流感病毒樣顆粒疫苗研究進(jìn)展.docx

1、Vol.30No.5Sep.2009中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)流感病毒樣顆粒疫苗研究進(jìn)展吳蒙，張定梅綜述；陸家海*審校(中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)與流行病學(xué)系，廣東廣州510080)摘要：疫苗接種是預(yù)防各種類型流行性感冒的理想方式，但流感病毒血清亞型多變異性強(qiáng)，給流感疫苗的研發(fā)帶來(lái)一定的挑戰(zhàn)。病毒樣顆粒(VLP)是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的空心顆粒，形態(tài)結(jié)構(gòu)上類似完整病毒，具有與完整病毒相似的免疫原性,并通過(guò)激活抗原提呈細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。VLP不含有病毒核酸，不能0主復(fù)制，因此無(wú)致病性，在疫苗

2、研發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用前景?，F(xiàn)已有H1N1、H3N2、H5N1JI7NI、H5N3及H9N2型流感VLP合成的報(bào)道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這些VLP可誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。數(shù)種二價(jià)(多價(jià))混合流感VLP也被合成并證實(shí)在不同亞型流感病毒間具有交叉保護(hù)作用。佐劑的使用能夠增強(qiáng)流感VLP疫苗的免疫原性。目前的研究表明流感VLP疫苗耳有商免疫效價(jià)、能有效誘導(dǎo)交叉免疫應(yīng)答和安全性高等特點(diǎn),但現(xiàn)有研究大多是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床前實(shí)驗(yàn)。流感VLP疫苗的安全性、效價(jià)及免疫途徑等方面還有待進(jìn)一步的研究及臨床實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。本文就近年來(lái)流感病毒樣顆粒疫苗的研究進(jìn)展，從流感VLP的合成和釋放、免疫機(jī)制、已合成的流感VLP、佐劑的使用等

3、方面進(jìn)行綜述。關(guān)鍵詞：流感；病毒樣顆粒；疫苗中圖分類號(hào)：R186文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-3554(2009)05-0486-06ProgressinInfluenzaVirus-LikeParticlesVaccineStudiesWUMeng,ZHANGDing-mei,LUJia-hai*(DepartmentofMedicalstatisticsandEpidemiology,SchoolofPublicHealth,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China)Abstract:Vaccinationisanidealwaytoprev

4、entalltypesofinfluenza,butnumerousserotypesandhighvariabilityofinfluenzaviruschallengeresearchanddevelopmentofinfluenzavaccines.Virus-likeparticles(VLP)arehollowparticlesthatcontainoneormorestructuralproteinsofacompletevirus,theysharesimilarstructureandimmunogenicity.Byactivatingantigen-presentingce

5、lls,VLPinducingimmuneresponses.VLPdonotcontainviralnucleicacid,whichmeansthatVLPhasnopathogenicityandsuggestedasapromisingplatformforvaccines.NowH1N1,H3N2,H5N1,II7N1,H5N3andH9N2influenzaVLPhavebeenproduced,andanimalexperimentshaveprovedtheseVIPcaninduceprotectiveimmune.Severaldivalent(multivalent)mi

6、xedinfluenzaVLPhavealsobeenproducedandhaveacross-protectionactivity.AdjuvantscanenhancetheimmunogenicityofinfluenzaVLPvaccine,AlthoughcurrentstudyshowedthatinfluenzaVLPvaccinehavehightiters,caneffectivelyinducecross-infectionimmuneresponsesandhasnopathogenicity,Iheyareallanimalorpre-clinicalexperime

7、nts.Safety,efficacyandimmuneroutesofinfluenzaVLPvaccinestillneedforfurtherstudiesandveriGcationofclinicaltrials.Inthisarticle,webrieflydescribetheproduceofinfluenzaVLP,immunemechanisms.speciesofinfluenzaVLPhavebeenpnxluctedaswellastheadjuvants.Keywords:influenza；virus-likeparticles；vaccineJSUNYat-se

