不同時(shí)點(diǎn)分別結(jié)扎左、右頸總動脈建立大鼠血管性癡呆模型

1、不同時(shí)點(diǎn)分別結(jié)扎左、右頸總動脈建立大鼠血管性癡呆模型    None but a wise man can employ leisure well.                      作者：黃新武 李華 秦大蓮 陳美娟 張紅 章卓【摘要】  目的 改良大鼠血管性

2、癡呆（VD）雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎模型，提高模型動物存活率。方法 采取間隔3 d分2次結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈建立VD模型，觀察大鼠的成活率，及術(shù)后4 w和8 w學(xué)習(xí)記憶能力變化。結(jié)果 改良模型組動物存活率（96.0%）明顯高于傳統(tǒng)模型。術(shù)后4 w和8 w，該模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力障礙明顯，顯著低于假手術(shù)對照組()。結(jié)論 間斷永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈法是建造大鼠VD模型的理想方法。 Everybody's business is nobody's business.  【關(guān)鍵詞】 

3、; 動物模型；血管性癡呆；Morris水迷宮；大鼠永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈模型是血管性癡呆（VD）研究中常用的模型之一1，該模型較好地模擬了人類因動脈粥樣硬化、動脈管腔狹窄等因素導(dǎo)致的VD。而且，永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈導(dǎo)致VD的老年大鼠在術(shù)后2個月學(xué)習(xí)記憶能力仍無恢復(fù)趨勢，這有利于藥物療效的動態(tài)觀察，是VD研究的常用模型。傳統(tǒng)方法因雙側(cè)頸總動脈同時(shí)永久性結(jié)扎，對動物創(chuàng)傷大，死亡率高，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)成本升高，標(biāo)本獲取困難，實(shí)驗(yàn)周期延長。本文擬對傳統(tǒng)方法進(jìn)行改良，探討不同時(shí)點(diǎn)分別結(jié)扎左、右頸總動脈建立VD模型的成功率。1  材料與方法1.1  動物及儀器&

4、#160;God defend me from my friends; form my enemy I can defend myself.  健康雄性SD大鼠80只， 24月齡以上老年大鼠，體重（320±20）g，由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物科提供，為1級合格動物，動物合格證號：2401115。      MT200 Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文 )。I know no such thing as genius, it is nothing but labour

5、 and diligence.  1.2  實(shí)驗(yàn)方法 Joy put heart into a man.  大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對照組（30只）、模型組（50只）。具體實(shí)驗(yàn)方法如下：模型組，大鼠術(shù)前12 h禁食，自由飲水。用1戊巴比妥鈉（3 ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，將大鼠仰臥位固定于鼠臺，頸部皮膚剪毛備皮，碘伏酒精常規(guī)消毒。切口位于頸正中線左側(cè)旁開0.5 cm處，長約1 cm。鈍性分離皮下組織后，于切口正下方的斜方肌與氣管夾角處可見左側(cè)頸總動脈搏動。分離出左側(cè)頸總動脈后，以4號絲線雙重結(jié)扎。術(shù)中動作輕

6、柔，避免鉗夾和過分牽拉迷走神經(jīng)，注意無菌原則。行間斷縫合。術(shù)后3 d每天以碘酒消毒傷口及周圍皮膚。術(shù)后第4天，于頸正中線右側(cè)旁開0.5 cm處切開，分離并雙重結(jié)扎右側(cè)頸總動脈，其余操作同前。假手術(shù)對照組：雙側(cè)頸總動脈不結(jié)扎，余同模型組。1.3  指標(biāo)測定 術(shù)后觀察大鼠一般情況及成活率，于術(shù)后4 w及8 w分別檢測學(xué)習(xí)記憶成績。使用Morris水迷宮對大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力的測定2。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)分為兩部分： 定位航行實(shí)驗(yàn)：用于測量大鼠對水迷宮學(xué)習(xí)和記憶的獲取能力。實(shí)驗(yàn)歷時(shí)6 d，第1天讓大鼠自由游泳

