中藥血清藥理學(xué)研究方法應(yīng)用現(xiàn)狀及展望

1、中藥血清藥理學(xué)研究方法應(yīng)用現(xiàn)狀及展望    【摘要】  近年來(lái)中藥血清藥理學(xué)研究取得了可喜的成績(jī)，隨著中藥血清藥理學(xué)所存在的問(wèn)題的逐步解決、方法更進(jìn)一步的成熟和完善，它將更廣泛地應(yīng)用于：（1）復(fù)方藥物的評(píng)價(jià)，具有直接的、快速的、敏感的、準(zhǔn)確的作用等特點(diǎn)；（2）復(fù)方藥物的機(jī)制研究，血清藥理學(xué)是復(fù)方藥物的機(jī)制研究主要研究方法之一，隨著化學(xué)分析手段的的完善，復(fù)方藥物中有效成分的逐步確認(rèn)，其藥理學(xué)機(jī)制也終將被揭開(kāi)；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的研究。 【關(guān)鍵詞】  血清藥理學(xué)；研究方法；綜述中藥血

2、清藥理學(xué)是近年來(lái)逐漸發(fā)展起來(lái)的研究中藥藥效較為科學(xué)的一種方法。它是由日本學(xué)者田代真一于1988年首次提出的，該方法就是將動(dòng)物灌服給予中藥或復(fù)方制劑后，在一定時(shí)間采集血液、分離血清進(jìn)行體外藥效實(shí)驗(yàn)。1990年，姜廷良教授1將它引入我國(guó)，之后國(guó)內(nèi)許多學(xué)者和專(zhuān)家進(jìn)行了大量的研究工作，取得了可喜的成績(jī)，積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，為中藥作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)的深入研究奠定了基礎(chǔ)。我國(guó)已將它列入國(guó)家自然科學(xué)基金資助范圍2，現(xiàn)就其研究應(yīng)用現(xiàn)狀作一綜述。1  中藥血清藥理學(xué)方法在我國(guó)的應(yīng)用現(xiàn)狀1.1  對(duì)中藥解熱作用的研究  楊奎等34研究含黃芩、藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對(duì)單核細(xì)胞

3、內(nèi)DNA合成、Ca2+內(nèi)流的影響，發(fā)現(xiàn)：含黃芩血清能明顯抑制單核細(xì)胞內(nèi)DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流，因而能阻止內(nèi)生致熱原的合成；而含藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對(duì)單核細(xì)胞的合成的抑制作用依次增強(qiáng)，含香薷血清呈明顯量效遞增性抑制作用，含羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清兩者在大劑量時(shí)卻呈促進(jìn)作用；對(duì)單核細(xì)胞內(nèi)流的影響，香薷的作用較九味羌活湯弱，但均呈量效遞增性抑制作用，而羌活勝濕湯則與此相反，在較大劑量時(shí)翻轉(zhuǎn)為促進(jìn)Ca2+內(nèi)流作用；時(shí)效關(guān)系表明，九味羌活丸對(duì)內(nèi)流的抑制作用在給藥后90min達(dá)高峰，對(duì)DNA合成的抑制作用在給藥后30min和90min間較明顯，對(duì)蛋白質(zhì)合成的影響在給藥后120min

4、內(nèi)呈輕微促進(jìn)作用。該實(shí)驗(yàn)表明采用中藥血清藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥時(shí)效關(guān)系研究，有較大的優(yōu)勢(shì)。1.2  對(duì)中藥抗腫瘤作用的研究  楊振江5等研究表明：含髓清丸中劑量組和高劑量組血清活細(xì)胞百分率均較對(duì)照組低，OD值明顯低于對(duì)照組，中劑量組和高劑量組細(xì)胞毒活性均大于20%，高劑量含藥血清組G1期DNA含量明顯低于對(duì)照組，中劑量組凋亡細(xì)胞百分率較高。髓清丸能抑制HEL細(xì)胞的增殖，并有一定的誘導(dǎo)HEL細(xì)胞分化、凋亡的作用。張建軍等6研究發(fā)現(xiàn)：富硒綠茶藥物血清對(duì)人肝癌細(xì)胞株能抑制生長(zhǎng)，抑制克隆，減少AFP和GT的合成和分泌，促進(jìn)ALB的合成，且呈現(xiàn)一定的濃度、時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，對(duì)人肝癌細(xì)胞株惡性

