氨咖黃敏膠囊微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案

1、氨咖黃敏膠囊微生物限度檢查方法適用性驗(yàn)證方案目 錄1. 概述2. 驗(yàn)證目的和范圍3. 組織及職責(zé)4. 驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表5. 驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn)6. 驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)7.驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法7.1試驗(yàn)菌株7.2需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證的菌液制備7.3需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證-常規(guī)傾注平皿法7.4控制菌檢查方法驗(yàn)證常規(guī)傾注平皿法8.偏差與漏項(xiàng)控制9.驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審1. 概述我公司生產(chǎn)品種氨咖黃敏膠囊，產(chǎn)品微生物限度檢查項(xiàng)目為需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、以及大腸埃希菌檢查和沙門(mén)菌檢查。參照中國(guó)藥典2015版四部附錄1105

2、：微生物計(jì)數(shù)法，以及1106：控制菌檢查法的規(guī)定，本公司對(duì)該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法予以驗(yàn)證。通過(guò)驗(yàn)證以確認(rèn)所采用的微生物限度檢查方法適用。本驗(yàn)證方案根據(jù)樣品特性制定微生物限度檢查方法和檢驗(yàn)條件，按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。2. 驗(yàn)證目的和范圍驗(yàn)證該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法的適用性，對(duì)其有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本驗(yàn)證方案采用3批按GMP要求組織生產(chǎn)的氨咖黃敏膠囊，進(jìn)行微生物限度檢查方法的驗(yàn)證。3.組織及職責(zé)3.1驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告的起草、審核、批準(zhǔn)驗(yàn)證方案由質(zhì)量部QC組負(fù)責(zé)起草，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)。驗(yàn)證方案實(shí)施完成后，由QC組負(fù)責(zé)匯總微

3、生物限度檢查法驗(yàn)證的結(jié)果、撰寫(xiě)報(bào)告，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)報(bào)告。3.2驗(yàn)證方案實(shí)施過(guò)程中的變更和偏差驗(yàn)證方案實(shí)施過(guò)程中如有變更和偏差，質(zhì)量部經(jīng)理應(yīng)當(dāng)組織進(jìn)行評(píng)估并采取相應(yīng)的控制措施。3.3 驗(yàn)證工作小組成員表姓名部門(mén)及職務(wù)職 責(zé) 質(zhì)量部經(jīng)理負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的批準(zhǔn) 質(zhì)量部QC組長(zhǎng)負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案審核、實(shí)施、匯總報(bào)告及培訓(xùn)工作 質(zhì)量部QC負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案起草、具體實(shí)施、報(bào)告工作4. 驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表 本次微生物限度檢查方法驗(yàn)證的計(jì)劃安排時(shí)間是 年 月至 年 月。5. 驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn)5.1.主要檢驗(yàn)儀器設(shè)備確認(rèn)表序號(hào)儀器設(shè)備名稱(chēng)型 號(hào)編號(hào)校準(zhǔn)單位校準(zhǔn)日期有效期至1電熱恒溫培

4、養(yǎng)箱12電熱恒溫培養(yǎng)箱23霉菌培養(yǎng)箱4高壓蒸汽滅菌鍋5單人凈化工作臺(tái)檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：5.2.驗(yàn)證所需文件的確認(rèn)表文件名稱(chēng)是否有效版本文件保存處中國(guó)藥典2015年版四部是 否質(zhì)量部檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6. 驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)6.1.試驗(yàn)菌種檢查表序號(hào)菌種名稱(chēng)代碼凍干菌種批號(hào)來(lái)源1金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003中國(guó)食品藥品檢定研究院2銅綠假單胞菌CMCC（B）10104中國(guó)食品藥品檢定研究院3枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501中國(guó)食品藥品檢定研究院4白色念珠菌CMCC（F）98001中國(guó)食品藥品檢定研究院5黑曲霉CMCC（F）98003中國(guó)食