8、nUniv(MedSci),2009.30(5)：486-491收稿日期：2009-07-05作者簡(jiǎn)介：吳蒙，碩士研究生.研究方向?yàn)榉肿恿餍胁W(xué)與疫苗學(xué),E-mail:wumeng.xp；*通信作者:陸家海.教授，博士生導(dǎo)師,E-mail:iiahailu病毒樣顆粒(virus-likeparticles,VLP)是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的空心顆粒，因?yàn)閂LP不含有病毒核酸物質(zhì),不能自主復(fù)制，因此也不具有感染性。而且VLP表面能夠重夏高密度的表達(dá)抗原表位,從而引發(fā)強(qiáng)有力的免疫應(yīng)答，因此它對(duì)多種疾病來(lái)說(shuō)都是一種理想的疫苗形式。VLP疫苗是近年來(lái)流感疫苗研究的熱點(diǎn)，本文將從以下幾方面對(duì)流感

9、病毒樣顆粒疫苗的研究現(xiàn)況進(jìn)行綜述。1流感VLP的合成和釋放流行性感H病毒(influenzavirus)是有包膜的負(fù)鏈RNA病毒，在分類學(xué)上屬于正黏病毒科。流感病毒的結(jié)構(gòu)蛋白主要包括：基質(zhì)蛋白(Ml)、核糖核蛋白復(fù)合體和包膜上的3種跨膜蛋白(HA,NA,M2),流感病毒在受感染細(xì)胞的細(xì)胞膜上以出芽生殖的方式釋放出新的病毒顆粒y-刃。一種主流的流感病毒顆粒組裝的模型是基質(zhì)蛋白(Ml)與細(xì)胞膜上的“脂筏”區(qū)域連接，并與IIA與NA胞內(nèi)區(qū)相互作用，從而啟動(dòng)了病毒蛆裝和出芽的過(guò)程*?，F(xiàn)已報(bào)道的流感VLP表達(dá)系統(tǒng)包括：直組牛痘病毒;DNA質(zhì)粒-T7RNA聚合酶共轉(zhuǎn)染-表達(dá)牛痘病毒;重組DNA表達(dá)載體&q

10、uot;J；重:組桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞等。因桿狀病毒可在綠色蔬菜中發(fā)現(xiàn)旦不能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，重組桿狀病毒/昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)相比哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)有更好的安全性。在昆蟲(chóng)細(xì)胞中已經(jīng)合成的VLP有：表達(dá)HA,NA,Ml,M2任一種蛋白的流感VLP叫HA-NA-M1VLPm.叫HA-M1VLP心電鏡顯示，這些流感VLP直徑約80-120nm,有著流感病毒典型的HA穗狀花序3)。表1現(xiàn)己報(bào)道的流感病毒樣顆粒Table1Influenzavirus-likeparticleshavebeenreportedSubtypeComponentsImmuneeffectdetectReferenceHlN

11、i(A/PI</8/34)HA,MlA/PR/8/34,A/WSN/33Quanetal,(2007)HlN1(Pandemic1918Avims)HA,NA,Ml,M2A/swine/Iowa(H1N1)Malassovetal.(2007)HlNl(A/PR/8/34)HA,MlA/PR/8,A/PhilippinesWangetal,(2008)Hl+H3(A/PR/8/34+A/Aichi/2/68(X31)HA(HI+H3),MIA/PR/8/34,A/Aichi(X31),A/WSN,A/PhilippinesQuanetal.(2008)H3N2(A/Udoni)HA,Ml

12、A/HK/68(H3N2)Galarzaetal.(2005)H3N2(A/Udorn/72)HA,NA,Ml,M2一Iathametal.(2001)H3N2(A/Fujian/411/2002)HA,NA,MlHzItitersBrightetal.(2007)H5NIclade1(VN/04)+clade2(Indo/05)HA,NA,MlH5NIclade1(VN/04),clade2(lndo/05)Brightclal.(2008)U5NJclade2.1(Jndo/05)HA,NA,MlII5N1(Indo/05,VN03/04)Mahmoodetal.(2008)H5N1(cl

13、ades1+2)HA,NA.MlH5N1clade1(VN/04),clade2(Indo/05,WS/05,Anh/05)CrevarandRoss(2008)H5NIclade1(VN/04)HA,NA,MlH5N1(wildtype,VN/04)Kangelal.(2009)H5NI(Indo/05),HIM(A/NewCaledonia)HA,MlII5N1clade1(VN/04)D*Aoustelal.(2008)H5NIclade1(VN/04)+cladc2(lndo/()5)Gag,HA.NAA/Vietnam/1203/04Hayneselal.(2009)H5N1+H7N

