乙肝為何測(cè)e抗原和s抗原

1、乙肝為何測(cè)e抗原和s抗原乙型肝炎病毒(HBV )外膜蛋白包括 S、前S2和前S1 三種成分前S1蛋白在病毒侵入肝細(xì)胞過(guò)程中起重要作用.含有前S1的蛋白主要存在于 Dane顆粒和管型顆料上.前S1蛋 白在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面 起有十分重要作用 .乙肝病毒前 S1 抗原酶免測(cè)定試劑盒的正式推向臨床以 及近兩年在、 、等近百家醫(yī)院與乙肝“兩對(duì)半”檢測(cè)的聯(lián) 合應(yīng)用 ,充分顯示了該試劑在病毒性乙型肝炎的臨床診斷,指導(dǎo)治療等方面的重要價(jià)值前S1抗原(Pre-S1Ag )檢測(cè)是對(duì) 乙肝“兩對(duì)半”尤其是 e抗原和HBV-DNA測(cè)定的重要補(bǔ)充 和加強(qiáng) .前 S1 抗原與 HBV-DN

2、A 檢出率兩者符合 ,前 S1 抗原僅在 HBV-DNA陽(yáng)性血清中檢出前S1蛋白隨HBeAg消失而消失, 且與陰轉(zhuǎn)時(shí)間呈正相關(guān) ,這樣,前 S1 抗原可作為病毒清除與病 毒轉(zhuǎn)陰的指標(biāo) .前 S1 抗原陽(yáng)性的乙型肝炎患者傳播乙型肝炎 病毒比前 S1 抗原陰性和無(wú)癥狀 HbsAg 攜帶者的危險(xiǎn)性更大 , 因而說(shuō)明前 S1 抗原可反映乙型肝炎病毒復(fù)制和傳染性的指 標(biāo).如果前 S1 抗原持續(xù)陽(yáng)性 ,指示 AHB 向慢性轉(zhuǎn)變 .比較急性 乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和 HBsAg 陽(yáng)性的患者血清中前 S1 蛋白 ,前 S1 抗原陰轉(zhuǎn)愈早 ,AHB 患者的療程愈短 ,預(yù)后也愈好 .說(shuō)明前 S1 抗原及其抗體的

3、檢測(cè)是急性乙型肝炎的臨床診 斷 ,療效觀察和判數(shù)據(jù)預(yù)后的良好指標(biāo).前 S1 蛋白的分子生物學(xué)特性1乙肝病毒（ HBV ）的基因結(jié)構(gòu)HBV 為嗜肝 DNA 病毒,由一個(gè)不完全雙鏈 DNA 組成 , 約 3200 個(gè)氨基酸 . 長(zhǎng)鏈 L 含 4 個(gè)開(kāi)放讀碼框架 ,為病毒蛋白的 編碼區(qū)：S區(qū)、C區(qū)、P區(qū)、X區(qū).短鏈S相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%-100%, 其不固定端可被原性 DNA 多聚酶延長(zhǎng) ,使病毒成為完整的雙 鏈.2HBV 基因組編碼 HBV 抗原,所有四個(gè)功能性讀碼框 架位于DNA負(fù)鏈,P基因編碼DNA聚合酶.C基因編碼 HbcAg.S基因編碼S抗原,前S1抗原和前S2抗原.X基因編 碼X產(chǎn)物.3.

4、編碼不同形式的表面抗原（HBsAg ）的HBV基因區(qū) 域由大蛋白（LHBs ），中蛋白（MHBs ）和小蛋白（SHBs） 組成 ,其氨基酸組成的肽段長(zhǎng)短不同.在第一和第二個(gè)起始密碼子之間的序列稱(chēng)為 Pres1,在第二和第三個(gè)之間為Pres2從第三個(gè)密碼子到終點(diǎn)密碼子的序列為S.前S1抗原（Pre-S1Ag）的臨床意義和用途：1反映 HBV 的感染與復(fù)制狀況的指標(biāo)前 S1 抗原主要存在于血清中 HBV 表面.提示機(jī)體含有HBV 就有前 S1 抗原.前 S1 抗原與 HBV-DNA,HBeAg 檢測(cè)率高度符合是一項(xiàng) 十分重要的病毒復(fù)制指標(biāo) .提示前 S1 抗原可作為 HbeAg 和 HBV-DNA