5、表型有逆轉(zhuǎn)作用，可誘導(dǎo)癌細(xì)胞向正常方向分化。王力倩7等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了含苦參、仙鶴草的血清及其煎劑對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除含仙鶴草血清外，其余都可明顯抑制S180細(xì)胞的生長(zhǎng)。初步證明苦參對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)確有細(xì)胞毒作用，而含仙鶴草血清與其煎劑出現(xiàn)了不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可能與中藥粗顆粒制劑干擾因素或與動(dòng)物體內(nèi)代謝過(guò)程及血清影響有關(guān)。1.3  對(duì)呼吸系統(tǒng)的作用的研究  小柴胡湯：研究發(fā)現(xiàn)，小柴胡湯濃縮液直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中有致有絲分裂作用，而用小柴胡湯的血清則無(wú)此作用。小柴胡湯的致有絲分裂作用，可能是由一些不能從胃腸道吸收的大分子物質(zhì)產(chǎn)生，或因有效成分經(jīng)

6、消化道或肝臟代謝失效所致。小青龍湯：黃堅(jiān)8等法研究發(fā)現(xiàn)，服用小青龍湯煎劑的豚鼠血清，具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用，且呈良好的量效關(guān)系，與用煎劑直接進(jìn)行的離體藥理實(shí)驗(yàn)的藥理效應(yīng)相似。1.4  對(duì)心血管系統(tǒng)的作用研究  邱幸生等9通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明：益氣通絡(luò)方低、中、高劑量含藥血清處理組心肌細(xì)胞bcl2陽(yáng)性表達(dá)比例均較單純?nèi)毖踉俳o氧組（HR組）有顯著增高，提示bcl2具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。隋因10等觀察灌胃給予紅花提取物的家兔的含藥血清對(duì)豚鼠離體的心臟的作用，發(fā)現(xiàn)灌胃給予紅花提取物5、10、20g-1后，含藥血清均能顯著增加豚鼠離體心臟冠脈流量，增強(qiáng)心搏幅度及減

7、慢心率。并在灌胃給予紅花提取物后60min所采血清的指紋譜中出現(xiàn)一些新的峰。陳長(zhǎng)勛11等采用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了附子對(duì)離體豚鼠左心房收縮力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服附子粗顆粒制劑后的     動(dòng)物血清與未服藥的動(dòng)物血清比較，具有明顯增強(qiáng)心肌收縮力和加快心肌收縮速度的作用，且于給藥后2h血清作用達(dá)到高峰，從而證明附子強(qiáng)心有效成分能經(jīng)胃腸道吸收入血，且不會(huì)一經(jīng)吸收而失活，說(shuō)明附子口服有效。張群豪12等研究表明：血府逐瘀煎劑濃縮液和含藥血清對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（SMC）增殖有抑制作用，并呈劑量依賴(lài)性，且煎劑濃縮液作用強(qiáng)于含藥血清，而空白血清

8、則無(wú)此作用，該實(shí)驗(yàn)為血府逐瘀的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。1.5  對(duì)免疫功能的影響作用的研究  梁春敏13等研究發(fā)現(xiàn)：玉屏風(fēng)散試驗(yàn)血清在灌胃后30min2h時(shí)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、小鼠IL2產(chǎn)生均有明顯促進(jìn)作用，其中以1h時(shí)作用最強(qiáng)，1h時(shí)對(duì)小鼠免疫功能有顯著增強(qiáng)作用。曾南14等觀察了灌服雪蓮蟲(chóng)草精大鼠的抗凝血對(duì)NK細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明給藥物抗凝血可明顯增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，給藥動(dòng)物血清1.25g/kg劑量組能增強(qiáng)IL-2活性，但7.5g/kg劑量組作用不明顯，而3.75g/kg劑量組則出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋度與內(nèi)容物有關(guān)。1.6  對(duì)中藥抗菌作用的研究&