14、1Gag,HA,NA,M2NeutralizingtitersSzecsietal.(2006)H5N3HA,NA.MlHA1(H5N3,A/duck/France)Preletal.(2008)H9N2(A/HK/1073/99)HA,NA,MlA/HK/1073/99Pushkoetal.(2005)U9N2(A/HK/1073/99)HA,NA,MlA/HK/1073/99Pushk。etal.(2007)但是，影響流感VLP形成的關(guān)鍵病毒成分仍然不清楚。Ml蛋白與膜內(nèi)HA,NA和M2蛋白相互作用，可能在病毒VLP的裝配及出芽中起重要作用。Zhang等研究表明，當(dāng)病毒糖蛋白胞內(nèi)段突變時(shí)，

15、病毒的出芽生殖被抑制。Chen等研究表明，流感病毒的HA和NA,而不是Ml,在流感VLP的合成、出芽和表達(dá)過(guò)程中是必須的。但當(dāng)Hel應(yīng)細(xì)胞(非293T細(xì)胞)被轉(zhuǎn)染入只表達(dá)Ml蛋白的DNA時(shí)，培養(yǎng)基的上清液中也發(fā)現(xiàn)了少量:的VLM；而缺乏HA或NA的流感VLP都已被合成,但釋放他們的細(xì)胞都表達(dá)基質(zhì)蛋白Ml,也提示了Ml在VLP合成中的重要作用不同研究產(chǎn)生的差異可能山于采用了不同的表達(dá)系統(tǒng)。每一種蛋白在VLP釋放過(guò)程中的具體作用還有待進(jìn)一步研究。2免疫機(jī)制VLP在形態(tài)上與真正病毒粒子相同或相似，作為顆粒性抗原可激活樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞，將其提呈給T,B淋巴細(xì)胞，從而有效地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)反

16、應(yīng):在免疫小鼠的脾細(xì)胞中，VLP以HA-特異性MHCI或MHCII-限制性多肽結(jié)合物方式刺激HA特異性CD4和CD8+細(xì)胞分泌Thl型(IFN-),IL2)和Th2型(IL-4JL-5)細(xì)胞因子【心】。免疫過(guò)VLP的小鼠可觀察到明顯的MHC1或MHCn型抗原肽刺激產(chǎn)生的IFN-7和IL-2,而rHA疫苗免疫則不會(huì)出現(xiàn)OCD4*T細(xì)胞比CD8,T細(xì)胞分泌更多的IL-4和工頊皿22】。提示VLP可同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生Thl和Th2型細(xì)胞免疫反應(yīng)。Zhang等凹研究表明,HAVLP免疫C57BL/6小鼠，可激活B2細(xì)胞活性.并產(chǎn)生以IgG2a為主的抗體。3已合成的流感VLP(表1)MINIVLPQuan等皿

17、(2007)合成的流感MMIAH1N1VLP(A/PR/8/34),具有抵抗同源和異源毒株(A/PR/8/34,A/WSN/33)的能力，而在肺組織中異源病毒滴度是同源病毒滴度的100倍，與發(fā)現(xiàn)較高的抗同源病毒中和抗體一致。用只含有Ml不含HA的VLP免疫小鼠后，只有不到20%的小鼠存活，且存活小鼠有嚴(yán)重的體質(zhì)13下降且檢測(cè)不到特異性抗體，提示HA在保護(hù)性免疫中有重要作用。當(dāng)用熱處理滅活HA活性之后的VLP免疫小鼠，也不能觀察到保護(hù)性免疫。因此，可認(rèn)為HA是VLP誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)性抗體的關(guān)鍵因素。3.1 H3N2VLPLatham等(2001)首先合成了HA-NA-M1-M2的H3N2VLP(A/

18、Udom/72)OGalarza等(2005)報(bào)道了含M1-IIA的H3N2VLP(A/Udom/72)的免疫效果，兩次肌注或鼻內(nèi)免疫含1HA的這種VLP,無(wú)論是否添加IL-12佐劑，都能使小鼠抵抗5倍于LD50(半數(shù)致死計(jì)量)的A/HongKong/68(H3N2)病毒的感染，表明流感VLP在引發(fā)HA抗體結(jié)合反應(yīng)能力與減毒活疫苗相似或更高。Bright等【(2007)合成了HA-NAH3N2VLP(A/Fujian/411/2002),肌注小鼠后血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HA1)顯示，比全病毒滅活疫苗產(chǎn)生更高水平的血清抗體且具有更廣泛的交叉保護(hù)活性。VLP可誘導(dǎo)產(chǎn)生1015倍于等量HA(可溶性rHA)的