5、 檢測(cè)的補(bǔ)充和對(duì)照 .抗 HBeAb （ +）慢性乙型肝炎（約占患者的30%左右）和 HBV 慢性無(wú)癥狀攜帶者中 ,前 S1 抗原（ + ）可表示病毒的 復(fù)制,提示臨床上只檢測(cè)“乙肝五項(xiàng)”是不夠的,補(bǔ)充前 S1 抗原的測(cè)定是十分重要的 ,可彌補(bǔ)因病毒變異和其它原因造成 的 HBeAg （ -）的“誤尋” .病毒附著于肝細(xì)胞上 ,最重要的介導(dǎo)部位是前 S1 蛋白的 氨基酸（AA ） 21-47片段,變異的病毒只要這一區(qū)段完好就有 傳染性.2預(yù)后及藥物療效的判斷急性乙型肝炎患者前 S1 抗原陰轉(zhuǎn)越早 ,預(yù)后越好 ,是病毒 清除的最早跡象，反之,前S1抗原持續(xù)陽(yáng)性，將發(fā)展至慢性肝 炎.因病毒基因變異

6、的 HBeAb （ +）慢性乙型肝炎病人 ,較易 進(jìn)展為肝硬化 ,甚至肝癌 .加強(qiáng)檢測(cè)前 S1 抗原,是一種檢測(cè)疾 病預(yù)后的良好手段 .前 S1 抗原可作為藥物抗病毒療效的指標(biāo),是對(duì)HBV-DNA 和 HBeAg 指標(biāo)的補(bǔ)充和加強(qiáng) .3早期診斷乙型肝炎病毒的感染前 S1 抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的最早期,在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出 ,提示可作為早期診斷乙肝病毒感染在體檢和獻(xiàn)血員中加查前 S1 抗原,可起來(lái)疾病的早期 診斷和盡早切斷傳染原的重要作用 .問(wèn)題一、檢驗(yàn)兩對(duì)半為何還要查 Pre-S1,重復(fù)檢查是浪費(fèi)嗎？答：目前 ,乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要是 HBV-M （即乙肝五項(xiàng) ,包括 HBs

7、Ag 、 HBsAb 、 HBeAg、 HBeAb 和 HBcAb ）.目的是診斷患者的感染狀況 ,病毒復(fù)制情況 ,病程預(yù) 后和藥物療效的觀察等 .前 S1 抗原的檢測(cè)能夠從以下幾個(gè)方 面彌補(bǔ)和加強(qiáng)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足 .1前 S1 抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的早期,在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出 ,提示可作為早期診斷乙肝病毒感染的指標(biāo).2急性乙型肝炎患者前 S1 抗原陰轉(zhuǎn)越早 ,預(yù)后越好 ,是 病毒清除的最早跡象 .反之,前 S1 抗原持續(xù)陽(yáng)性 ,將發(fā)展至慢 性肝炎 （. 此指標(biāo)比 HBeAg 陰轉(zhuǎn)、 HBsAb 陽(yáng)轉(zhuǎn)指標(biāo)提示要早） .3HBeAb（ +）慢性乙型肝炎約占慢性乙肝的 30%-50%,

8、檢測(cè)前 S1 抗原 ,提示病毒在機(jī)體繼續(xù)復(fù)制 ,此類(lèi)患者更容易演 變?yōu)楦斡不蚋伟?.加查前 S1 抗原 ,彌補(bǔ)了因 HBeAg 缺失造 成的診斷和治療困難 .4在 HBV 無(wú)癥狀攜帶者中 ,有一定比例的 HBeAb （+） 者,加查前 S1 抗原（ +）提示病毒在體還較活躍 .病毒并沒(méi)有 清除 ,肝臟還有潛在的病理?yè)p傷的可能.5抗病毒治療乙型肝炎 ,加查前 S1 抗原可作為治療前的 患者篩查和治療后的療效判斷 ,尤其對(duì) HBeAb （ +）的慢性肝 炎患者抗病毒治療的排查也起到重要作用 .所以檢驗(yàn)兩對(duì)半 ,加查前 S1 抗原可在急性肝炎 ,慢性肝炎,HBV無(wú)癥狀攜帶者和抗病毒治療乙型肝炎診療

9、過(guò)程中起 到十分重要的作用 .這樣的加查 ,不能說(shuō)是浪費(fèi) .二、HbeAb （+）的 HBV 感染者中 ,為何要檢查前 S1 抗 原?在我國(guó)近 3 千萬(wàn)人的慢性乙型肝炎患者中 ,其中約有30%左右的患者，抗HBe陽(yáng)轉(zhuǎn)后，病毒在體繼續(xù)復(fù)制，病情較重， 其中部分可以演變?yōu)楦斡不蚋伟?自然好轉(zhuǎn)率非常低 .同樣,HBeAb （ +）的HBV無(wú)癥狀攜帶者也占有一定的比例 這 一部分 HBeAb （ +）的慢性肝炎和 HBV 無(wú)癥狀攜帶者 ,往往 是因?yàn)椴《净蜃儺愃?,其所攜帶的 HBV 變異毒株大多數(shù) 表現(xiàn)為在病毒基因組前 C區(qū)末端1896位發(fā)生G-A點(diǎn)突變， 產(chǎn)生一個(gè)新的終止密碼子（ TAG）

