(dǎo)、肌肉收縮、激素的分泌、促進血液的凝固、維持心臟的正常收縮、保持細胞的完整性和細胞分裂、DNA的合成等方面起重要的調(diào)控作用，鈣離子的改變直接影響生物體，導(dǎo)致機體產(chǎn)生多種疾病。根據(jù)研究4，109種疾病直接與鈣的遷移聚集相聯(lián)系，主要有骨骼系統(tǒng)疾病(如佝僂病，骨質(zhì)疏松，骨質(zhì)增生，骨生長痛，軟骨病，骨變形，各種骨損傷等)，牙齒疾病，免疫系統(tǒng)疾病，神經(jīng)系

16、統(tǒng)疾病，肌肉組織疾病，血液系統(tǒng)疾病，酶變異疾病，細胞粘著性疾病，纖毛運動性疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，腸胃系統(tǒng)疾病，肝膽疾病，眼睛疾病，腎臟系統(tǒng)疾病，生殖系統(tǒng)疾病，膀胱，肛腸疾病，各種皮膚疾病等。鈣離子(Ca2+)是普遍存在的細胞內(nèi)信使，調(diào)控多種細胞作用，如基因轉(zhuǎn)錄、平滑肌收縮和細胞增殖等。鈣離子對呼吸道纖毛運動調(diào)控中的作用5以作了大量研究，并得出鈣離子對呼吸道上纖毛運動有直接和間接的調(diào)控作用6,7。其次，氯離子通道在肌強直(myotonia)、肺囊性纖維化(CF)的發(fā)病中起著重要作用,鈣離子可以激活氯離子通道，激活氯離子通道與呼吸疾病的氣道黏液高分泌有關(guān)8，并對哮喘患者的黏液高分泌和杯狀細胞的化生有

17、重要的作用9。§1.5鈣鹽的鑒別方法根據(jù)藥典10方法取待測液2mL，加入稀鹽酸（9.5%10.5%）5mL作為供試品溶液，取供試品溶液（120），加入甲基紅指示劑兩滴，用氨試液中和，再加滴稀鹽酸至恰酸性，用草酸銨試液，即生成白色沉淀，分離此沉淀，沉淀不溶于醋酸，可但溶于鹽酸。本實驗按照藥典方法對小兒咳喘靈中的鈣離子進行鑒別。§1.6 鈣含量的測定方法目前關(guān)于溶液中鈣離子含量的測定方法有許多種。其各種方法都有優(yōu)缺點，對于不同類型的物質(zhì)中鈣含量的測定方法各有不同。通常，鈣離子含量的測定分析方法有原子吸收光譜法11,12,13、電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-AES)14,1

18、5,16,17,18、X射線熒光光譜法19等離子體原子發(fā)射光譜法等，但使用這些方法共有是周期較長、設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、難以普及等的特點。其次，在pH=11.0的氨水氯化銨介質(zhì)中,苦胺酸偶氮變色酸與鈣離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物,據(jù)此建立了苦胺酸偶氮變色算褪色光度法測定藥物中鈣的方法20。鈣制品常采用高錳酸鉀滴定法測其鈣含量21，即含有EDTA的pH值為3.54.5的氨性溶液中，先用草酸鹽選擇性地沉淀鈣離子，沉淀物經(jīng)過濾、洗滌后，用稀硫酸將所得草酸鈣沉淀物溶解，然后再7585條件下用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.03%（n=5）,回收率（R）在96.30%101.12%，此

19、方法簡單、快捷，準(zhǔn)備、干擾少。食品中常用火焰原子吸收光度法或TDEA滴定法測定22,23,火焰原子吸收光譜法適宜測定鈣含量較低（以mg/kg計）的鈣食品。該方法雖干擾小，速度快，效果好，但因儀器昂貴、操作技術(shù)難掌握，普通實驗室難以普及應(yīng)用。對于含量高的（以g/100g計）食品，國家標(biāo)準(zhǔn)方法為EDTA容量滴定法，該方法雖操作簡單，但存在著干擾現(xiàn)象嚴(yán)重、終點變化不明顯、指示劑水溶液不穩(wěn)定（固體指示劑用量不宜掌握）且易封閉等問題，使得測定結(jié)果的準(zhǔn)確性較差。其次亦有采用402型鈣離子選擇性電極進行鈣離子含量的測定24，此電極對鈣離子濃度10-210-4moL/L范圍內(nèi)有理想的能斯特響應(yīng)，斜率為-29.