9、#160; 楊奎15等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)方法進(jìn)行了中藥體外抗菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)含藿香正氣水、藿香正氣液及黃芩的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑菌率在70%以上。該研究發(fā)現(xiàn)：一些含中藥血清卻表現(xiàn)為促進(jìn)細(xì)菌繁殖作用；同時(shí)中藥復(fù)方、單味中藥均可出現(xiàn)多個(gè)抑菌高峰，提示中藥抗菌成分復(fù)雜，其吸收高峰時(shí)間不一致，有利于抑制細(xì)菌繁殖。這說(shuō)明中藥血清藥理學(xué)可用于檢測(cè)或反映中藥不良反應(yīng)。1.7  對(duì)中藥抗炎的作用的研究  研究中藥赤芍、黃連、牡丹皮、生姜、黃精、黃芩對(duì)花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，含黃連、赤芍的血清可抑制花生四烯酸的生物轉(zhuǎn)化，而其煎劑則無(wú)此作用。與此相反，生姜、牡丹皮、黃芩、黃精煎劑

10、有抑制作用，而其含藥血清則無(wú)效。1.8  對(duì)骨骼系統(tǒng)的作用的研究  韓立民16等以淫羊藿給大鼠灌胃和肌注連續(xù)7天，末次給藥90min后股動(dòng)脈無(wú)菌取血滅活、進(jìn)行成骨細(xì)胞（OB）培養(yǎng)。研究表明：服淫羊藿后的大鼠血清堿性磷酸酶活性顯著增高，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量增高，成骨細(xì)胞的數(shù)量增多，培養(yǎng)基中鈣含量明顯降低，劑量與作用呈正相關(guān)性，表明該藥是抗骨疏松癥的理想藥物之一。任光友17等用血清藥理學(xué)方法，在新生大鼠頭骨成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中，分別加入不同濃度的老年大鼠含羊藍(lán)合劑（YLM）血清，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中、高劑量組含羊藍(lán)合劑（YLM）血清對(duì)成骨細(xì)胞增殖率、成骨細(xì)胞ALP活性、成骨細(xì)胞BGP分泌，均有明

11、顯增長(zhǎng)作用，說(shuō)明老年大鼠含YLM血清對(duì)成骨細(xì)胞的增殖和分化功能具有增強(qiáng)作用。1.9  對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究  李翠屏等18用Daniel方法建立神經(jīng)元缺氧凋亡模型，加入益氣通絡(luò)方藥物血清，應(yīng)用碘化丙啶采染色法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)神經(jīng)元凋亡率，分光光度法檢測(cè)MDA、NO濃度，免疫組化法檢測(cè)bcl2表達(dá)，研究表明：益氣通絡(luò)方能顯著抑制缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡，并減少神經(jīng)元缺氧過(guò)程N(yùn)O、OFR的生成，上調(diào)bcl-2基因的表達(dá)。聶偉19等運(yùn)用血清藥理學(xué)方法觀察六味地黃湯（LW）及其活性組分（CA4、CA4-3）含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)胚胎大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：LW及CA4、CA

12、4-3含藥血清均可不同程度地提高海馬神經(jīng)元的存活率，并且與穩(wěn)定線粒體膜電位與其神經(jīng)保護(hù)作用具有密切關(guān)系。其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。而老年癡呆患者與中樞能量缺乏、神經(jīng)元數(shù)目減少與其線粒體功能障礙密切相關(guān)，提示該方法可用于老年癡呆的研究。1.10  對(duì)消化系統(tǒng)的作用的研究  劉成海20等研究表明，含扶正化瘀方的血清能明顯抑制肝貯脂細(xì)胞增殖，與藥物劑量及血清濃度呈正相關(guān)性，而且對(duì)貯脂細(xì)胞內(nèi)外膠原也有一定的抑制作用。曹宜21等通過(guò)觀察CC14、DGaIN+LPS和BCG+LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷茵陳蒿湯醇提物的氯仿、乙酸乙酯萃取部位及剩余乙醇提取物降低ALT活性的作用，發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯

13、醇提物的氯仿再提取部位的小鼠血清對(duì)DGaIN誘導(dǎo)大鼠的原代肝細(xì)胞ALT活性水平表現(xiàn)出穩(wěn)定的降低作用。李平22等研究發(fā)現(xiàn)：軟肝沖劑藥物血清對(duì)傳代的HSC增殖有明顯抑制作用，能顯著抑制HSC分泌TGF1，其作用與秋水仙堿相仿，可能是通過(guò)抑制細(xì)胞DNA合成及其有絲分裂，或抑制PDF1的產(chǎn)生及其受體表達(dá)，阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)，減少TGF1的分泌，下調(diào)I型膠原的基因登錄來(lái)實(shí)現(xiàn)抗肝纖維化的機(jī)制的。1.11  對(duì)生殖系統(tǒng)的作用的研究&nbs     p; 夏譽(yù)薇23等以50例不孕患者作受試對(duì)象（中藥組40例和西藥組10例），利用雞胚絨毛尿囊膜（CAM）模型

14、評(píng)價(jià)女貞孕育湯的血管生成活性和促進(jìn)血管生成的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在中藥組和西藥組治療前后卵泡期、排卵前、經(jīng)前期血清的比較，均有顯著性差異。王明軍24研究發(fā)現(xiàn)：用傅氏生化湯的水提濃縮液、水提醇沉物、揮發(fā)油、醇提濃縮液分別給小鼠灌胃，在一定時(shí)間內(nèi)取其血清經(jīng)過(guò)滅活后，以各給藥組滅活后的灌胃給藥血清供試液代替藥物供試液，結(jié)果表明，水提醇沉物具有促子宮收縮的作用，而且強(qiáng)于離體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。2  中藥血清藥理學(xué)研究方法的優(yōu)勢(shì)和存在的問(wèn)題2.1  中藥血清藥理學(xué)研究方法的優(yōu)勢(shì)  中藥血清藥理學(xué)是在以往體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)而形成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因而它最大的優(yōu)

15、點(diǎn)是：條件可控性強(qiáng)、揭示藥物作用機(jī)制較為深入、重復(fù)性好、使用材料少、更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實(shí)過(guò)程等。其主要優(yōu)勢(shì)具體如下：（1）采用含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞可直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng)，便于應(yīng)用細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)手段，從基因、基因產(chǎn)物、藥物受體和酶活性等諸方面闡述藥理機(jī)制。（2）使現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)有了一個(gè)可行的切合點(diǎn)，有利于應(yīng)用現(xiàn)代生命科學(xué)的技術(shù)手段和理論揭示中藥復(fù)方配伍的實(shí)質(zhì)，從而推動(dòng)中醫(yī)藥的科技進(jìn)步。（3）便于觀察和追蹤藥物吸收和代謝的過(guò)程，消除體外實(shí)驗(yàn)各種干擾因素的影響，以便于較為清楚地認(rèn)識(shí)復(fù)方藥物中主要藥物的有效成分及活性部位，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)藥物提供依據(jù)。論文出處(作者):2.2&