19、血清抗體滴度，2倍于全病毒滅活疫苗的HAI抗體滴度，在雪貂中VLP也比rHA誘導(dǎo)產(chǎn)生更高的抗體滴度【。用HA-NAH3N2VLP(A/Fujian/411/2002)肌注BALB/c小鼠產(chǎn)生IgG2aJgG2b和IgGl三種主要的抗體，而滅活病毒疫苗主要誘導(dǎo)產(chǎn)生IgG2a和IgGl,很少出現(xiàn)IgG2b,而rHA主要誘導(dǎo)產(chǎn)生IgCW%H5N1VLP因?yàn)镠5N1型高致病性禽流感病毒能殺死雞胚,雖然通過(guò)修飾HA的多個(gè)氨基酸位點(diǎn)叫,或者利用反向遺傳工程技術(shù)將H1N1(A/PR/8/34)或其他減毒株的結(jié)構(gòu)蛋白編碼基因轉(zhuǎn)入，可以在雞胚中生產(chǎn)。叫,但相關(guān)研究及生產(chǎn)須要在生物安全3級(jí)(BSL-3)及以上條件

20、下進(jìn)行。而VLP疫苗克服了上述缺點(diǎn)，成為近年來(lái)高致病性流感病毒疫苗的研究熱點(diǎn)。自從1997年香港報(bào)道第一例人感染高致病性禽流感以來(lái)，高致病性禽流感病毒(HPAI)已經(jīng)被分為10個(gè)分化枝(clade0-9),具有型別間交叉保護(hù)作用的疫苗也備受關(guān)注。Bright等(2008)檢測(cè)了HA-NAclade2H5NIVLP(A/Indonesia/05/2005)的交叉保護(hù)免疫作用：兩組含有不同劑域HA(3»xg.600ng)的VLP在感染A/lndonesia/05/2005或clade1A/Vietnam/1203/2004的小鼠均引起更廣泛的細(xì)胞和體液免疫，而所有注射rHA疫苗的小鼠均發(fā)

21、生死亡或嚴(yán)重的體質(zhì)量降低。Mahmood等閔(2008)研究表明，兩次接種低劑量(0.6呻HA)的H5Nl(Indo_05)VLP疫苗能引起雪貂抗同種或異種clade1Viet_04病毒的免疫反應(yīng)。有趣的是,免疫的雪貂在10FLD50的病毒感染下，HAI反應(yīng)陰性但存活了下來(lái)。提示HPAI的HAI抗體滴度與保護(hù)性免疫的關(guān)系沒(méi)有季節(jié)性流感明顯。MLVGag蛋白和Ml蛋白都是VLP出芽生殖的必須AoHaynes等-,6'(2009)用桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)合成的GagH5N1VLP(A/Vietnam/1203/04或A/Indonesia/5/05)可誘導(dǎo)預(yù)先感染高致病性A/Vietn

22、am/1203/04的小鼠及雪貂產(chǎn)生保護(hù)性免疫。表明包含HA的CagVLP與MlVLP具有類似的免疫原性。植物表達(dá)系統(tǒng)因其安全性好且產(chǎn)量高，成為另外一種大量生產(chǎn)VLP的方法。Daoust等(2008)用本生煙類植物生產(chǎn)了H5VLP(lndo/05)o用這種VLP與鋁制佐劑混合肌注小鼠，可對(duì)感染低劑量(LD50)的A/Vietnam/1194/04(H5N1)產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)。但這種U5VLP在植物細(xì)胞中是否增強(qiáng)了生物學(xué)活性未被報(bào)道。3.2 H5N3VLPPrel等閔(2008)用重組桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)合成的HA-NAH5N3VLP(A/Duck/France/02166/2002)已

23、經(jīng)作為一種動(dòng)物疫苗在鴨身上測(cè)試。HAI實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性也證明了研制這種VLP亞單位疫苗具有現(xiàn)實(shí)的可行性O(shè)H7N1VLPH7亞型禽流感已有一例直接傳染人類的報(bào)道)。Judit，】(2006)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞293T,生成了HA-NA-M2(A/(：hicken/FPV/Rostock/1934(H7N1)或A/Thailand/KAN-1/04(H5N1)的逆轉(zhuǎn)錄GagVLP。兩次免疫后小鼠產(chǎn)生型特異性抗體，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生交義保護(hù)抗體“H9N2VLPPushko等5)(2005,2007)合成了用HA-NAH9N2VLP(A/HongKong/1073/99)o用10昭H9N2VLP在0和28d時(shí)