7、2 min；從第2天起，每天分上、下午兩段，每段訓(xùn)練4次。訓(xùn)練時(shí)隨機(jī)選擇一個入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中， 系統(tǒng)自動記錄大鼠尋找并爬上平臺時(shí)所需時(shí)間(逃避潛伏期)及運(yùn)動軌跡，每次訓(xùn)練間隔為60 s。如果大鼠在120 s內(nèi)未找到平臺，須將其引至平臺，這時(shí)潛伏期計(jì)為120 s。空間搜索實(shí)驗(yàn)：在第6天最后一次訓(xùn)練后撤除水下平臺，在同一入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，系統(tǒng)自動記錄其在120 s內(nèi)跨過原平臺相應(yīng)位置的次數(shù)及運(yùn)動軌跡。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 Quality is better than quantity

8、.  計(jì)量資料以x±s表示，使用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。Nature is the glass reflecting truth.  2  結(jié)  果    模型組術(shù)后死亡2只，其余全部存活，存活率96.0%，一般情況良好。術(shù)后4 w和8 w，與對照組比較，模型組大鼠逃避潛伏期均明顯延長，在120 s內(nèi)穿越平臺的次數(shù)明顯減少（P<0.05）。模型組在4 w和8 w之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1、表2、表3。表1&#

9、160; 4 w大鼠在不同時(shí)間平均逃避潛伏期的比較(略)表2  8 w大鼠在不同時(shí)間平均逃避潛伏期的比較(略)表3  空間搜索實(shí)驗(yàn)120 s通過平臺次數(shù)(略)Throw away the apple because of the core.  3  討  論Answer a fool according to his folly.      VD是由一系列腦血管因素導(dǎo)致腦組織損害引起的癡呆綜合征?；颊弑憩F(xiàn)為記憶及認(rèn)知

10、等功能障礙綜合征，不僅嚴(yán)重?fù)p害患者的健康，影響患者的生命質(zhì)量，也給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。在我國11個城市流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，60歲以上人群中VD的患病率為324/10萬人口，老年性癡呆（AD）為238/10萬人口，VD占各類癡呆的第一位。VD患者的平均生存時(shí)間為41個月，5年內(nèi)死亡率達(dá)60以上3。并且隨著人類社會的老齡化，VD已是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界研究的重要課題，由于對本病的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，亦缺少治療本病的特效藥物，因此建立理想的VD動物模型對于探明VD的病因、病理過程以及尋找和篩選防治藥物具有重要意義。    永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈建立VD模型是

11、VD研究中常用的模型之一。有文獻(xiàn)報(bào)道報(bào)道，該模型動物死亡率極高，存活率僅為12.5%4，本實(shí)驗(yàn)組在以往實(shí)驗(yàn)中采用該模型5發(fā)現(xiàn)的動物存活率也極低，實(shí)驗(yàn)成本加大，周期較長，給研究帶來很多困難。而間斷永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈改良模型大鼠恢復(fù)蘇醒快，死亡率低，動物存活率高達(dá)96.0%。蘇醒后對其進(jìn)食和活動的影響也較小。通過Morris水迷宮檢測，模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)穿越平臺的次數(shù)明顯減少，空間記憶障礙明顯，成功建造了大鼠癡呆模型，并且分別在術(shù)后4及8 w檢測學(xué)習(xí)記憶能力無明顯變化，說明模型穩(wěn)定。其優(yōu)點(diǎn)有：間斷永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈改良模型采取頸正中線旁切口，利于分離頸總動

12、脈，減少了對迷走神經(jīng)的牽拉和損傷；分次結(jié)扎，有利于腦部血流重新分配，腦部血供重新建立，機(jī)體逐漸代償適應(yīng)；這種模型更接近臨床上常見的腦部慢性缺血的病理過程。因此認(rèn)為，采取間斷永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈可以成功建立VD模型，且較傳統(tǒng)雙側(cè)頸總動脈同時(shí)永久性結(jié)扎建立VD模型更理想?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 蔡 晶，杜 建.血管性癡呆動物模型的制作方法及其評價(jià)J.中醫(yī)藥學(xué)刊，2002；20(5):617.2 Vorhees CV，Williams MT.Morris water maze：procedures for assessing spatial and related forms of learning and memoryJ.Nature Protocols，2006；1(2)：848.3 Bomebroke M,Breteler NM.Epidemiology of nonAD dementiasJ.Clin Neur