20、25mv/p Ca（20），重現(xiàn)性與選擇性較好，試劑用量少，不受樣品渾濁及顏色的影響。應(yīng)用此電極測定食品鈣含量，精密度和準(zhǔn)確度較理想。此外，對鈣含量的測定，其方法還有化學(xué)分析法25、半微量法26、電位滴定法27、離子色譜法28、紫外分光光度法29、當(dāng)量溶液分光光度法30、顯色法31等。本次實驗研究的不同提取條件對小兒咳喘靈中鈣離子含量的影響，主要是通過大致測定鈣離子的量進行比較。故采用藥典中以鈣紫紅素為指示劑，用TDEA絡(luò)合滴定法進行測定。§1.7 影響鈣離子含量的因素石膏是小兒咳喘靈中含鈣離子的主藥，石膏是含結(jié)晶水的硫酸鈣（CaSO4·2H2O）,屬于礦物藥物，純凈的Ca

21、SO4是微溶物質(zhì)，其溶解度在040之間隨溫度的升高而增加，但溫度超過40其溶解度隨溫度的升高而降低32。但有學(xué)者認為石膏屬于礦物藥物，應(yīng)先煎久煎，才能使有效成分溶出，并且臨床運用石膏主張先煎33,34。此外與不同的藥物配伍煎煮所得濾液中的含量也有所不同。因此，對石膏單煎、煎煮時間不同、與不同藥物配伍煎煮都會影響最后鈣離子的溶出量。§1.8 小兒咳喘靈的處方及原制備工藝【處方】 麻黃：25g 苦杏仁：125g 金銀花：250g 板藍根：250g 石膏：375g 甘草：125g 瓜蔞：125g 。 【制備工藝】：用以上七味藥中的苦杏仁、石膏、板藍根、甘草、瓜蔞加水煎煮一小時，濾過；藥渣與

22、麻黃、金銀花加水煎煮一小時，濾過，合并濾液，靜置，取上清液，濃縮至流浸膏。加入無水乙醇，使含醇量達65%，攪拌均勻搜靜置冷藏；取上清液，濾過，回收乙醇，濃縮至適量，加入甜菊糖及防腐劑適量，攪拌均勻，濾過，加水至2000mL，即得。§1.9選題目的、方向和意義由于鈣離子(Ca2+)是普遍存在的細胞內(nèi)信使，調(diào)控多種細胞作用，如基因轉(zhuǎn)錄、平滑肌收縮和細胞增殖等。且經(jīng)研究證明鈣離子對呼吸道纖毛運動有調(diào)控作用，其次，氯離子通道在肌強直(myotonia)、肺囊性纖維化(CF)的發(fā)病中起著重要作用,鈣離子可以激活氯離子通道，激活氯離子通道與呼吸疾病的氣道黏液高分泌有關(guān)，并對哮喘患者的黏液高分泌和

23、杯狀細胞的化生有重要的作用。小兒咳喘靈中鈣離子含量的增高有助于提高藥物的療效，滿足目前國家藥監(jiān)局對咳喘靈中鈣離子含量的要求。而目前各藥廠所制備的小兒咳喘靈中的鈣離子含量一般較低，不能滿足國家藥監(jiān)局的要求。為解決以上問題，對咳喘靈的制備條件進行改進和優(yōu)化，擬采用不同的時間、溶劑和煎煮時的配伍不同進行試驗，而后進行鈣離子的鑒別和檢測，分析各提取條件不同對鈣離子含量的影響，篩選出最佳的制備工藝，為小兒咳喘靈的制備提供理論基礎(chǔ)。這對改進和優(yōu)化咳喘靈的制備工藝，提高其中鈣離子含量的條件探索有重要的意義。第2章 實驗部分§2.1 主要實驗設(shè)備儀器藥品一覽表§設(shè)備一覽表（表2-1）表2-