24、分別皮卜和肌注免疫小鼠，在100倍MID50(50%感染劑量)病毒感染F,實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量卜降少于對(duì)照組(對(duì)照組小鼠體質(zhì)量下降17%)o3.7二價(jià)(多價(jià))混合VLPQuan等啊(2()08)測(cè)試TH1-H3混合二價(jià)HAVLP的免疫原性，發(fā)現(xiàn)其保護(hù)譜符合現(xiàn)階段流感接種疫苗型特異性的要求。CrevarandRoss27K2008)研制T一種H5N1二價(jià)疫苗，用含有clade1和clade2H5(Viet_04和lndo_05)的HA混合物免疫小鼠兩次，可誘導(dǎo)抗clade1,2和dade2.3(A/Anhui/1/2005)的血凝抑制試驗(yàn)(IIAI)活性，但不能誘導(dǎo)抗clade2.2(A/Barhe

25、adedgoose/Qinghai/lA/2005)的HAI活性。只注射clade2VLP(Indo_05)可表現(xiàn)出一定的交叉保護(hù)作用，而只注射clade1VLP(Viet_04)在對(duì)抗clade2型病毒感染方面作用不顯著(實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量明顯降低)。表明二價(jià)H5N1VLP疫苗是有效的,且ciade2VLP比clade1VLP具有更廣泛的交又保護(hù)作用皿】(2009)的研究也表明：流感H5N1VLP(A/VietNam/1203/04)在小鼠中可引起長(zhǎng)效保護(hù)性免疫和記憶性B和T細(xì)胞反應(yīng)。Matassov等(2007)用昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)合成的由HA、NA(1918influenzaAvirus),以

26、及M2、Ml(A/Udorn,H3N2)組成的VLP,兩次鼻內(nèi)黏膜免疫，均能使感染A/Swine/iowa/15/30(H1N1)的小鼠產(chǎn)生保護(hù)性抗體。添加CpG寡脫氧核昔酸佐劑可以使小鼠上呼吸道的病毒滴度降低。4佐劑的使用-些研究表明，結(jié)合強(qiáng)力黏膜佐劑比如霍亂毒素M或大腸桿菌不耐熱腸毒素5明顯增強(qiáng)滅活疫苗的異種免疫活性，但由于這些佐劑可能對(duì)人體有潛在損害而限制了他們的使用。用Novasome(非磷脂脂質(zhì)體微粒)佐劑能明顯增強(qiáng)rllA可溶性蛋白的免疫原性，但對(duì)流感VLP沒(méi)有作用，可能與VLP高度特異免疫原性有關(guān))。也有人嘗試在VLP表面連接免疫刺激分子，如把DC-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子)通

27、過(guò)遺傳工程與VLP連接，可以增加VLP的免疫原性%】。loll樣受體也能通過(guò)膜結(jié)合形式與VLP連接】。HAH1N1VLP(A/PR/8)表面結(jié)合鞭毛蛋白也能明顯增強(qiáng)VI,P的免疫原性，同時(shí)也能提高其抗不同亞型的病毒的能力【如。5展望VLP疫苗以其安全性和抗病毒的有效性，成為近年研究的熱點(diǎn)，已經(jīng)有乙型肝炎病毒(HBV)部和人類乳頭瘤病毒(HPV)閉VLP疫苗上市。由于VLP不含核酸不能自主復(fù)制，不具有傳染性，并且能夠誘導(dǎo)交叉免疫中關(guān)鍵的細(xì)胞免疫應(yīng)答，可能具有更廣泛的抗感染譜，更適合老年人等高危人群)。但目前的研究雖然證實(shí)了流感VLP可以作為有效預(yù)防流感的疫苗，但都是臨床前實(shí)驗(yàn)，流感VLP疫苗的安

