口服靈芝孢子油對(duì)小鼠的扶正及減毒作用研究

1、口服靈芝孢子油對(duì)小鼠的扶正及減毒作用研究 【關(guān)鍵詞】 靈芝孢子油；免疫,；環(huán)磷酰胺摘要：目的觀察靈芝孢子油的扶正減毒作用。方法以正常和 H22荷瘤小鼠為對(duì)象，通過檢測(cè)外周血 WBC數(shù)、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)來觀察口服靈芝孢子油(2.5，1.25，0.625 g/kg)對(duì)于環(huán)磷酰胺（Cy）化療及60Co放療的減毒作用；通過小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、血清溶血素測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì) H22荷瘤小鼠免疫功能的影響。結(jié)果靈芝孢子油中高劑量組均可明顯對(duì)抗由大劑量Cy、60Co照射造成的正常及荷瘤小鼠外周血WBC,骨髓有核細(xì)胞數(shù)，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)下降 (P0.01, P0.05)。靈芝孢子油各劑量均可顯著

2、提高荷瘤小鼠吞噬系數(shù)，中高劑量組可明顯提高荷瘤小鼠的血清半數(shù)溶血值（P0.01,P0.05)。結(jié)論靈芝孢子油可減低 Cy和 60Co所致的骨髓抑制毒性，并可顯著提高小鼠細(xì)胞和體液免疫功能。關(guān)鍵詞：靈芝孢子油； 免疫 ； 環(huán)磷酰胺Effect of Ganoderma lucidum Spores Oil on Reducing the Toxicity of Radiochemotherapy and Enhancing the Function of Immune System in MiceAbstract：ObjectiveTo study the effects of G. lucid

3、um spores oil on reducing the toxicity of the radiochemotherapy and enhancing the function of immune system in mice. Methods Study the effect of G. lucidum spores oil (at the dose of 2.5，1.25，0.725 g/kg) on reducing the toxicity of the Cy chemotherapy and 60Co radiotherapy by detecting the number of

4、 the peripheral blood leucocyte, the number of bone marrow karyota;spleen index, thymus index of normal mice and H22-bearing mice by carbon clearance test and serum erythrocytolysin test. Results It showed that G. lucidum spores oil at high (2.5 g/kg) and middle dose (1.25 g/kg) could significantly

5、relieve the decrease of the number of the peripheral blood leucocyte, the number of bone marrow karyota, spleen index and thymus index of normal mice and tumopbearing mice by Cy at a high dose and 60Co (P0.01, P0.05). G. lucidum spores oil at each dose could significantly increase macrophage phagocy

6、tic index; and at high and middle dose it can significantly enhance the serum erythrocytolysin level of H22-bearing mice (P0.01, P0.05).ConclusionG. lucidum spores oil could relieve the myelosuppression caused by Cy and 60 Co; enhance the cellular and humoral immune function of tumor H22-bearing mic

7、e.Key words：G. lucidum spores oil; Immunity; Cy 靈芝是祖國醫(yī)藥寶庫中的珍貴藥品，我國最早的藥學(xué)專著神農(nóng)本草經(jīng)將其列為“上品”。基于靈芝的確切臨床治療作用，近年來對(duì)其化學(xué)成分及作用機(jī)理進(jìn)行了大量的研究，對(duì)靈芝的生殖細(xì)胞孢子的藥用價(jià)值研究也日趨深入。以往的研究表明，靈芝孢子具有顯著的防癌、抗腫瘤作用，其功效是靈芝子實(shí)體的6070倍。本實(shí)驗(yàn)所用靈芝孢子油是利用超臨界 CO2流體萃取技術(shù)從靈芝破壁孢子中提取出來并濃縮富集而得，其各種有效成分（如三萜類）的含量均較傳統(tǒng)提取方法顯著提高。本實(shí)驗(yàn)主要研究其對(duì)荷瘤小鼠的免疫調(diào)節(jié)及對(duì)常規(guī)放化療的減毒作用，以期為靈芝

8、孢子油的臨床抗腫瘤輔助應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料 1.1 藥物靈芝孢子油，由廣州靈芝孢子油現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司提供，批號(hào)：050601，臨用前用豆油稀釋成所用濃度。云芝孢內(nèi)糖肽膠囊，南京老山藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：050104，規(guī)格：0.5 g21粒，臨用前用生理鹽水成所用濃度。注射用環(huán)磷酰胺，上海華聯(lián)制藥有限公司，規(guī)格：200 mg/瓶，批號(hào)：020804。1.2 瘤株與動(dòng)物H22小鼠肝癌細(xì)胞，由中科院上海藥物研究所提供。ICR小鼠，雌雄各半，1822 g，由中國藥科大學(xué)動(dòng)物室提供,合格證號(hào)：蘇動(dòng)質(zhì) SCXK（蘇）2002-0011。2 方法 2.1 靈芝孢子油對(duì)正常、H22荷瘤小鼠化療