24、1主要實驗設(shè)備設(shè)備規(guī)號廠家調(diào)溫加熱套北京中興偉業(yè)儀器有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE52CS型上海亞榮生化儀器廠恒溫水浴鍋B-220型上海亞榮生化儀器廠電子天平JA3003型上海天平儀器廠分析天平BT25S型上海秦邁儀器有限公司§試劑一覽表（表2-2）表2-2主要藥品原料名稱級別廠家甲基紅化學(xué)純上海崇明縣裕安人民公社十六大隊綜合廠濃鹽酸分析純開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司無水乙醇分析純天津市化學(xué)試劑三廠草酸銨分析純天津石英鐘廠霸州市化工分廠氯化鈉分析純開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司冰醋酸分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司氫氧化鈉分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公乙二胺四乙酸二鈉分析純天津市化學(xué)試劑三廠氨

25、水分析純開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司§ 儀器一覽表（表2-3）表2-3主要儀器儀器名稱型號規(guī)格數(shù)量燒杯500mL，250mL，100mL，50mL各4個漏斗中3個量筒100mL，50mL，20mL，10mL各一個容量瓶1000mL，500mL,250mL，100mL1個，2個,5個，3個圓底燒瓶500mL1個錐形瓶250mL3個試管20個試管架1個膠頭滴管3個玻璃棒長，中各1根洗耳球1個移液管1mL，5mL，10mL各1支抽濾瓶500mL1個布氏漏斗中1個酸式滴定管50mL1支藥匙大，中，小各1個§2.2實驗所用試劑的配制1. 甲基紅指示劑：取甲基紅0.1g，加0.05mol

26、/LNaOH溶液7.4mL使其溶解，再加蒸餾水稀釋至200mL，即得。2. 氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4.3g，加蒸餾水使溶解成100mL，即得。3. 草酸銨溶液：取草酸銨3.5g，加水使溶解成100mL，即得。4. 稀醋酸溶液：取冰醋酸6mL，稀釋至100mL，即得。5. 稀鹽酸溶液：取鹽酸234mL稀釋至1000mL，即得。所得稀鹽酸應(yīng)為9.5%10.5%。6. 氨試液：取濃氨溶液400mL，加水稀釋至1000mL，即得。7. EDTA滴定液：取19gEDTA，加水溶解，稀釋至1000mL，即得。§2.3鈣離子的測定溶液中鈣鹽的鑒別：按照藥典方法，取上述所得濾液bmL，加入稀鹽酸5

27、mL作為供試品溶液，取供試品溶液（120），加入甲基紅指示劑兩滴，用氨試液中和，再滴加稀鹽酸至恰酸性，用草酸銨試液，觀察其是否有白色沉淀生成。取白色沉淀，加入稀醋酸，觀察白色沉淀是否溶液，若不溶解，則加入稀鹽酸，觀察棄是否溶解；若無白色沉淀重新則取供試品1mL，分別減少稀釋的倍數(shù)而后進行重新鑒別。溶液中鈣離子含量的滴定：取上述所得濾液5mL，置于250mL的錐形瓶中，加蒸餾水50mL，用NaOH調(diào)pH至13左右，加入鈣紫紅素指示劑0.1g。用0.05moL/LEDTA滴定液滴定至溶液由紫色變成純藍色，每1mL的EDTA滴定液相當(dāng)于22.42mg的C12H22CaO4·H2O。

28、7;2.4石膏單煎溶液中鈣離子濃度的影響因素§2.4.1不同煎煮時間鈣離子溶出度的影響精確稱取原處方1/20劑量的石膏（18.75g），四份。分別置于300mL的燒杯中，加蒸餾水100mL，用恒溫電熱套加熱至沸騰，并使其分別保持沸騰30min、60min、90min、120min。而后待溶液冷卻至室溫后進行抽濾，棄濾渣，取濾液，并分別準(zhǔn)確量取濾液的體積。同§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別。同§2.3中的溶液中鈣離子含量的滴定方法，對此溶液鈣離子的含量進行測定。§2.4.2 不同體積溶劑對鈣離子溶出度的影響精確稱原處方1/20劑量的石膏（1