28、全性和效能還有待人類臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證?？乖瓢l(fā)生在流感流行的整個(gè)過(guò)程，研制有交又免疫活性的疫苗是應(yīng)對(duì)流感病毒抗原變異的關(guān)鍵。無(wú)佐劑的VLP疫苗已經(jīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出抗同源和近源H5N1病毒的能力U6Z,在雪貂中的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了流感VLP疫苗可誘導(dǎo)抗H5和H3的交叉保護(hù)反應(yīng)皿刀刖,但具體的免疫機(jī)制還不清楚。與季節(jié)性流感不同，HPAI的中和抗體濃度(或HAI滴度)與保護(hù)型免疫的強(qiáng)弱的關(guān)系不強(qiáng)網(wǎng),具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。通過(guò)基因工程技術(shù)修飾和抗原靶向技術(shù)可能會(huì)提高VLP疫苗的保護(hù)效率。流感疫苗的注射途徑也是影響疫苗效果的重要因素?，F(xiàn)有VLP流感疫苗注射途徑基本是通過(guò)鼻內(nèi)吸入或肌肉注射。由于流感

29、經(jīng)由呼吸道傳播，鼻內(nèi)吸入由于更容易引起黏膜免疫可能具有更廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)：1GrgacicEV,AndersonDA.Virus-iikeparticles:passporttoimmunerecognitionJ.Methods,2006.40(l)：60-65.2 KeimB.Controversyovercervicalcancervaccinespurssafetysurveillance!J.NatMed,2007,13(4)：392-393.3 ScheiffeleP,RietvcldA,WilkT,etal.Influenzavirusesselectorderedlip

30、iddomainsduringbuddingfromtheplasmamembraneJ.JBiolChen】，1999,274(4)：2038-2044.4 IathamT,GalarzaJM.Eonnationofwild-typeandchimericinfluenzavirus-likeparticlesfollowingsimultaneousexpressionofonlyfourstructuralproteinsJ.JVirol,2001,75(13):6154-6165.：5Gomez-PuertasP,AlboC,Perez-PastranaE,etal.Influenza

31、virusmatrixproteinisthemajordrivingforceinvirusbudding:J.JViml,2000,74(24)；11538-11547.一6WatanabeT,WatanabeS,NeumannG,etal.Immunogenicityandprotectiveefficacyofreplicationincompetentinfluenzavirus-likeparticlesJ.JVirol,2002,76(2):767-773.7AliA,AvalosRT,PonimaskinE,etal.Influenzavirusassembly：effecto

32、finfluenzavirusglycoproteinsonthemembraneassociationofMlprolein:J.JVirol,2000,74(18):8709-8719.8jChenBJ,LeserGP,MoritaE,etal.Influenzavirushemagglutininandneuraminidase,butnotthematrixprotein,arerequiredforassemblyandbuddingofplasmi(-<lerivedvirus-likeparticlesJ.JVirol,2007,81(13):7111-7123.9 Sze

33、csiJ,BosonB,JohnssonP,etal.Inductionofneutralisingantibodiesbyvirus-likeparticlesharbouringsurfaceproteinsfromhighlypathogenicH5N1andH7N1influenzavirusesJ.VirolJ,2006,3(l)：70-75.10 QuanFS,SteinhauerD,HuangC,etal.AbivalentinfluenzaVIPvaccineconferscompleteinhibitionofvirusreplicationinlungsJ.Vaccine,

34、2008,26(26):3352-3361.11 PushkoP,TumpcyTM,VanHoevenN,etal.Evaluationofinfluenzavirus-likeparticlesandNovasomeadjuvantascandidatevaccineforavianinfluenzaJ.Vaccine,2007,25(21)：4283-4290.12 BrightRA.CarterDM,DanilukS,etal.Influenzavirus-likeparticleselicitbroaderimmuneresponsesthanwholevirioninactivate

35、dinfluenzavirusorrecombinanthemagglutininJJ.Vaccine,2007,25(19):3871-3878.13*PushkoP,TumpeyTM,BuF,etal.InfluenzaviruslikeparticlescomprisedoftheHA,NA,andMlproteinsofH9N2influenzavirusinduceprotectiveimmuneresponsesinBAI.B/cmiceJ.Vaccine,2005,23(50):5751-5759.14QuanES,HuangC,CompansRW,etal.Virus-like

36、particlevaccineinducesprotectiveimmunityagainsthomologousandheterologousstrainsofinfluenzavirusJ.JVirol,2007,81(7):3514-3524.15jGalarzaJM,LathamT,CupoA.Virus-likeparticle(VLP)vaccineconferredcompleteprotectionagainstalethalinfluenzaviruschallengeJJ.ViralImmunol,2005,18(1):244-251.116JHaynesJR.Dokken