10、,阻斷了 HBeAg 的形成 ,導(dǎo) 致在臨床上出現(xiàn) HBeAg 缺陷和 HBV 血清型 .因 HBeAg 的缺 失,造成診斷和治療的困難 .此時(shí) ,檢測(cè)前 S1 抗原既能較為準(zhǔn) 確的檢測(cè)病毒在機(jī)體復(fù)制狀況 ,又能診斷疾病的轉(zhuǎn)歸和了解 是否攜帶 HBV 變異毒株 .充分顯示了前 S1 抗原的臨床價(jià)值 . 所以抗 HBeAb（ +）的 HBV 感染者中 ,加查前 S1 抗原是非常 必要的 .三、為什么檢測(cè) HBV-DNA還要檢測(cè)前S1抗原？1前 S1 蛋白是乙型肝炎病毒（ H BV ）外膜蛋白的主要 專(zhuān)長(zhǎng)部分 ,它含有肝細(xì)胞受體 ,在 HBV 感染細(xì)胞和機(jī)體免疫應(yīng) 答方面起重要作用 .在病毒感染機(jī)

11、體的整個(gè)周期中 ,前 S1 蛋白 的獨(dú)特功能 ,使其能夠較充分的反應(yīng)機(jī)體的體液免疫狀況,直至病程的轉(zhuǎn)歸過(guò)程（如早期診斷 ,急性肝炎前 S1 抗原陰轉(zhuǎn)是 病毒清除的最早跡象 ,反之疾病將發(fā)展至慢性肝炎等臨床診 斷以及前 S1 抗原陰轉(zhuǎn) ,前 S1 抗體出現(xiàn)等免疫學(xué)反應(yīng)） 這是單 一測(cè)定 HBV-DNA 所不能做到的 .2免疫測(cè)定技術(shù)因其有效、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn),已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地位 .前 S1 抗原的檢測(cè)與基因測(cè)定 HBV-DNA 在治療方面能夠相互補(bǔ)充和加強(qiáng) ,就像 HBV-DNA 不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣 ,同樣 HBV-DNA 也不能替代 前 S1 抗原的檢測(cè) .3HBV DNA

12、-PCR 技術(shù)要求精密、所需要的條件高 ,易 發(fā)生污染和假陽(yáng)性 ,不適于做常規(guī)檢測(cè) ,前 S1 抗原測(cè)定與之相 互補(bǔ)充和加強(qiáng) ,使結(jié)果特異 ,準(zhǔn)確無(wú)誤 ,進(jìn)而提高臨床大夫的診 斷和治療水平 .前 S1 抗原的檢測(cè)由阿爾法生物技術(shù)生產(chǎn)的乙型肝炎病毒前 S1 抗原酶免 診斷試劑盒采用 ELISA 雙抗體夾心法 ,測(cè)定前 S1 抗原肽 ,最低 檢測(cè)濃度為 0.1ug/L.檢測(cè)原理采用雙抗體夾心 ELISA法，用抗-PreSI和抗HBs作為固 相化抗體和酶標(biāo)抗體 ,如果標(biāo)本中存在乙肝病毒 PreS1 抗原 , 則形成抗體 -抗原 -酶標(biāo)抗體復(fù)合物 ,加入 TMB 底物產(chǎn)生顯色 反應(yīng) ,反之則無(wú)顯色反應(yīng)

13、 .適用于血漿和血清類(lèi)標(biāo)本 .試劑盒組成 微孔板、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、酶結(jié)合物、顯色液A、顯色液B、終止液、洗滌液.操作步驟1.反應(yīng)孔加入待測(cè)標(biāo)本 50ul,設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各 2孔，每 孔加入陰、陽(yáng)性對(duì)照各 50ul,并設(shè)空白對(duì)照1孔，置37C孵育 30min.2洗板3.每孔加入酶結(jié)合物 1滴或50ul （空白對(duì)照孔除外），置37 C孵育30min.4洗板5.加入顯色液 A、B各一滴，充分混勻后，置37C孵育15min.6加入終止液、混勻 . 7酶標(biāo)儀讀數(shù) .結(jié)果判斷1所有陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)本的讀數(shù)值減去空白對(duì)照讀數(shù)即為計(jì)算值 .2陽(yáng)性對(duì)照讀數(shù)必須比陰性對(duì)照讀數(shù)大0.300.實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立.3結(jié)果判斷：臨界值（ CUTOFF ） =2.1*陰性對(duì)照平均 OD 值 .