有關物質(zhì)方法開發(fā)及驗證

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上有關物質(zhì)方法開發(fā)以及驗證有關物質(zhì)方法開發(fā)流程（主要針對仿制藥）：1. 有關物質(zhì)條件的選擇：查詢或者購買開發(fā)品種的國內(nèi)外質(zhì)量標準，有進口的得到進口注冊標準，找到國內(nèi)代表性企業(yè)的質(zhì)量標準（主要是首仿廠家和最新批準廠家的質(zhì)量標準），比較這些標準，絕大多數(shù)情況下可以篩選出理想的檢測條件。篩選過程一般以相同濃度樣品進行，得到以下結果： 有關物質(zhì)方法比較表品名標準色譜柱流動相檢測波長流速稀釋溶劑供試品溶液對照溶液限度不同方法考察結果表方法1方法2 保留時間（min）理論塔板數(shù)分離度拖尾因子保留時間（min）理論塔板數(shù)分離度拖尾因子雜質(zhì)1/雜質(zhì)2雜質(zhì)3主峰雜質(zhì)4/這樣基本可以得知哪

2、個方法的優(yōu)劣。波長的選擇：有關物質(zhì)檢測主要是考慮所有雜質(zhì)的檢出情況，因此，應全盤關注雜質(zhì)的檢測波長，可以采用已知雜質(zhì)UV掃描和對未知雜質(zhì)的DAD掃描得出較好的檢測波長，切記不能只考慮主成分的最大吸收。2. 系統(tǒng)適應性系統(tǒng)適應性主要考察雜質(zhì)與主峰、雜質(zhì)與雜質(zhì)的分離情況，一般要求雜質(zhì)與主峰或者已知雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的分離度不小于1.5，未知雜質(zhì)與未知雜質(zhì)之間的分離度不小于1.2，同時關注拖尾因子與理論塔板數(shù)等信息。通常采用在被測物對照品（或者供試品）中加入適量的雜質(zhì)或輔料，以檢測分離情況。雜質(zhì)加入量一般為被測物濃度的1%，以模擬被測物中雜質(zhì)的存在狀態(tài)。接收標準：每個成分6針相對標準偏差不大于5.0%，

3、此數(shù)據(jù)也可作為精密度試驗數(shù)據(jù)。3. 定量方法的選擇有關物質(zhì)定量方法主要有雜質(zhì)對照品法、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法、峰面積歸一化法等幾種。在我國，峰面積歸一化法暫時還未能接受，毫無疑問，定量最精確的為雜質(zhì)對照品發(fā)，但有些雜質(zhì)對照品的獲得極難，成本也很大，尤其是在訂入質(zhì)量標準中，無疑為以后產(chǎn)品的生產(chǎn)檢測帶來極大困難與成本的大幅增加；加校正因子的主成分自身對照法為雜質(zhì)定量的合適方法，但要求計算校正因子，有時在進口標準或者國外藥典標準中已有雜質(zhì)校正因子，但為了驗證自身實驗條件或者實驗環(huán)境的精確情況，一般重新再計算校正因子與已知校正因子進行對比，在正常情況下，自身計算的

4、校正因子與已知的校正因子無明顯差異為最佳情況，校正因子的計算要求采用不同的色譜柱在不同的液相系統(tǒng)多次計算求得平均值作為校正因子。校正因子的獲得最常用的就是分別制備相同濃度的被測物與各雜質(zhì)溶液，分別得到標準曲線，其斜率值即為相應的校正因子（f）。當f為0.81.2時，可以采用不加校正因子的主成分自身對照法定量，若f1.2或0.8時，則應加入校正因子進行定量；不加校正因子的自身對照法操作簡單，但要求其雜質(zhì)響應與主峰一致。4. 供試品溶液濃度的確定、檢測限和定量限供試品溶液的濃度應能有效檢出相關雜質(zhì)，但濃度太高會產(chǎn)生主峰嚴重拖尾、分裂、檢測器和色譜柱過載等情況，若濃度太低，則不利于雜質(zhì)檢出。一般以檢

5、測限作為衡量指標，謝沐峰老師的一片文章提到主峰濃度應為檢測限濃度的20005000倍，通常情況，我們做到主峰濃度不小于檢測限濃度的10000倍。數(shù)據(jù)如下報告：5. 強力破壞試驗破壞條件有酸、堿、高溫、光照、氧化，為了確認雜質(zhì)的來源，同時對比空白（酸、堿、過氧化氫）與未破壞樣品。強力破壞以兩種狀態(tài)進行：溶液狀態(tài)：熱、酸及堿水解、氧化、光照固體狀態(tài)：高溫、高濕和光照破壞程度不宜太大，以產(chǎn)生20%左右雜質(zhì)的條件為宜，在破壞試驗過程中，最好采用二極管陣列檢測器，便于檢測各峰的峰純度，同時應該注意物料平衡以及過氧化氫溶液的濃度不宜太大（否則很溶液損壞色譜柱）。下面采用一個表格說明：品名主峰已知雜質(zhì)峰未知

6、雜質(zhì)峰新增雜質(zhì)峰主峰與鄰峰分離度空白/破壞前溶液/酸破壞溶液高溫（120）破壞溶液/高溫（100水?。┢茐娜芤汗馄茐娜芤?氧破壞溶液/破壞前DAD掃描結果雜質(zhì)峰（保留時間（分鐘）變化情況最大吸收波長（nm）3點峰相似度已知雜質(zhì)未知雜質(zhì)主峰6. 線性試驗在已知雜質(zhì)定量中，通常將雜質(zhì)限度設定為該雜質(zhì)100%濃度，線性范圍為10%150%，可接受范圍為：回歸線的相關系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應在100響應值的25以內(nèi)，響應因子的相對標準差應不大于10%。數(shù)據(jù)應如下報告：Std soln.No.% of Wk. Std Conc.Conc. ug/ml% in a samplePeak a

7、rea1100.600.0665032201.200.12128623503.010.30337024804.820.485368551006.020.606706261509.030.90R20.991.00Slop11216 Y-intercept-3367. 溶液穩(wěn)定性試驗 考察樣品在配制溶劑中的雜質(zhì)與主成分的穩(wěn)定性。配制供試品溶液，測定條件下放置，分別于0、2、4、6、8、12小時進樣?？疾祉椖恳娤卤恚簳r間（小時）0246812RSD（%）絕對差值主峰面積特定雜質(zhì)1（%）單個雜質(zhì)（%）新增雜質(zhì)%均未檢出總雜質(zhì)（%）可接受的標準為：主成分的含量變化的絕對值應不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對

8、值在±0.1以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)。8. 準確度以回收率表示，有2種做法，其一為將雜質(zhì)以1%濃度加入被測物溶液中，制備6份溶液，考察主峰與雜質(zhì)之間的分離度和各物質(zhì)的回收率，計算RSD；其二為將雜質(zhì)以（3*LOD，3*100%,3*150%）濃度加入供試品溶液中共9份溶液，計算回收率以及精密度?？山邮軜藴剩好總€雜質(zhì)回收率為80%120%，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標準差應不大于10%。9. 耐用性試驗 分別考察流動相比例變化±5、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標準為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標準差應不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1以內(nèi)