29、8.75g），五份。置于500mL的燒杯中，分別加蒸餾水100mL、150mL、200mL、250mL、300mL。用恒溫電熱套加熱至沸騰，并使均其保持沸騰60min。而后待溶液冷卻至室溫后進行抽濾，棄濾渣，取濾液，并分別準(zhǔn)確量取濾液的體積。同§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別。同§2.3中的溶液中鈣離子含量的滴定方法，對此溶液鈣離子的含量進行測定。§ 不同溶劑對其溶液中鈣離子的影響 實驗步驟：精確稱原處方1/20劑量的石膏（18.75g），六份。置于500mL的燒杯中，分別加0.5%HCL、1.0% HCL、 1.5% HCL、 0.5%NaCL、

30、0.9% NaCL 1.1% NaCL各300mL。用恒溫電熱套加熱至沸騰，并使均其保持沸騰60min。而后待溶液冷卻至室溫后進行抽濾，棄濾渣，取濾液，并分別準(zhǔn)確量取濾液的體積。同§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別。同§2.3中的溶液中鈣離子含量的滴定方法，對此溶液鈣離子的含量進行測定。§2.6兩味藥材合煎對鈣離子溶出度的影響精確稱取原處方1/20劑量的石膏（18.75g），六份。分別和麻黃（1.25g）、金銀花（12.5g）、苦杏仁（6.25g）、板藍根（12.5g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g）置于500mL的燒杯中， 加蒸餾水300m

31、L，合煎。用恒溫電熱套加熱至沸騰，并使均其保持沸騰60min。而后待溶液冷卻至室溫后進行抽濾，棄濾渣，取濾液，并分別準(zhǔn)確量取濾液的體積。同§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別。溶液中鈣離子含量的滴定：取上述所得濾液amL，置于250mL的錐形瓶中，加蒸餾水50mL，用NaOH調(diào)pH至13左右，加入鈣紫紅素指示劑0.1g。用0.05moL/LEDTA滴定液滴定至溶液由桔紅色變成翠綠色，每1mL的EDTA滴定液相當(dāng)于22.42mg的C12H22CaO4·H2O。§2.7三味藥材合煎對鈣離子的溶出度的影響由§2.6的實驗中得出石膏與甘草、瓜蔞合煎時

32、溶液中鈣離子的溶出度較高，股采用此三味藥材合煎。精確稱原處方1/20劑量的石膏（18.75g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g）置于500mL的燒杯中， 加蒸餾水300mL，合煎。用恒溫電熱套加熱至沸騰，并使均其保持沸騰60min。而后待溶液冷卻至室溫后進行抽濾，棄濾渣，取濾液，并分別準(zhǔn)確量取濾液的體積。同§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別。同§2.6中的溶液中鈣離子含量的滴定方法，對此溶液鈣離子的含量進行測定。§2.7所有藥材合煎對鈣離子的溶出度的影響實驗步驟：精確稱取原處方1/20劑量的石膏（18.75g）、麻黃（1.25g）、金銀花（12

33、.5g）、苦杏仁（6.25g）、板藍根（12.5g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g）各兩份。分別按以下方案煎煮制備小兒咳喘靈口服液，并對制備的小兒咳喘靈口服液成品按照§2.3中的溶液中鈣鹽的鑒別方法，對鈣鹽進行鑒別，按照§2.6中的溶液中鈣離子含量的滴定方法，對此溶液鈣離子的含量進行測定。方案一/A：取原處方1/20劑量的石膏（18.75g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g）置于500mL燒杯中，加蒸餾水300mL合煎一小時，待溶液冷卻至室溫后過濾，取濾液a。將濾渣與原處方1/20劑量的麻黃（1.25g）、金銀花（12.5g）、苦杏仁（6.25g）、板藍根（1