37、L,WileyJA,etal.Influenza-pseudolypcdGagvirus-likeparticlevaccinesprovidebroadprotectionagainsthighlypathogenicavianinfluenzachallengeJj.Vaccine,2009,27(4)：530-541.17 ZhangJ,LeserGP,PekoszA,etal.ThecytoplasmictailsoftheinfluenzavirusspikeglycoproteinsarerequiredfornormalgenomepackagingJ.Virology,2(X)

38、0.269(2):325-334.18 FauschSC,DaSilvaDM,KastWM.Differentialuptakeandcross-prcscntationofhumanpapillomavirusvinis-likeparticlesbydendriticcellsandLangerhanscellsJ.CancerRes,2003,63(13)：3478-3482.液5蕓一9JKudo-fM_.wFauschSCDas=vaDM-X»-Humandendri-icce=sarea2iv£cdbychimerichumanpap三omavirus-yp?-6

39、MrusJ-fkcpart-c-esandinduceep=opelspecifichumanTce=responsesinv=roJLJ_mmuno2001-66(10)“59-75924.2®日sTaD，LPan一ranaD<Sch三erreaLEftc-ofpreexfs-ingnexra一N-inga=ibodk,s0=-heaxI-umcrimmuneresponseinducedby.chimerichumanpap三omavimsvinlLikeparticlevaccines一J.virocgy200r290(2)“3503602二WarrinoDE-O一son

40、wcScarrowMre-aLHumanpap三omavirusL一一-21E7<.rus，=keparticlespa?.a=ym£urehumandendri-icce=sande=c=E7,specificT，he-perresponsesfmmpa=cn_sw=hcervica-=-raep=h3-E:Mcop-astt-orcervicalCMCC.r='v=ro-HumIm!。.2005.66(7)“7621772.22Br.gxR?CarterDM.Crevarce_aLcmss.crdeprcecuvcimmuneresponses_o=-fluenza

41、v-rusesw=hH5N1HAandNAe=c=lbyans-nuenza<.rus=kepanic一eJPLoSchx/2008,3(】)“e一5。123】ZhangscursRUM.e_aL<rus，=keparlic一evaccine*ac=va_esconven=ona-B2ce=sandpnmlaesBce=Tfrerc=ia-c-no一gG2aproducingpFsmace=sJM。二mmunoh2009-46(10)二9882001.，241lry3LiupK=mov>XaLRecombs-anls-fluenzaAvirusvaccinesfor-hepa

42、-hoge=.chumanA'HongKong、97(H5N-)viruses=Jmrc-DJ-1999-79(5)二1321=38.251RomanovaJKrcnnBMw®scheke-aLprec=.ca-evaca=onofarep-ica-o-ni-effck.n-in-nnmsa-DekaNSlH5Nl=-m_enzavaccine-J-PLoSone20094(6)“e598426JKarronRA)Ta-aa-KLukec-2.aLEva=a-c-nof_wo=ve£._enua-cdco-dadap-lH5N一influenzavirusvacci

43、nesinheal_hyadu=8E.vaccine.2009)27(36)“495314960.，27I-JcrevarCJ，RossTWE=c=£.o-nofpro-eedveimmuneresponsesusingabivarn-H5N1VLPvaccineLJ<ro一,20085(一)二3一|136281MahmoodK.Brigh-RAMy-eze-aLH5X一VLPvaccs-einducedpro-ec-c-n=,fbrrc-sage.ns-ThELchallengew=hhigzypahoge=.c一一5Nl5-flufnzavirusesJ.vaccine,2

44、00826(42)“5393539929JD.AOUS1M?Lavc.eP9CoMureMM.aLInfluenza<.rus，=keparti2.esproducedby-ransH-n-expressioninNfco-E-nabe=hamianainduceapm-ec-iveimmuneresponseage.nsLa一etha一vira-challengeinmiceJp-an-Bo-_echn=J,2008)6491(9)“93094p30pre-?>rGarRecE-eJes-in<AchievcmcnofavE-ninfluenzavirusi-ikepartic一es-ha-co=dbeusedasasubun=vacc-neagB.nslowpa-hogenfcavE-ninfluenzasm=n,一nducksJAVE-n?-=5-200837(5)“5-31520.3二KU3.ZJ,Ma=ve=BanksAVE-ninfluenzavirusisox_2fromawomanw