16、#160; 血清藥理學(xué)研究方法存在的問(wèn)題  中藥血清藥理學(xué)本身是一門(mén)方法學(xué)，從它引進(jìn)到我國(guó)到現(xiàn)在只有短短的十多年的時(shí)間，因而存在不少有待進(jìn)一步改進(jìn)之處：（1）血清學(xué)本身是一門(mén)方法學(xué)，其自身組分的復(fù)雜性至今尚未完全清楚，血清本身復(fù)雜的成分會(huì)影響體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，而中藥復(fù)方組分也是一個(gè)未知體系，兩個(gè)未知體系的疊加使原本復(fù)雜的體系更加復(fù)雜；而就目前的技術(shù)手段，尚不能分析復(fù)方血清中所有的單一成分，即無(wú)法詳盡地比較分析每一單一元素在復(fù)方中所起的作用，這無(wú)形中限制了中藥血清藥理學(xué)在中藥復(fù)方中的應(yīng)用范圍。（2）藥物血清的制備中，規(guī)范動(dòng)物給藥方案和采血時(shí)間，確立藥物的時(shí)效關(guān)系和量效關(guān)系一直是中藥藥理研

17、究的焦點(diǎn)。而且由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬的不同或種屬相同年齡性別的不同，都能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物敏感程度的差異以及對(duì)復(fù)方藥物中不同組分的吸收、轉(zhuǎn)化、作用靶點(diǎn)的相異，因此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬和年齡性別的選擇有待規(guī)范。（3）在體外培養(yǎng)體系中，不可能添加100%濃度的血清，而且不是所有的中藥都通過(guò)血液起作用，有的是對(duì)消化道直接作用，有的是通過(guò)局部起作用，這是血清藥理學(xué)難以解決的。（4）辨證論治是中醫(yī)診斷疾病的方法和特點(diǎn)，盡管實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)已經(jīng)有人將實(shí)驗(yàn)與證型相結(jié)合，但在實(shí)驗(yàn)學(xué)中卻往往忽視中醫(yī)內(nèi)涵，如何將辨病論治與辨證論治結(jié)合是血清藥理學(xué)需要解決的問(wèn)題。3  對(duì)中藥血清藥理學(xué)的展望   

18、; 盡管中藥血清藥理學(xué)的應(yīng)用、方法存在不少問(wèn)題，但作為一門(mén)新興方法學(xué)，它在復(fù)方藥理學(xué)研究中具有不可代替的作用。隨著中藥血清藥理學(xué)所存在的問(wèn)題的逐步解決、方法更進(jìn)一步的成熟和完善，它將更廣泛地應(yīng)用于：（1）復(fù)方藥物的評(píng)價(jià)，具有直接的、快速的、敏感的、準(zhǔn)確的作用等特點(diǎn)；（2）復(fù)方藥物的機(jī)制研究，血清藥理學(xué)是復(fù)方藥物的機(jī)制研究主要研究方法之一，隨著化學(xué)分析手段的的完善，復(fù)方藥物中有效成分的逐步確認(rèn)，其藥理學(xué)機(jī)制也終將被揭開(kāi)；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的研究。【參考文獻(xiàn)】     轉(zhuǎn)作用的血清藥理學(xué)研究J.微量元素

19、與健康研究，2002，19（2）：35.7 王力倩.用血清藥理學(xué)方法研究中藥苦參、仙鶴草的抗腫瘤作用J.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1995，2（5）：199.8 黃堅(jiān).用血清實(shí)驗(yàn)法觀察小青龍湯對(duì)離體豚鼠氣管平滑肌的作用J.中藥藥理與臨床，1995，11（6）：12.9 邱幸生.益氣通絡(luò)方對(duì)缺氧再給氧心肌細(xì)胞bcl-2基因表達(dá)影響的血清藥理學(xué)研究J.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2001，7（3）：3840.10隋因.運(yùn)用血清藥理學(xué)方法研究紅花對(duì)豚鼠離體心臟的作用J.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20（5）：373376.11陳長(zhǎng)勛.用血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法觀察附子的強(qiáng)心作用J.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1996，3（3）：12.12張群豪.用藥物血清學(xué)方法觀察血俯逐瘀濃縮丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16（3）：156.13梁春敏.玉屏風(fēng)散對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的血清藥理學(xué)研究J.上海免疫學(xué)雜志，200