5、品藥品檢定研究院6大腸埃希菌CMCC（B）44102中國(guó)食品藥品檢定研究院7乙型副傷寒沙門(mén)菌CMCC（B）50094中國(guó)食品藥品檢定研究院檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6.2試驗(yàn)所需的培養(yǎng)基檢查序號(hào)名稱(chēng)生產(chǎn)廠(chǎng)家是否通過(guò)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)批號(hào)01胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否02胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否03沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否04麥康凱液體培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否05麥康凱瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否06RV沙門(mén)菌增菌液體培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否07木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司是 否08三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基

6、北京奧博星生物公司是 否檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6.3. 檢驗(yàn)樣品確認(rèn)表序號(hào)品名生產(chǎn)廠(chǎng)家批號(hào)規(guī)格是否按GMP要求生產(chǎn)1氨咖黃敏膠囊*有限公司復(fù)方是 否2氨咖黃敏膠囊*有限公司復(fù)方是 否3氨咖黃敏膠囊*有限公司復(fù)方是 否檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：7.驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法7.1試驗(yàn)菌株氨咖黃敏膠囊需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證所用的菌株為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；控制菌檢查方法驗(yàn)證所用的菌株為大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌。試驗(yàn)菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。7.2 需氧菌總數(shù)檢查、

7、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證的菌液制備分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7,制成50100cfu/ml的菌懸液備用。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，2025培養(yǎng)23天，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，制成50100cfu/ml的菌懸液備用。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，2025培養(yǎng)57天，直到獲得豐富的孢子。加入3

8、5ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸至無(wú)菌試管中，取1ml加含有0.05%聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，制成50100cfu/m的孢子懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28，可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28 ,在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。驗(yàn)證時(shí)，對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率逐一進(jìn)行驗(yàn)證。7.3. 需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證-常規(guī)傾注平皿法.供試液的制備 取供試品10.0g，加PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，制成1：10的供試液。.試驗(yàn)組

9、取1：10的供試液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌），或培養(yǎng)5天（白色念珠菌、黑曲霉），點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取1：10的供試液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50100cfu的白色念珠菌、黑曲霉，分別注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。.供試品對(duì)照組取1：10的供試液1ml注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

10、20ml混勻，平行制備2個(gè)平皿。置3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取1：10的供試液1ml注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基20ml混勻，平行制備2個(gè)平皿。置2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。.菌液對(duì)照組取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌），或培養(yǎng)5天（白色念珠菌、黑曲霉），點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50

11、100cfu的白色念珠菌、黑曲霉，分別注入平皿中，立即傾注不超過(guò)45的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。. 常規(guī)傾注平皿法方法驗(yàn)證的接受標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值(即試驗(yàn)菌的回收率)應(yīng)在0 .52 范圍內(nèi)。. 常規(guī)傾注平皿法方法驗(yàn)證的結(jié)果.1. 常規(guī)傾注平皿法測(cè)定需氧菌總數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)

12、試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)3： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；

13、培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：.2. 常規(guī)傾注平皿法測(cè)定霉菌與酵母菌總數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

14、配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)3： 氨咖黃敏膠囊批號(hào): ；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)： 培養(yǎng)箱 型號(hào) 編號(hào) ；培養(yǎng)溫度： ；培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液對(duì)照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：. 常規(guī)傾注平皿法測(cè)定需氧菌總數(shù)、霉菌與酵母菌總數(shù)方法驗(yàn)證小結(jié)7.4.控制菌檢查方法驗(yàn)證常規(guī)傾注平皿法7.4.1試驗(yàn)菌株氨咖黃敏膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌為大腸埃

15、希菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌，所以選擇這兩種菌株進(jìn)行控制菌檢查的方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。7.4.2 控制菌檢查方法驗(yàn)證的菌液制備分別接種大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7,制成50100cfu/ml的菌懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28，可在24小時(shí)內(nèi)使用。驗(yàn)證時(shí)，對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率逐一進(jìn)行驗(yàn)證。7.4.3大腸埃希菌檢查方法驗(yàn)證7.