9、(Cy)的減毒作用 取 ICR小鼠60只，按移植性腫瘤研究法1接種 H22實(shí)體瘤，24 h后隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)設(shè)：空白對(duì)照組，豆油對(duì)照組(20 ml/kg)，靈芝孢子油高、中、低劑量組(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig給藥，云芝胞內(nèi)糖肽膠囊組(1 g/kg)ig給藥。另取 ICR小鼠60只，不接種荷瘤，分組給藥方法同上。各組給藥1次/d，共7次，各組于給藥第4，5天（除空白組外），連續(xù)2 d ip Cy(100 mg/kg)，于停藥后24 h，各組眼眶靜脈取血，鏡檢外周血白細(xì)胞總數(shù)，同時(shí)摘取一側(cè)完整股骨、胸腺、脾臟，分別測(cè)定骨髓有核細(xì)胞數(shù)，稱胸腺、脾重，計(jì)算胸腺、脾臟系數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)處理(t檢驗(yàn))。 2.2 靈芝孢子油對(duì)正常小鼠、H22荷瘤小鼠60Co放療的減毒作用取 ICR小鼠60只，按移植性腫瘤研究法1接種 H22實(shí)體瘤，24 h后除空白對(duì)照組10只動(dòng)物外，其余50只小鼠進(jìn)行60Co照射，劑量為500 rad；60Co照射后動(dòng)物隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)設(shè)：空白對(duì)照組，豆油對(duì)照組(20 ml/kg)，靈芝孢子油高、中、低劑量組(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig給藥，云芝胞內(nèi)糖肽膠囊組(1 g/kg)ig給藥。另取 ICR小鼠60只，不接種荷瘤，除空白對(duì)照組10只動(dòng)物外，其余50只小鼠進(jìn)行60Co照射，劑量為500 rad；60 Co照射后動(dòng)物隨機(jī)分為5組，分組

11、及給藥方法同上。各組均給藥1次/d，共7次，于停藥后24 h，各組眼眶靜脈取血，鏡檢外周血白細(xì)胞總數(shù)，同時(shí)摘取一側(cè)完整股骨、胸腺、脾臟，分別測(cè)定骨髓有核細(xì)胞數(shù)，稱胸腺、脾重，計(jì)算胸腺、脾臟系數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。2.3 靈芝孢子油對(duì) H22荷瘤小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響取 ICR小鼠50只，按移植性腫瘤研究法1接種 H22實(shí)體型瘤。次日隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)設(shè)：豆油對(duì)照組(20 ml/kg)，靈芝孢子油高、中、低劑量組(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig給藥，云芝胞內(nèi)糖肽膠囊組(1 g/kg)ig給藥。共給藥11次。于末次給藥后24 h，尾靜脈注射印度墨水，注入后1 mi

12、n及5 min從小鼠眼眶后靜脈叢取血，立刻吹入 Na2CO3液中，于680 nm處比色，按下式計(jì)算廓清指數(shù)K及吞噬系數(shù) 值。所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))廓清指數(shù)K=(logOD1- logOD5)/(t5-t1)吞噬系數(shù)=(體重/肝脾合重)(K)1/3 2.4 靈芝孢子油對(duì) H22荷瘤小鼠體液免疫功能的影響取 ICR小鼠50只。按移植性腫瘤研究法1接種 H22實(shí)體型瘤。次日隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)設(shè)：豆油對(duì)照組(20 ml/kg) ig給藥，靈芝孢子油高、中、低劑量組(2.5,1.25,0.625 g/kg) ig給藥，云芝胞內(nèi)糖肽膠囊組(1 g/kg)ig給藥。共給藥11 d，于第7天，各組小

13、鼠腹腔注入綿羊紅細(xì)胞0.2 ml/只(20%)進(jìn)行初次免疫，末次給藥1 h后，取血，分離血清，測(cè)定并計(jì)算半數(shù)溶血值 HC50，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，比較差異的顯著性。1 徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第3版M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1758.2 Kastelan Z,Lukac J,Derezic D,et al.Lvmphocyte subsets,lymphocyte reactivity to mitogens,NK cell activity and neutrophil and monocyte phagocytic functions in patients with

14、 bladder carcinomaJ.Anticancer Res,2003,23(6D):5185.3 Van Sandick JW,Boermeester MA,Gisbertz SS,et al.Lymphocte subsets and T(h)1/T(h)2 immune responses in patients with adenocarcinoma of the oesophagus or oesophago gastric junction:relation to pTNM stage and clinical outcomeJ.Cancer Immumol Immunother,2003,52(10):617.4 Hadden JW.Immunodeficiency and cancer:prospects for correcti