34、2.5g）置于500燒杯中，加蒸餾水300mL合煎一小時，待溶液冷卻至室溫后過濾，取濾液b。將濾液a和濾液b合并，靜置，取上清液，旋蒸濃縮至流浸膏，加入無水乙醇，使含醇量達65%，攪拌均勻，靜置，冷藏。取上清液過濾，回收乙醇，濃縮至適量，加水至100mL，即得。方案二/B：將藥材粉碎進行實驗，其余步驟同方案一。方案三/C：取原處方1/20劑量的石膏（18.75g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g）、苦杏仁（6.25g）、板藍根（12.5g）置于500mL燒杯中，加蒸餾水300mL合煎一小時，待溶液冷卻至室溫后過濾，取濾液a。將濾渣與原處方1/20劑量的麻黃（1.25g）、金銀花（12.5

35、g）置于500燒杯中，加蒸餾水300mL合煎一小時，待溶液冷卻至室溫后過濾，取濾液b。將濾液a和濾液b合并，靜置，取上清液，旋蒸濃縮至流浸膏，加入無水乙醇，使含醇量達65%，攪拌均勻，靜置，冷藏。取上清液過濾，回收乙醇，濃縮至適量，加水至100mL，即得。方案四/D：將藥材粉碎進行實驗，其余步驟同方案三。方案五/E：取原處方1/20劑量的石膏（18.75g）置于500mL燒杯中，加蒸餾水300mL，待溶液冷卻至室溫后過濾，取濾液a，旋蒸濃縮至其總體積小于100mL。其余藥材麻黃（1.25g）、金銀花（12.5g）、苦杏仁（6.25g）、板藍根（12.5g）、甘草（6.25g）、瓜蔞（6.25g

36、）置于500燒杯中，加蒸餾水300mL合煎一小時，待溶液冷卻至室溫后過濾，得濾液b，將濾液b旋蒸濃縮至流浸膏，加入無水乙醇，使含醇量達65%，攪拌均勻，靜置，冷藏。取上清液過濾，回收乙醇，濃縮至適量，而后加入濃縮后的濾液a，加水定容至100mL。方案六/F：將藥材粉碎進行實驗，其余步驟同方案五。第3章 結(jié)果與討論§3.1石膏單煎溶液中鈣離子濃度的影響因素§不同煎煮時間對其溶液中鈣離子的影響設(shè)定石膏的單煎時間分別為30min、60 min、90 min、120 min，通過實驗得出其最后所得濾液的體積V（mL），溶液的物質(zhì)的量濃度c（mol/L），以及溶液的質(zhì)量濃度m（mg/

37、g）如表3-1。物質(zhì)的量濃度與煎煮時間之間的比例關(guān)系如圖3-1，質(zhì)量濃度與煎煮時間之間的比例關(guān)系曲線如圖3-2。表3-1 石膏單煎不同時間所得濾液的參數(shù)t（min）306090120V（mL）68492620c（mol/L）0.01650.01650.01720.0185m（mg/g）2.39361.72480.98730.8107 對所得溶液進行鈣鹽的鑒別試驗。當(dāng)供試品按藥典方法稀釋20倍后，鑒別均為負反應(yīng)，稀釋10倍以及5倍時依然均為負反應(yīng)。而供試品稀釋3倍時鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生成，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由圖3-2可知，當(dāng)煎煮時間為30min時，所得濾液中鈣離

38、子的含量最高，為使得所制備的溶液中的鈣離子含量最高，應(yīng)該選擇石膏的煎煮時間為30min中最佳，但是處方中由于石膏亦要與其他藥材合煎，故其煎煮時間必定大于30min，且由圖3-1可知煎煮60min時溶液的物質(zhì)的量濃度與煎煮30min的并無太大差異，而后在進一步增加煎煮時間雖然使溶液的物質(zhì)的量濃度有所增加，但其所得濾液的體積太少。故選擇石膏的最佳的單煎時間為60min。圖3-1石膏單煎不同時間所得濾液的物質(zhì)的量濃度曲線圖3-2石膏單煎不同時間所得濾液的質(zhì)量濃度曲線§ 不同體積溶劑對其溶液中鈣離子的影響設(shè)定石膏單煎的時間為60min，以蒸餾水為溶劑，所用體積分別為100mL、150 mL、