16、4.3.1供試液的制備 取供試品10.0g，加PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，制成1：10的供試液。7.4.3.2.試驗(yàn)組取供試液10ml，加入7.4.2項(xiàng)下制備的50100cfu的大腸埃希菌接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中,4244培養(yǎng)2448小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有大腸埃希菌典型菌落生長(zhǎng)。7.4.3.3陽(yáng)性對(duì)照組照7.4.2項(xiàng)下菌液制備方法，以0.9%無(wú)菌氯化鈉為稀釋液，將大腸埃希菌液稀釋至含菌

17、50100cfu/ml，取 菌液1 ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中,4244培養(yǎng)2448小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有大腸埃希菌典型菌落生長(zhǎng)。7.4.3.4陰性對(duì)照組 取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。7.4.3.5常規(guī)傾注平皿法測(cè)定大腸埃希菌方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1：氨咖黃敏膠囊批號(hào): 大腸埃希菌對(duì)照菌來(lái)源 批號(hào)（菌

18、種編號(hào)） 過(guò)程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板 配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 培養(yǎng)時(shí)間開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2：氨咖黃敏膠囊批號(hào): 大腸埃希菌對(duì)照菌來(lái)源 批號(hào)（菌種編號(hào)） 過(guò)程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板 配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫

19、度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 培養(yǎng)時(shí)間開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)3：氨咖黃敏膠囊批號(hào): 大腸埃希菌對(duì)照菌來(lái)源 批號(hào)（菌種編號(hào)） 過(guò)程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板 配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 培養(yǎng)時(shí)間開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)開(kāi)始 月 日 時(shí)結(jié)束 月 日 時(shí)試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日

20、期：7.4.3.6大腸埃希菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果小結(jié)7.4.4沙門(mén)菌檢查方法驗(yàn)證7.4.4.1.試驗(yàn)組取10g供試品接種至200ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，加入7.4.2項(xiàng)下制備的50100cfu的乙型副傷寒沙門(mén)菌2ml， 3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物0.1ml接種至10mlRV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基,3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取少量RV沙門(mén)菌增菌液體培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1848小時(shí)。沙門(mén)菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)生長(zhǎng)良好，菌落為淡紅色或無(wú)色、透明或半透明、中心有或無(wú)黑色。用接種針挑選出木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上的典

21、型菌落，于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)1824小時(shí)。7.4.4.3陽(yáng)性對(duì)照組取項(xiàng)下制備的50100cfu的乙型副傷寒沙門(mén)菌2ml接種至200ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中， 3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物0.1ml接種至10mlRV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基,3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取少量RV沙門(mén)菌增菌液體培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1848小時(shí)。沙門(mén)菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)生長(zhǎng)良好，菌落為淡紅色或無(wú)色、透明或半透明、中心有或無(wú)黑色。用接種針挑選出木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上的典型菌落，于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)

22、基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)1824小時(shí)。7.4.4.4陰性對(duì)照組 取0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液2 ml，接種至200ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。7.4.4.5常規(guī)傾注平皿法測(cè)定乙型副傷寒沙門(mén)菌方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1：氨咖黃敏膠囊批號(hào): 乙型副傷寒沙門(mén)菌對(duì)照菌來(lái)源 批號(hào)（菌種編號(hào)） 過(guò)程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 配制批號(hào) RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基 平板配制批號(hào) 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基斜面和高層穿刺接種配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 型號(hào) 編號(hào) 溫度 培養(yǎng)時(shí)間 月 日 時(shí)至 月 日 時(shí) 月 日 時(shí)至 月 日 時(shí) 月 日 時(shí)至 月 日 時(shí) 月 日 時(shí)至 月 日 時(shí)試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2：氨咖黃敏膠囊批號(hào): 乙型副傷寒沙門(mén)菌對(duì)照菌來(lái)源 批號(hào)（菌種編號(hào)） 過(guò)程增菌培養(yǎng)