39、200 mL、250 mL、300 mL。通過實驗得出其最后所得濾液的體積V（mL），溶液的物質(zhì)的量濃度c（mol/L），以及溶液的質(zhì)量濃度m（mg/g）如表3-2，質(zhì)量濃度與溶劑體積之間的關(guān)系曲線如圖3-3。表3-2 用不同體積溶劑單煎石膏所得濾液的參數(shù)v（mL）100150200250300V（mL）4999140190213c（mol/L）0.0160.01530.01470.01530.0155m（mg/g）1.67253.23144.39046.20167.0432應(yīng)用藥典方法對所得溶液進行鈣鹽的鑒別試驗。當(dāng)供試品按藥典方法稀釋20倍后，鑒別均為負反應(yīng)，稀釋10倍以及5倍時依然均為負

40、反應(yīng)。而供試品稀釋2倍時鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由圖3-3可知，當(dāng)煎煮時間為60min，所用溶劑體積為300mL時，所得濾液中鈣離子的含量最高，故選擇石膏的單煎時間為60min，溶劑蒸餾水體積用量為300mL時為最佳單煎提取條件。圖3-3不同體積溶劑單煎石膏所得濾液的質(zhì)量濃度曲線§ 不同溶劑對其溶液中鈣離子的影響以0.50%HCL、1.00% HCL、1.50% HCL、0.50%NaCL、0.90% NaCL、1.50% NaCL為溶劑，各取300mL，對石膏進行單煎60min。通過實驗得出其最后所得濾液的體積V（mL），溶液的物質(zhì)

41、的量濃度c（mol/L），以及溶液的質(zhì)量濃度m（mg/g）如表3-3和表3-4，質(zhì)量濃度與溶劑濃度之間的關(guān)系曲線如圖3-4。表3-3 用不同濃度的稀鹽酸做溶劑單煎石膏所得濾液的參數(shù)HCL（%）0.5%1.0%HCL1.5%HCLV（mL）205190235c（mol/L）0.07100.10270.1027m（mg/g）31.050741.627762.5163表3-4用不同濃度的氯化鈉做溶劑單煎石膏所得濾液的參數(shù)NaCL(%)0.50%0.90% 1.50% V（mL）213216223c（mol/L）0.02250.02630.0358m（mg/g）10.224012.119017.031

42、3應(yīng)用藥典方法對所得表3-3中得溶液進行鈣鹽的鑒別試驗。當(dāng)供試品按藥典方法稀釋20倍后，鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由于石膏的主要成分是含水硫酸鈣（CaSO4·2H2O），而硫酸鈣在銨鹽溶液、硫代硫酸鈉溶液、氯化鈉溶液或酸類中溶解，在水或乙醇中不溶。又由于用銨鹽溶液、硫代硫酸鈉溶液做溶劑時，對人體的健康不利。故本實驗選擇以稀鹽酸和氯化鈉為溶劑，由圖3-4可知，所得溶液中的鈣離子的質(zhì)量濃度隨稀鹽酸濃度的增加而增加，理論上為了使所得溶液中的鈣離子含量較高，應(yīng)當(dāng)增加稀鹽酸的濃度。但考慮到人飲用時的耐受性，不能選用太高濃度的鹽酸，故選用1.5%的

43、鹽酸。圖3-4不同濃度的稀鹽酸單煎石膏所得濾液的質(zhì)量濃度曲線應(yīng)用藥典方法對所得溶液進行鈣鹽的鑒別試驗。當(dāng)供試品按藥典方法稀釋20倍后，鑒別均為負反應(yīng)，稀釋10倍均為負反應(yīng)。而供試品稀釋5倍鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由圖3-5可知，所得溶液中的鈣離子的質(zhì)量濃度隨氯化鈉濃度的增加而增加，理論上為了使所得溶液中的鈣離子含量較高，應(yīng)當(dāng)增加氯化鈉的濃度。但考慮到人體所用生理鹽水的濃度為0.9%，從經(jīng)濟和人體的接受能力以及服用時的耐受性，選取0.9%為最佳濃度。圖3-5不同濃度的氯化鈉單煎石膏所得濾液的質(zhì)量濃度曲線§3.2 兩味藥材合煎對鈣離子濃度

44、的影響 使石膏分別與其余六味藥材分別合煎，以300mL蒸餾水為溶劑，煎煮60min。通過實驗得出其最后所得濾液的體積V（mL），溶液的物質(zhì)的量濃度c（mol/L），以及溶液的質(zhì)量濃度m（mg/g）如表3-5，其質(zhì)量濃度之間比例如圖3-6。表3-5兩味藥材合煎所得濾液的參數(shù)合煎配伍石膏和麻黃石膏和苦杏仁石膏和板藍根石膏和甘草石膏和瓜蔞石膏和金銀花V（mL）193204190215205185c（mol/L）0.01700.01730.02060.02280.02030.0193m（mg/g）6.99957.52908.349910.45768.87797.6171應(yīng)用藥典方法對所得溶液進行鈣鹽的

45、鑒別試驗。當(dāng)供試品按藥典方法稀釋20倍后，鑒別均為負反應(yīng)，稀釋10倍依然均為負反應(yīng)。而供試品稀釋5倍時，石膏和板藍根、石膏和甘草、石膏和瓜蔞的鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸，其余得為負反應(yīng)，將其余配伍的合煎液的供試品稀釋3倍時鑒別均為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由圖3-6可知，石膏和甘草合煎時所得的溶液中的鈣離子的濃度最高，其次為石膏和瓜蔞、石膏和板藍根。最后的為石膏和苦杏仁、石膏和金銀花、石膏和麻黃。故采用選擇石膏、甘草、瓜蔞三味藥材最佳合煎配伍。圖3-6兩味藥材合煎所得濾液的質(zhì)量濃度曲線A：石膏和麻黃B：石膏和

46、苦杏仁C：石膏和板藍根D：石膏和甘草E：石膏和瓜蔞F：石膏和金銀花§3.3三味藥材合煎對鈣離子濃度的影響 將石膏、甘草、瓜蔞三味藥材合煎，而后濃縮至適量后，用蒸餾水定容至100ml。而后按照藥典方法對溶液中的鈣鹽進行鑒別，當(dāng)供試品稀釋10倍時，其反應(yīng)為正反應(yīng)。經(jīng)EDTA滴定后計算的所得溶液中的鈣離子的物質(zhì)的量濃度為0.04mol/L,質(zhì)量濃度為8.5300mg/g。§3.4所有藥材采用不同配伍合煎對鈣離子濃度的影響 按照方案一到方案六進行實驗。通過實驗得出其最后所得濾液的體積V（mL），溶液的物質(zhì)的量濃度c（mol/L），以及溶液的質(zhì)量濃度m（mg/g）如表3-6，其質(zhì)量濃

47、度之間比例如圖3-7。表3-5所有藥材采用不同配伍合煎所得濾液的參數(shù)合煎配伍方案一方案二方案三方案四方案五方案六V（mL）100100100100100100c（mol/L）0.00920.01500.01250.00830.04830.0433m（mg/g）1.95563.20002.66671.777810.31119.2444應(yīng)用藥典方法對所得溶液進行鈣鹽的鑒別試驗，鑒別反應(yīng)為正反應(yīng)，即有白色沉淀生，且此白色沉淀不溶于稀醋酸，但可溶于稀鹽酸。由圖3-7可知，按照方案五所制備的小兒咳喘靈口中鈣離子含量最高。與方案一至四相比，其鈣離子含量有很大的提高，這是由于石膏的主要成分是含水硫酸鈣（Ca

48、SO4·2H2O），而硫酸鈣幾乎不溶于乙醇，故當(dāng)采用方案一至四，其所得的總濃縮液經(jīng)醇沉，在將溶液中的雜質(zhì)沉淀后除去的同時也將溶液中的大部分鈣鹽沉除了。而方案五和方案六行比，理論上藥材經(jīng)粉碎后應(yīng)當(dāng)更有利于有效成分的滲出，但同時也增加了煎煮液的渾濁度，故在進行醇沉?xí)r有較多的沉淀，這有可能使得藥液中的部分鈣鹽亦被沉除。由此可得出，采用方案五是備小兒咳喘靈時，可以較大的提高所得藥液中的鈣離子的含量，同時滿足國家藥典對鈣鹽的鑒別要求。圖3-7所有藥材合煎所得濾液的質(zhì)量濃度曲線A: 方案一B: 方案二C: 方案三D方案四:E方案五:F: 方案六第4章 結(jié)論由于鈣離子主要是從石膏中溶出的，所以本實

49、驗首先對影響石膏中鈣離子溶出的因素進行探測。其中影響鈣離子溶出的可能因素有煎煮的時間、溶劑的用量、所用溶劑的種類以及和其他藥材合煎時配伍的不同。通過實驗得出煎煮時間為60min，所得的溶液中的鈣離子的質(zhì)量濃度最高；以不同體積的蒸餾水為溶劑時，溶液中鈣離子的質(zhì)量濃度隨溶劑亮的增加而升高，選擇300mL為其最終煎煮是溶劑的用量。石膏分別和其它六味藥材合煎，實驗結(jié)果證明石膏和甘草合煎時所得的溶液中的鈣離子的濃度最高，其次為是石膏和瓜蔞的合煎，最后的為石膏和板藍根、石膏和苦杏仁、石膏和金銀花、石膏和麻黃。根據(jù)以上實驗結(jié)果，采用石膏、甘草和瓜蔞進行合煎實驗，實驗證明此三位合煎時，其所得溶液中的鈣離子濃度

50、并不會下降。故采用選擇石膏、甘草、瓜蔞三味藥材最佳合煎配伍。根據(jù)以上所得的結(jié)論，分別設(shè)計方案一至方案六。并經(jīng)實驗得出當(dāng)采用方案五時，所制備的小兒咳喘靈口服液中的鈣離子質(zhì)量濃度最高，即：石膏單煎，濾液不經(jīng)醇沉；其余六味藥材合煎，濾液經(jīng)醇沉，冷藏放置后回收醇，濃縮至適量，將石膏單煎濾液和其余六味藥材的濃縮液合并，加入防腐劑等加水定容。經(jīng)實驗證明此方案為小兒咳喘靈制備的最佳方法。參考文獻1 馬瑛，王嗣岑，董亞琳，小兒止咳口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J，西安交通大學(xué)藥學(xué)院中國藥房（醫(yī)院制劑），2004,15:10.2 王西芳，鄭伶俐，顧國強等，小兒咳喘靈口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2007,30(

51、2);49.3 管紅珍，彭智聰，小兒止咳口服液的質(zhì)量控制，中國醫(yī)院藥學(xué)雜志2003,23(12)：716.4 李蓉，李季蓬，鈣與生態(tài)大系統(tǒng)及其保健醫(yī)學(xué)作用J四川地質(zhì)學(xué)報，2004，24(2)：1071135 史凌改，張羅，鈣離子在呼吸道纖毛運動調(diào)控機制中的作用J國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2009,3(33)：63-656 LansLey AB，Sanderson MJReguLation of airway ciLiary activity by Ca2+：simuLtaneous measurement ofbeat frequency and intraceLLuLar Ca2+Bioph

52、ys J1999，77(1)：6296387 Zagoory O，Braiman AGheber L，et a1RoLe of caLcium and caLmoduLin in ciLiary stimuLation induced by acctyLchoLineAm J PhysioL CeLL PhysioL，200L，280(1)：100-1098 王可，文富強，馮玉麟，鈣離子激活的氯離子通道-1與呼吸疾病的氣道黏液高分泌J國外醫(yī)學(xué)呼吸系統(tǒng)分冊，2005,25(7)：538-5409 Nakanishin A，Morita S，Iwashita H，et aLRoLe of gob-

53、5 in mucus overproduction and airway hyperesponsiveness in asthmaProc NatL Acad Sci USA，2001,98(9)：5175-518010 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典（一部）S.北京：化工出版社，2010.11 錢梅, 王建榮, 艾宏承.火焰原子吸收光譜法測定原油及潤滑油餾分中鈣含量J .潤滑油，2002,17(5):52-56. 12CaLixto D C，Reis D S，Grinberg P.Determination of copper,iron,Lead and nickeL in gasoLine by eLectorthermaL atomic absorption spectrometry using three component soLutionJ.Atomic Spectroscopy, 2002, 57B(1): 15-28.13 張正奇，黃杉生.分析化學(xué)M.北京：科學(xué)出版社，2001: 22